用于基因治疗的金脂质纳米颗粒制造技术

本发明专利技术提供了包括金并且可用作用于转染不同类型核酸的载体的固体脂质纳米颗粒(SLN)。还公开了用于获得这样的SLN的不同方法。法。法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于基因治疗的金脂质纳米颗粒


[0001]本专利技术涉及基因治疗领域。特别地，本专利技术提供了可用作核酸转染载体的固体脂质纳米颗粒(SLN)，以及用于获得所述SLN的方法和包括所述SLN的药物组合物。

技术介绍

[0002]在过去的几十年中，为了在体外和体内调节基因表达，已经开发了广泛的用于将核酸转移到细胞中的试剂和技术。
[0003]特别是，已经鉴定了许多参与病理过程的基因，并因此基因治疗被视为一种非常有前途的治疗工具以用于逆转所述病理中的遗传改变，这包括例如由单个基因缺陷引起的常染色体隐性疾病，例如囊性纤维化、血友病、法布里病(Fabry disease)；常染色体显性疾病；一些癌症；HIV和其他传染病；炎性疾病；或眼科疾病，诸如视网膜劈裂症等等。
[0004]为了开发基因治疗产品，不仅要考虑待治疗的疾病和待给药的治疗性核酸，核酸的递送方法(即基因的给药系统)也起着至关重要的作用。所使用的遗传载体必须能够穿透靶细胞的细胞膜，并保护核酸免受酶降解，以及最终必须在细胞内的靶位点处释放核酸。
[0005]用于核酸的给药系统可分为病毒或非病毒载体。
[0006]病毒载体是最有效的，但具有较大的免疫原性和致癌性问题。另一个缺点是它们只能包括小型基因。
[0007]因此，在过去几年中，许多重点已放在开发非病毒载体上，这提供了一种更安全且更通用的替代方案。在各种非病毒基因载体中，已提出基于脂质的系统作为有前景的平台。这些系统缺少在病毒中存在的免疫原性蛋白，并且通常可以有力地浓缩核酸，并且还通常相对容易制备。然而，它们的转染效力或它们提供的基因表达水平通常仍大大低于病毒载体。
[0008]在过去的几十年里，已经开发了不同类型的基于脂质的转染系统。
[0009]二十多年前，脂质体被引入作为用于递送用于基因治疗的核酸的载体，并且迄今为止仍然代表最广泛研究的用于基因递送的载体。用于基因递送的脂质体通常是纳米级的，并且由具有被脂质双层膜包围的水性内腔的球形囊泡定义。然而，这些系统并非没有稳定性和功效问题。
[0010]最近开发了固体脂质纳米颗粒(SLN)，目的尤其是解决上述脂质体基因转染背后的问题。虽然共有脂质成分，但SLN在结构上不同于脂质体。SLN是球形颗粒，具有由表面活性剂稳定的固体脂质核心基质。根据脂质和表面活性剂组分的选择以及制备方法，SLN可用于容纳亲水性和疏水性药物二者。本专利技术人的欧洲专利EP 2460516 B1描述了适合作为基因治疗载体的SLN。
[0011]尽管最近取得了进展，但始终需要对现有系统的改进，且特别是非常需要推进现有技术载体在转染和表达效率方面和/或在载体的物理性质方面的能力的基因递送平台。

技术实现思路

[0012]本专利技术人现已发现，将金与SLN一起使用在转染和表达效率方面和/或在SLN的物理性质方面具有很大的优势。
[0013]虽然过去曾提出过在脂质体的背景下使用金，但通常是为了为其水性核心提供稳健性并因此提供稳定性，据专利技术人所知，从未有人建议将其用于SLN，SLN与脂质体相反，不需要核心稳定，因为它们已经拥有固体脂质核心。然而，如上所述，已令人惊讶地发现金仍然可以有利地用于SLN载体。
[0014]因此，在第一方面，本专利技术涉及一种SLN，其包括：
[0015]‑
在核心处的在室温下为固体的脂质；
[0016]‑
阳离子表面活性剂；
[0017]‑
非离子表面活性剂；
[0018]‑
金；以及
[0019]‑
核酸。
[0020]本专利技术人还惊奇地发现，制备本专利技术第一方面的SLN的方法可以对SLN的上述转染和表达效率和/或物理性质产生影响，因此具有很大的通用性以靶向不同的多种类型的细胞。
[0021]因此，本专利技术的第二方面涉及用于制备根据本专利技术的第一方面的SLN的方法(以下称为“方法Au”)，该方法包括：
[0022]a)制备前体SLN的悬浮液，所述前体SLN包括：
[0023]‑
在所述前体SLN的核心处的在室温下为固体的脂质；
[0024]‑
阳离子表面活性剂；以及
[0025]‑
非离子表面活性剂；
[0026]b)制备溶液，所述溶液包括：
[0027]‑
核酸；以及
[0028]‑
金；
[0029]c)将步骤(a)中获得的前体SLN的悬浮液与步骤(b)中获得的溶液混合。
[0030]类似地，本专利技术的第三方面涉及用于制备根据本专利技术的第一方面的SLN的另一种方法(以下称为“方法Oro”)，该方法包括：
[0031]a)制备前体金SLN的悬浮液，所述前体金SLN包括：
[0032]‑
在核心处的在室温下为固体的脂质；
[0033]‑
阳离子表面活性剂；
[0034]‑
非离子表面活性剂；以及
[0035]‑
金；
[0036]b)制备包括核酸的溶液；
[0037]c)将步骤(a)中获得的前体金SLN的悬浮液与步骤(b)中获得的溶液混合。
[0038]同样地，本专利技术还提供了包括本专利技术第一方面的SLN的药物组合物。
[0039]在另一方面，本专利技术涉及本专利技术第一方面的SLN用作药物的用途，并且更特别地用于基因治疗的用途。
附图说明
[0040]图1描绘了根据本申请实施例1中描述的Turkevich方法获得的多个金纳米颗粒。
[0041]图2图示了根据本专利技术的多个SLN。特别地，其为根据本申请的实施例9的多个SLN_Au
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P
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HA纳米颗粒的TEM图像。
[0042]图3显示了用对比制剂(a)SLN
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P
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HA
‑
mRNA；或用根据本专利技术的制剂(b)SLN_Au
‑
P
‑
HA
‑
mRNA、(c)SLN_Au
‑
P
‑
DX
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DNA或(d)SLN_oro
‑
P
‑
DX
‑
DNA进行局部处理后的角膜组织的免疫荧光染色图像。圈起来的区域标识GFP荧光。
具体实施方式
[0043]在本专利技术的上下文中，术语“固体脂质纳米颗粒”或“SLN”是指包括亲脂性脂质核心的结构，该亲脂性脂质核被包封该核心的亲水相包围。
[0044]特别地，本专利技术涉及根据本专利技术的多个SLN。这样的多个SLN在本文中也被称为本专利技术的“系统”。本文针对本专利技术的SLN描述的实施方式被理解为同样适用于多个SLN。术语“多个”是指在实践中通常用于存储或给药于受试者的任何数量的SLN，并且范围可以从少至102到任何对于预期目的合理的数量，例如治疗有效但无毒的量的SLN。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.固体脂质纳米颗粒(SLN)，包括：
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在所述固体脂质纳米颗粒的核心处的在室温下为固体的脂质；
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阳离子表面活性剂；
‑
非离子表面活性剂；
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金；以及
‑
核酸。2.根据权利要求1所述的SLN，还包括具有净正电荷的肽。3.根据权利要求2所述的SLN，其中，所述肽是鱼精蛋白。4.根据权利要求1至3中任一项所述的SLN，还包括多糖。5.根据权利要求4所述的SLN，其中，所述多糖是右旋糖酐。6.根据权利要求4所述的SLN，其中，所述多糖是糖胺聚糖，优选地所述糖胺聚糖是透明质酸。7.根据权利要求1至6中任一项所述的SLN，其中，所述金吸附在所述SLN的表面上。8.根据权利要求1至7中任一项所述的SLN，其中，所述金存在于围绕所述SLN的脂质核心的所述SLN的亲水相中。9.根据权利要求1至8中任一项所述的SLN，其中，所述金是直径范围为1至50nm的金纳米颗粒。10.悬浮液，包括分散在悬浮介质中的多个如权利要求1至9中任一项所定义的固体脂质纳米颗粒。11.用于制备如权利要求1至9中任一项所定义的SLN的方法，包括：a)制备前体SLN的悬浮液，所述前体SLN包括：
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在所述前体SLN的核心处的在室温下为固体的脂质；
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阳离子表面活性剂；以及
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非离子表面活性剂；b)制备溶液，所述溶液包括：
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核酸；
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金；以及
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如果待获得的SLN中需要的话，具有净正电荷的肽和/或多糖；c)将步骤(a)中获得的前体SLN的悬浮液与步骤(b)中获得的溶液混合。12.根据权利要求11所述的方法，其中，步骤a)包括：(i)制备包括在有机溶剂中的所述在室温下为固体的脂质的溶液；(ii)制备包括所述阳离子表面活性剂和所述非离子表面活性剂的水性溶液；(iii)将水性溶液(ii)添加到有机溶液(i)中，并且对所得混合物进行搅拌直至得到乳液；以及(iv)蒸发所述有机溶剂。13.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿纳，
申请(专利权)人：巴斯克大学，
类型：发明
国别省市：