采用一测多评法测定佛手中6种化学成分的方法技术

本发明专利技术公开了一种采用一测多评法测定佛手中6种化学成分的方法，涉及中药技术领域。主要包括以下步骤：S1混合对照品溶液的制备；S2供试品溶液的制备；S3检测；S4相对校正因子计算：以5，7

【技术实现步骤摘要】
采用一测多评法测定佛手中6种化学成分的方法


[0001]本专利技术涉及中药
，具体涉及一种检测方法，尤其涉及一种采用一测多评法测定佛手中6种化学成分的方法。

技术介绍

[0002]佛手(Citrus medica L.var.sarcodactylis Swingle)为芸香科香橼属植物佛手的果实，具有疏肝理气、和胃止痛、燥湿化痰的功效，可用于肝胃气滞，胸胁胀痛，胃脘痞满，食少呕吐，咳嗽痰多等症状。
[0003]《中华人民共和国药典》2020年版采用单一的橙皮苷成分作为佛手的质量评价指标，然而中药多成分、多靶点、多环节、多层次等特殊作用特点，决定单一成分或单一指标性成分难以对佛手的整体质量进行全面控制与准确评价，由此多指标性成分同步测定质量控制模式应运而生。
[0004]尽管目前已经有研究表明，除橙皮苷外，还可增加其他成分如香叶木苷、佛手柑内酯等成分作为佛手的质量评价指标，然而，目前采用的用于测定佛手中不同成分含量的质量评价方法仍采用的是外标法测定化合物含量，由于中药样品成分的多样性，常常会出现对照品货源不足或价格昂贵的现象，导致基于多种成分的质量评价方法难以真正实现，同时，目前用于评价佛手质量的方法，也一般只检测其中3种或4种等成分，无法同时对以下6种成分进行检测，不能进一步用于检测提高佛手的质量。
[0005]其中，6种化学成分的化学结构式如下所示：
[0006]
技术实现思路

[0007]本专利技术提供的一种采用一测多评法测定佛手中6种化学成分的方法，旨在解决上/>述
技术介绍
中存在的问题。
[0008]为了实现上述技术目的，本专利技术主要采用以下技术方案：
[0009]一种采用一测多评法测定佛手中6种化学成分的方法，主要包括以下步骤：
[0010]S1混合对照品溶液的制备：分别取等体积的6，7
‑
二甲氧基香豆素、橙皮苷、香叶木苷、水合氧化前胡素、5，7
‑
二甲氧基香豆素、佛手柑内酯的对照品溶液，混合均匀，得混合对照品溶液，稀释成浓度梯度；
[0011]S2供试品溶液的制备：称取佛手药粗粉，置于烧瓶中，加入溶剂，称重，超声萃取，放置室温，称重，再用溶剂补重，取上清液，过微孔滤头，得供试品溶液；
[0012]S3检测：将S1中制备的混合对照品溶液稀释后与S2中制备的供试品溶液分别注入超高效液相色谱仪，进行色谱条件检测分析，得到超高效液相色谱图；
[0013]S4相对校正因子计算：以5，7
‑
二甲氧基香豆素为内标物，根据S3中混合对照品溶液的色谱图，计算6，7
‑
二甲氧基香豆素、橙皮苷、香叶木苷、水合氧化前胡素和佛手柑内酯的相对校正因子；
[0014]S5含量计算：根据S3中供试品溶液的色谱图，利用相对校正因子，分别计算供试品溶液中目标化合物的含量。
[0015]其中，所述步骤S1中，在混合各对照品溶液前，6种化学成分的对照品溶液质量浓度都配置为1mg/mL，然后按照每个化合物100μL吸入同一个进样瓶中，用甲醇补足溶液成100μg/mL，再对半稀释至1/2、1/4、1/8
……
倍，稀释至12个不同梯度的浓度。
[0016]本专利技术中，所述步骤S2中，溶剂为甲醇，所述微孔滤头为0.22μm微孔虑头。
[0017]进一步的，所述步骤S2中，供试品溶液的制备方法具体包括：精密称取佛手生药粗粉2g，置于25mL圆底烧瓶中，精密加入分析纯甲醇25ml，称重，35℃超声萃取45min，功率500W，频率45kHz，放置室温，称重，再用分析纯甲醇补重，摇匀，取上清液，过0.22μm微孔虑头，得供试品溶液，4℃冷藏备用。
[0018]优选的，所述超高效液相色谱的色谱条件为：
[0019]色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相A为乙腈，流动相B为0.1％甲酸水溶液；
[0020]梯度洗脱程序为：
[0021]0‑
2min时，流动相A为10％的乙腈；流动相B为90％的0.1％甲酸水溶液；
[0022]12min时，流动相A为15％的乙腈；流动相B为85％的0.1％甲酸水溶液；
[0023]17min时，流动相A为15％的乙腈；流动相B为85％的0.1％甲酸水溶液；
[0024]17.5min时，流动相A为17.2％的乙腈；流动相B为82.8％的0.1％甲酸水溶液；
[0025]33min时，流动相A为25％的乙腈；流动相B为75％的0.1％甲酸水溶液；
[0026]53min时，流动相A为75％的乙腈；流动相B为25％的0.1％甲酸水溶液；
[0027]54min时，流动相A为95％的乙腈；流动相B为5％的0.1％甲酸水溶液；
[0028]58min时，流动相A为95％的乙腈；流动相B为5％的0.1％甲酸水溶液；
[0029]59min时，流动相A为10％的乙腈；流动相B为90％的0.1％甲酸水溶液；
[0030]62min时，流动相A为10％的乙腈；流动相B为90％的0.1％甲酸水溶液。
[0031]进一步的，所述色谱柱选自Thermo Fisher Scientific HypersII GOLD
‑
C18色谱柱或Shim pack GLSS C18色谱柱或Supelco Titan C18中的一种，色谱柱规格为：内径
2.1mm，长度100mm，填料粒径1.9μm，流速为0.2
‑
0.6mL/min，进样量0.6
‑
2μL，柱温40℃，检测波长为330nm。
[0032]更进一步的，所述色谱柱为Thermo Fisher Scientific HypersII GOLD
‑
C18色谱柱，色谱柱规格为：内径2.1mm，长度100mm，填料粒径1.9μm，流速0.4mL/min，进样量2μL，柱温40℃，检测波长为330nm。
[0033]此外，本专利技术中，所述步骤S4具体包括：通过步骤3中得到的混合对照品溶液的超高效液相色谱图，根据超高效液相色谱图中的峰值测定目标化合物的含量，以5，7
‑
二甲氧基香豆素为内参物，采用多点矫正法计算相对校正因子：f
s/i
＝f
s
/f
i
＝As
×
Ci/(Ai
×
Cs)(I)，其中，式中f
s/i
为内标物对待测组分i的校正因子，As为内标物峰面积，Cs为内标物浓度，Ai为待测组分i峰面积，Ci为待测组分i浓度。
[0034]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0035]本专利技术提供的一测多评法不仅可以同时检测多指标成分，还能降低实验成本和检测周期；在本专利技术色谱条件下运用一测多评法可同时测定佛手中5，7
‑
二甲氧基香豆素、6，7
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种采用一测多评法测定佛手中6种化学成分的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：S1混合对照品溶液的制备：分别取等体积的6，7
‑
二甲氧基香豆素、橙皮苷、香叶木苷、水合氧化前胡素、5，7
‑
二甲氧基香豆素、佛手柑内酯的对照品溶液，混合均匀，得混合对照品溶液，稀释成浓度梯度；S2供试品溶液的制备：称取佛手药粗粉，置于烧瓶中，加入溶剂，称重，超声萃取，放置室温，称重，再用溶剂补重，取上清液，过微孔滤头，得供试品溶液；S3检测：将S1中制备的混合对照品溶液稀释后与S2中制备的供试品溶液分别注入超高效液相色谱仪，进行色谱条件检测分析，得到超高效液相色谱图；S4相对校正因子计算：以5，7
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二甲氧基香豆素为内标物，根据S3中混合对照品溶液的色谱图，计算6，7
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二甲氧基香豆素、橙皮苷、香叶木苷、水合氧化前胡素和佛手柑内酯的相对校正因子；S5含量计算：根据S3中供试品溶液的色谱图，利用相对校正因子，分别计算供试品溶液中目标化合物的含量。2.根据权利要求1所述的采用一测多评法测定佛手中6种化学成分的方法，其特征在于：所述步骤S1中，在混合各对照品溶液前，6种化学成分的对照品溶液质量浓度都配置为1mg/mL，然后按照每个化合物100μL吸入同一个进样瓶中，用甲醇补足溶液成100μg/mL，再对半稀释至1/2、1/4、1/8
……
倍，稀释至12个不同梯度的浓度。3.根据权利要求1所述的采用一测多评法测定佛手中6种化学成分的方法，其特征在于：所述步骤S2中，溶剂为甲醇，所述微孔滤头为0.22μm微孔虑头。4.根据权利要求3所述的采用一测多评法测定佛手中6种化学成分的方法，其特征在于：所述步骤S2中，供试品溶液的制备方法具体包括：精密称取佛手生药粗粉2g，置于25mL圆底烧瓶中，精密加入分析纯甲醇25ml，称重，35℃超声萃取45min，功率500W，频率45kHz，放置室温，称重，再用分析纯甲醇补重，摇匀，取上清液，过0.22μm微孔虑头，得供试品溶液，4℃冷藏备用。5.根据权利要求1所述的采用一测多评法测定佛手中6种化学成分的方法，其特征在于：所述超高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相A为乙腈，流动相B为0.1％甲酸水溶液；梯度洗脱程序为：0
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2min时，流动相A为10％的乙腈；流动相B为90％的0.1％甲酸水溶液；12min时，流动相A为15％的乙腈；流动相B为8...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹士政，赵登高，张焜，马燕燕，胥丹，张庭文，莫华龙，李舒婷，陈亚军，
申请(专利权)人：五邑大学，
类型：发明
国别省市：