复合片球菌制剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于微生物应用技术领域，公开了一种复合片球菌制剂及其制备方法和应用，该制备方法包括以下步骤：将复合片球菌颗粒与填充料混合，搅拌，粘连，过筛挤压，取筛下物干燥，得到复合颗粒层；将浆料A包裹在复合颗粒层的表面，冷却，得到隔水层包裹复合颗粒层；将网丝剂加热熔融，送至喷丝机喷出网丝，粘附在隔水层包裹复合颗粒层的表面，得到网纹层；将网纹层降温，加入抑菌粉和造孔剂混合，继续冷却，再喷覆浆料B，加热，冷却，得到复合片球菌制剂。本发明专利技术通过制备得到复合颗粒层、隔水层、网纹层、微孔层四部分层级结构，利用不同层级实现不同的功能，且各个层级间紧密结合，得到多功能的复合片球菌制剂。片球菌制剂。片球菌制剂。

【技术实现步骤摘要】
复合片球菌制剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于微生物应用
，具体涉及复合片球菌制剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]目前，全球范围内大部分经济和商业上重要的鱼（虾）类群遭到破坏或过度捕捞，又面临水产品消费日益增长的需求，高产出率的水产养殖不仅有助于满足水产品消费的需求，还同时能源源不断的补偿一些稀缺的水产品资源，因此得到了水产行业的重视，发展比较迅速。目前来看，水产养殖产品的产量已经超过渔业捕捞量，成为水产品的主要来源，且越来越朝向集约型水产养殖的发展。
[0003]然而，在集约型水产养殖尤其是在大规模的集约型水产养殖中，由于水生物种与周围环境存在密切的互动情况，水产养殖中的微生物群对它们的健康和发育有直接影响。例如不良水环境流入养殖区时，鱼类可能会接触到各种传染性细菌疾病，在集约型水产养殖中极容易爆发并造成的严重养殖经济损失，也影响了水产养殖进行和限制了行业的可持续性发展。
[0004]当前，细菌性鱼类疾病在全球许多国家造成严重的养殖经济损失，弧菌病就是最常见的细菌性鱼类疾病之一，影响范围涉及重要的养殖虾、全球性的海洋鱼类和淡水鱼类等。虽然抗生素的使用能达到防治细菌性病原体，但是不加节制地选择抗生素进行预防，将通过食物链传播到陆地的风险，并最终会进入人体中并积累，此外，不加区分地使用抗生素会阻碍鱼类肠道微生物群中有益微生物的活性，改变微生物系统、破坏水环境和生理过程、降低鱼类的免疫能力和生鱼品质。
[0005]在追求高品质、高产出养殖鱼类的需求下，可持续和环境友好的水产养殖方式是未来养殖发展的主要目标之一。总之，在避免抗生素使用的前提，同时可用于抑制和控制水产养殖中弧菌性病原体，此外，营养物质量以及浮游微生物群接触水环境和动物肠道微生物群之间的相似性、关联性密切，也是鱼类中肠道微生物群的决定因素，改善营养物质质量、提高鱼类生存的水环境来达到预防营养环境弧菌病爆发也是重要的措施。因此急需一种多功能类型的复合球菌制剂用于解决上述问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种复合片球菌制剂及其制备方法和应用，该复合片球菌制剂具备多层结构、适宜温度范围广，且工艺简单、可长期泡水、适合养殖户自用的新型水产养殖用复合片球菌制剂。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种复合片球菌制剂的制备方法，包括以下步骤：（1）将复合片球菌颗粒与填充料混合，搅拌，粘连，过筛挤压，取筛下物干燥，得到复合颗粒层；
（2）将浆料A包裹在所述复合颗粒层的表面，冷却，得到隔水层包裹复合颗粒层；（3）将网丝剂加热熔融，送到喷丝机中喷出网丝，粘附在所述隔水层包裹复合颗粒层的表面，得到网纹层；（4）将所述网纹层的表面温度降至40
‑
50℃，加入抑菌粉和造孔剂混合，继续冷却，再喷覆浆料B，加热至50
‑
60℃，冷却，得到复合片球菌制剂；所述浆料A包括玉米淀粉胶、羧甲基纤维素、丙三醇；所述浆料B包括黄原胶、木薯淀粉、丙三醇。
[0008]优选地，步骤（1）中，所述复合颗粒层中含有至少一枚复合片球菌颗粒。
[0009]进一步优选地，所述复合颗粒层中含有二至四枚颗粒。
[0010]优选地，步骤（1）中，所述填充料是由猪浆粉、棉籽蛋白、海藻酸钠和水组成。
[0011]优选地，步骤（1）中，所述复合片球菌颗粒的制备过程为：将有效活菌数为0.5~8
×
108CFU/mL的片球菌、有效活菌数为0.01~2
×
108CFU/mL的丁酸梭菌、有效活菌数为0.01~1
×
108CFU/mL的贝莱斯芽孢杆菌、有效活菌数为0.01~1
×
108CFU/mL的枯草芽孢杆菌、20~100kg的基质料进行混合，喷雾造粒，即得。
[0012]进一步优选地，所述基质料是由猪浆粉、豆渣、棉籽蛋白、磷酸二氢钙、丁酸钠、维生素、羧甲基纤维素钠、鸡油按质量比为（5~20）：（5~20）：（20~40）：（1~3）：（0.1~0.8）：（0.01~0.03）：（0.01~0.05）：（1~3）组成。
[0013]更优选地，所述猪浆粉的制备步骤为：（1）将猪骨、猪内脏粉碎，过筛，加入乙醇混合，在55~70℃下进行蒸发，再加入脱脂酶水混合，分离，浓缩，得到浓缩液；（2）将所述浓缩液与碱性蛋白酶、胰蛋白酶混合，在45~60℃下进行处理3~8h，得到酶分解产物，负压浓缩，干燥，得到猪浆粉。
[0014]进一步优选地，所述片球菌制备过程，包括以下步骤：将乳酸菌进行用MRS液体培养基活化，稀释，得到2.5
×
108CFU/mL菌液，接种于MRS液体培养基中，在37℃下培养24 h，于4℃下离心、过滤，取乳酸菌上清液，加入牛津杯孔中，以菌A为指示菌，且指示菌的接种浓度在0.1~2
×
10
8 CFU/mL、体积均为100μL，筛选出对各指示菌有明显抑菌圈的菌株，并在37℃下培养12小时，利用十字交叉法测量透明圈直径D，筛选各指示菌有明显抑菌圈的菌株；所述菌A为弧菌、气单胞菌、纤维菌、链球菌其中至少一种。
[0015]更优选地，所述MRS液体培养基包括以下物质：蛋白胨10.0g/L，牛肉浸粉8.0g/L，酵母浸粉4.0g/L，葡萄糖 20.0g/L，磷酸氢二钾2.0g/L，柠檬酸氢二铵2.0g/L，乙酸钠5.0 g/L，硫酸镁0.2g/L，硫酸锰0.04 g/L，吐温80.0 g/L。
[0016]进一步优选地，所述片球菌、丁酸梭菌、贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌均用MRS液体培养基活化后，分别挑取各平板菌苔上的菌种于MRS培养基中，培养40
‑
42h，菌液经3000
‑
3500r/min离心处理10
‑
30 min、洗涤、沉淀，然后将菌体沉淀悬于磷酸盐平衡生理盐水缓冲溶液中，经50倍稀释后，吸取0.1mL稀释液均匀涂布于固体培养基上，生化培养箱倒置培养48 h后计数，根据可见分光光度计600nm波长处测定细菌溶液的光密度值（OD600值），与悬液中活菌数量的线性关系，在后面的养殖试验中直接用OD600值计算菌液中菌数量。
[0017]优选地，步骤（2）中，所述浆料A是由玉米淀粉胶、羧甲基纤维素、丙三醇按质量比为（30~50）：（10~15）：（1~5）混合，在75~85℃下加热糊化得到。
[0018]优选地，步骤（2）中，所述包裹的次数为3
‑
10次。
[0019]优选地，步骤（3）中，所述熔融的温度为80~85℃。
[0020]优选地，步骤（3）中，所述网纹层的具体制备步骤为：将网丝剂加热至80~85℃熔融得到网丝液，送至喷丝机的喂料单元，喂料单元挤出网丝液，送至计量单元，再送至熔喷单元，熔喷单元的喷丝头喷出网丝，将网丝粘附在滚动的已被隔水层包裹的复合片球菌制剂的表面。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合片球菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将复合片球菌颗粒与填充料混合，搅拌，粘连，过筛挤压，取筛下物干燥，得到复合颗粒层；（2）将浆料A包裹在所述复合颗粒层的表面，冷却，得到隔水层包裹复合颗粒层；（3）将网丝剂加热熔融，送到喷丝机中喷出网丝，粘附在所述隔水层包裹复合颗粒层的表面，得到网纹层；（4）将所述网纹层的表面温度降至40
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50℃，加入抑菌粉和造孔剂混合，继续冷却，再喷覆浆料B，加热至50
‑
60℃，冷却，得到复合片球菌制剂；所述浆料A包括玉米淀粉胶、羧甲基纤维素、丙三醇；所述浆料B包括黄原胶、木薯淀粉、丙三醇。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述复合片球菌颗粒的制备过程为：将有效活菌数为0.5~8
×
108CFU/mL的片球菌、有效活菌数为0.01~2
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108CFU/mL的丁酸梭菌、有效活菌数为0.01~1
×
108CFU/mL的贝莱斯芽孢杆菌、有效活菌数为0.01~1
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108CFU/mL的枯草芽孢杆菌、20~100kg的基质料进行混合，喷雾造粒，即得。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述基质料是由猪浆粉、豆渣、棉籽蛋白、磷酸二氢钙、丁酸钠、维生素、羧甲基纤维素钠、鸡油按质量比为（5~20）：（5~20）：（20~40）：（1~...

【专利技术属性】
技术研发人员：何日宽，邱明尧，
申请(专利权)人：广东顺德鼎一生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：