一种靶向测序方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开一种靶向测序方法及试剂盒。本发明专利技术通过加入化合物和杂交促进剂使得杂交时间大大缩短，在保持较高的特异性与均一性的基础上，变性时间由传统的10分钟减少为30秒，杂交时间由16小时以上降低至0.5小时，探针富集时间由45分钟缩短至20分钟。时间由45分钟缩短至20分钟。时间由45分钟缩短至20分钟。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向测序方法及试剂盒
[0001]本申请是申请日为2020年08月31日，申请号为CN202010895989.2，专利技术名称为用于使探针与文库快速杂交的方法和试剂盒的分案申请。


[0002]本专利技术涉及基因测序领域，具体地涉及一种靶向测序方法及试剂盒。

技术介绍

[0003]高通量测序技术兼备高通量和高准确性优势，正在逐步改变传统临床诊断领域，包括遗传病辅助诊断、肿瘤用药伴随诊断以及病原体检测等方面。在高通量测序技术中，靶向测序技术是应用最广的技术之一，具有准确，经济等多种特点。
[0004]靶向测序技术分为三类，包括基于PCR原理的扩增子技术(Amplicon)，基于杂交原理的捕获技术(Capture)以及基于杂交、延伸和连接原理的分子倒置探针技术(MIP)。上述方法具有各自的应用场景，Ampliocn受限于覆盖均一性，适用于较小目标区域的靶向测序、而Capture则不受目标区域尺寸的限制，已广泛应用于肿瘤伴随诊断、无创单基因病诊断、病原体检测等领域。
[0005]捕获技术也具有一定的局限性，例如操作较为繁琐本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于使探针与文库快速杂交的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)使探针与文库在杂交缓冲液中接触；(2)在探针与文库结合形成复合体后，利用经磁珠清洗缓冲液清洗并活化的磁珠经链霉亲和素捕获复合体；(3)利用清洗液对与链霉亲和素结合的复合体进行清洗；(4)利用PCR反应富集与探针结合的目标文库，然后纯化，随后进行高通量测序。2.根据权利要求1所述的用于使探针与文库快速杂交的方法，其特征在于，使探针提前加入杂交缓冲液，而不是在文库变性后加入杂交缓冲液。3.根据权利要求2所述的用于使探针与文库快速杂交的方法，其特征在于，所述文库与所述探针的变性温度为92
‑
98℃，变性时间为30秒至2分钟。4.根据权利要求1所述的用于使探针与文库快速杂交的方法，其特征在于，所述探针为5
’
生物素修饰的单链DNA，其长度为110
‑
130nt。5.根据权利要求1所述的用于使探针与文库快速杂交的方法，其特征在于，所述杂交缓冲液包括柠檬酸钠缓冲液、0.8
‑
1.2M甜菜碱、0.8
‑
1.2M四甲基氯化铵、4
‑
6％重量/体积比的硫酸葡聚糖、18
‑
44体积％的甲酰胺。6.根据权利要求1所述的用于使探针与文库快速杂交的方法，其特征在于，所述探针与所述文库在杂交缓冲液中杂交结合的时间为0.5
‑
4小时。7.根据权利要求1所述的用于使探针与文库快速杂交的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述磁珠清洗缓冲液组分包括3M NaCl、10mM Tris
‑
HCl pH 7....

【专利技术属性】
技术研发人员：韩营民，陈文浩，卢亚明，
申请(专利权)人：伯科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：