一种利用对虾肠道高效富集、快速分离弧菌噬菌体的方法技术

本发明专利技术属于微生物技术领域，特别涉及一种对虾肠道内弧菌噬菌体快速分离的方法。具体包括以下步骤：步骤1：对虾肠道匀浆；步骤2：目标弧菌的裂解观察；步骤3：子代噬菌体的获取；步骤4：双层平板获得包含噬菌体粒子的上清液；步骤5：噬菌体的纯化；步骤6：噬菌体的富集；本发明专利技术提供的利用对虾肠道高效富集分离弧菌噬菌体的方法能够快速、高效、简单的初步分离弧菌噬菌体，解决了取样少，初步分离噬菌体困难的现象。现象。现象。

A method for efficient enrichment and rapid isolation of Vibrio bacteriophages from shrimp intestines

【技术实现步骤摘要】
一种利用对虾肠道高效富集、快速分离弧菌噬菌体的方法


[0001]本专利技术属于微生物
，涉及到一种利用对虾肠道高效富集、快速分离弧菌噬菌体的方法。

技术介绍

[0002]我国是水产养殖业大国，在世界水产养殖中扮演着不可或缺的角色。随着海水养殖业的迅猛发展，弧菌病呈现传播速度快和多发性等趋势，给我国乃至世界水产养殖业带来了不可估量的经济损失。迄今为止，已报道的致病性弧菌种类达到数十种之多；目前在实际生产中，抗生素和化学药物仍然是防治弧菌病最常见和有效的手段，而传统抗生素和化学药物的长期使用，产生了环境污染、细菌耐药性及食品安全等诸多问题。因此，寻找绿色安全的防治弧菌病的手段迫在眉睫。
[0003]噬菌体作为细菌的天敌可快速消杀细菌，且具有自我复制、特异性强、筛选周期短、生产成本低、安全无毒等抗生素无法比拟的优点。噬菌体作为一种新型的抗生素替代策略在水产养殖已有着广泛的应用研究基础，其良好的抑菌效果已引起人们的广泛关注。近年来，噬菌体在水产养殖领域的应用报道越来越多。总体来看，水产领域噬菌体研究呈逐年上升趋势，截止2019年4月有关研本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用对虾肠道高效富集、快速分离弧菌噬菌体的方法，其特征在于：包括以下步骤：取对虾肠道，加入氯仿后研磨匀浆，加入海水并离心后取上清液并过滤，得到噬菌体初级滤液；将噬菌体初级滤液与所靶向的目标弧菌菌液混合培养，离心取上清液，将上清液过滤，将获取的滤液进行梯度稀释，得到各级稀释滤液；分别将各级稀释滤液与宿主菌混合，并向混合液中加入LB液体培养基，迅速混匀后立刻倾倒在LB固体培养基上，冷却凝固后，倒置培养过夜，得到双层平板；在双层平板中挑取噬菌斑，捣碎后加入缓冲液中，离心获得包含噬菌体粒子的上清液并将噬菌体纯化并富集，得到弧菌噬菌体。2.根据权利要求1所述的利用对虾肠道高效富集、快速分离弧菌噬菌体的方法，其特征在于，将对虾肠道匀浆具体为：取鲜活对虾，用灭菌的解剖刀和镊子取出多只对虾肠道，按质量体积比(W/V)1.0～1.5％加入氯仿，研磨匀浆至糊状，得到对虾肠道匀浆糊状物。3.根据权利要求1或2所述的利用对虾肠道高效富集、快速分离弧菌噬菌体的方法，其特征在于，所述海水为灭菌海水，对虾肠道匀浆糊状物与海水的质量体积比为1:4；离心速度为10000g，时间为5～15min；对虾肠道匀浆糊状物离心后采用0.45μm一次性过滤器过滤。4.根据权利要求1所述的利用对虾肠道高效富集、快速分离弧菌噬菌体的方法，其特征在于，目标弧菌菌液的加入量为噬菌体初级滤液体积的1％；噬菌体初级滤液与所靶向的目标弧菌菌液混合后在30℃、200rpm摇床培养3～12h；之后在转速12000g的条件下离心2～5min；所述梯度稀释是将滤液进行10
‑4、10
‑5、10
‑6、10
‑7、10
‑8梯...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵哲，李席席，史燕，张策，喻飞，吴颖，张晨，
申请(专利权)人：河海大学，
类型：发明
国别省市：