同源性癌细胞膜包被的核酸-化疗药物复合物纳米粒子制造技术

本发明专利技术涉及纳米医药技术领域，特别地涉及寡核苷酸药物(反义核苷酸：ASO；小干扰核酸：siRNA)和化疗药物共组装的纳米粒子制备技术、同源性癌细胞膜包被及其在主动靶向肿瘤联合治疗和逆转肿瘤耐药性方面应用。本发明专利技术涉及的同源癌细胞膜包被的寡核苷酸和化疗药物共输送纳米药物体系是由寡核苷酸

【技术实现步骤摘要】
同源性癌细胞膜包被的核酸
‑
化疗药物复合物纳米粒子


[0001]本专利技术涉及医药
，具体涉及一种同源性癌细胞膜包被的核酸
‑
化疗药物复合物纳米粒子，特别地涉及用于肿瘤靶向联合治疗及逆转肿瘤耐药性的无载体核酸
‑
化疗药物复合物纳米粒子的制备方法以及该纳米粒子的同源性癌细胞膜包被的方法。

技术介绍

[0002]恶性肿瘤是目前影响人类生存和健康的最主要疾病之一，由于肿瘤发生发展、迁移及耐药机制的复杂性，单一的化学药物治疗(化疗)或寡核苷酸治疗均存在较多缺陷，难以满足治疗的需求。近年来，化学治疗与寡核苷酸治疗联合治疗可以降低给药剂量及药物的毒副作用，增强抗肿瘤效果，成为研究热点(Adv.Drug Deliver.Rev.2016,98,3
‑
18；Adv.Drug Deliver.Rev.2016,98,41
‑
63)。然而，一般化疗药物由于水溶性差、无靶向性及耐药性等问题；寡核苷酸药物则存在入胞难、肾清除率高及易被核酸酶降解等问题，制约其临床应用(Chem.Rev.2015,115,11043
‑
11078)。
[0003]因此，如何突破生理屏障(Acc.Chem.Res.2019,52,1750
‑
1762)，解决抗癌药物及核酸的实体瘤靶向富集，降低药物的毒副作用，实现联合治疗，逆转肿瘤耐药性，是临床亟需解决的问题。随着纳米科技的发展，在过去的几十年里，智能响应性药物输送体系的研究报道层出不穷，如有机
‑
无机纳米粒子、胶束、囊泡、脂质体、介孔无机材料(Biomater.Sci.,2015,3,1035
‑
1049；Angew.Chem.Int.Ed.2019,58,8804
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8808)等载体共负载核酸和化疗药物，用于肿瘤的联合治疗。通过共输送的策略，可以增强化疗药物在肿瘤部位富集，减少化疗药物的剂量及毒副作用，提高核酸在体内运输过程中的稳定性，并提高抗肿瘤效果，达到协同治疗的目的。然而，由于小分子化疗药物与大分子核酸存在显著的理化性质差异，同时，外源性载体的引入，在代谢过程中容易引起器官毒性和炎症，如何构建有效的精准共递送体系成为两者联合应用的重要挑战之一，也是制约其临床应用的关键因素之一。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种利用同源癌细胞膜包膜的方法包裹核酸
‑
化疗药物复合物纳米粒子，尤其是一种利用静电复合的方法无载体化制备核酸和化疗药物复合物纳米粒子，并通过调控复合物纳米粒子的尺寸和分散度的方法，提高核酸和化疗药物的递送效率，增强联合治疗效果，实现核酸和化疗药物的肿瘤靶向治疗。
[0005]本专利技术的目的之二在于提供一种基于同源性癌细胞膜包被的核酸
‑
化疗药物复合物纳米粒子的制备方法，以解决现有技术中核酸与化疗药物共输送中的外源性载体带来的生物毒性及缺乏肿瘤病灶部位的靶向富集性的问题。
[0006]本专利技术的第三个目的是提供一种基于癌细胞膜包裹的核酸
‑
化疗药物的复合物纳米粒子在肿瘤联合治疗及逆转肿瘤耐药性方面的用途。
[0007]本专利技术的目的通过以下技术方案实现：
[0008]一种同源性癌细胞膜包被的核酸
‑
化疗药物复合物纳米粒子，包括内核和外壳，所
述内核为核酸
‑
化疗药物构建的复合物纳米粒子，所述外壳由同源性癌细胞膜组成，其中，所述内核是由带负电荷的寡核苷酸和具有共轭刚性结构并带正电荷的化疗药物通过静电相互作用组装而成。
[0009]所述化疗药物包括阿霉素(DOX)、米托蒽醌(Mito)、阿美蒽醌、匹杉琼、拓扑替康、埃克替尼、阿贝西利、来那替尼、阿法替尼中的一种或多种。
[0010]所述寡核苷酸包括siRNA、ASO。
[0011]所述的寡核苷酸酸是长度为19
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25个碱基对的siRNA或长度为30个碱基以内的ASO。
[0012]所述的ASO包括如下序列中的一种：
[0013][0014][0015]所述siRNA包括如下序列中的一种：
[0016][0017]所述的癌细胞膜来源于人源性癌细胞，所述人源性癌细胞包括胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肾癌、肺癌、肝癌、宫颈癌或结直肠癌。
[0018]本专利技术还提供一种如上所述的同源性癌细胞膜包被的核酸
‑
化疗药物复合物纳米粒子的制备方法，包括以下步骤：
[0019]步骤1、制备复合药物纳米粒子内核：将寡核苷酸药物制备成寡核苷酸药物溶液，将化疗药物制备成化疗药物溶液；将寡核苷酸药物溶液滴加到化疗药物溶液中，制备得到核酸
‑
化疗药物复合物纳米粒子；
[0020]步骤2、提取癌细胞膜：癌细胞通过胰酶消化，加入带有血清的培养基中离心，PBS重悬洗涤离心；加入蛋白酶抑制剂裂解；上清液在细胞破碎仪上超声至澄清为止，再离心弃沉淀，上清液进一步高速离心后弃上清，PBS重悬，收集的沉淀即为癌细胞膜；
[0021]步骤3、将步骤2制备的癌细胞膜与步骤1制备的核酸
‑
化疗药物复合物纳米粒子混合溶于水中，涡旋处理，通过过滤膜反复挤压，制得同源性癌细胞膜包被的核酸
‑
化疗药物复合物纳米粒子。
[0022]所述的同源性癌细胞膜包被的核酸
‑
化疗药物复合物纳米粒子在制备抗肿瘤药物中的用途也属于本专利技术的保护范围
[0023]所述的同源性癌细胞膜包被的核酸
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化疗药物复合物纳米粒子在制备化疗联合免疫治疗抗肿瘤药物中的应用也属于本专利技术的保护范围。
[0024]所述的同源性癌细胞膜包被的核酸
‑
化疗药物复合物纳米粒子在逆转肿瘤耐药性中的应用也属于本专利技术的保护范围。
[0025]所述核酸
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化疗药物复合物纳米粒子的粒径小于200nm。
[0026]所述癌细胞膜为同源性癌细胞膜，可以提供复合物纳米粒子同源归巢靶向功能。
[0027]上述的基于同源癌细胞膜包被的核酸
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化疗药物复合物纳米粒子的制备方法，包括以下步骤：
[0028]本专利技术所制备的基于同源癌细胞膜包被的核酸
‑
化疗药物复合物纳米粒子具有化疗与基因治疗双重治疗作用，可以实现肿瘤联合治疗及逆转肿瘤耐药性，外壳的同源性癌细胞膜，具有良好的肿瘤归巢靶向性能，实现肿瘤的靶向富集。
[0029]本专利技术利用正电性的药物分子负载寡核苷酸构建核酸
‑
化疗药物复合物纳米粒子，为提高纳米粒子的稳定性及靶向性，利用内源性的同源癌细胞膜包裹复合物纳米粒子，实现其在肿瘤的靶向核酸和化疗药物联合治疗及逆转肿瘤耐药性领域的应用。
[0030]本专利技术涉及纳米医药
，特别地涉及寡核苷酸药物(反义核苷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同源性癌细胞膜包被的核酸
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化疗药物复合物纳米粒子，其特征在于，所述同源性癌细胞膜包被的核酸
‑
化疗药物复合物纳米粒子包括内核和外壳，所述内核为核酸
‑
化疗药物构建的复合物纳米粒子，所述外壳由同源性癌细胞膜组成，其中，所述内核是由带负电荷的寡核苷酸和具有共轭刚性结构并带正电荷的化疗药物通过静电相互作用组装而成。2.根据权利要求1所述的同源性癌细胞膜包被的核酸
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化疗药物复合物纳米粒子，其特征在于，所述化疗药物包括阿霉素(DOX)、米托蒽醌(Mito)、阿美蒽醌、匹杉琼、拓扑替康、埃克替尼、阿贝西利、来那替尼、阿法替尼中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的同源性癌细胞膜包被的核酸
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化疗药物复合物纳米粒子，其特征在于，所述寡核苷酸包括siRNA、ASO。4.根据权利要求1所述的同源性癌细胞膜包被的核酸
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化疗药物复合物纳米粒子，其特征在于，所述的寡核苷酸是长度为19
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25个碱基对的siRNA，或长度为30个碱基以内的ASO。5.根据权利要求4所述的同源性癌细胞膜包被的核酸
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化疗药物复合物纳米粒子，其特征在于，所述的ASO包括如下序列中的一种：Her2 antisense：SEQ ID NO:1Bcl
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2antisense：SEQ ID NO:2Bcl
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2antisense：SEQ ID NO:3Bcl
‑
2antisense：SEQ ID NO:4Bcl
‑
2/xL antisense：SEQ ID NO:5P
‑
gp antisense：SEQ ID NO:6P
‑
gp antisense：SEQ ID NO:7KRAS antisense：SEQ ID NO:8EGFR antisense：SEQ ID NO:9EGFR antisense：SEQ ID NO:10EGFR antisense：SEQ ID NO:11EGFR antisense：SEQ ID NO:12EGFR antisense：SEQ ID NO:13EGFR antisense：SEQ ID NO:14EGFR antisense：SEQ ID NO:15EGFR antisense：SEQ ID NO:16HER3 antisense：SEQ ID NO:17P5...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜德岳，朱利娟，陈天保，徐杰，黄卫，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：