一种芋螺肽的制备方法技术

本发明专利技术涉及多肽药物制备领域，公开了一种芋螺肽的制备方法，本发明专利技术通过固相多肽合成法制备芋螺肽树脂，芋螺肽树脂酸解得到芋螺肽线性肽，线性肽环化获得芋螺肽粗品，芋螺肽粗品纯化得到芋螺肽精品；其中固相多肽合成法制备芋螺肽树脂的方法为：在Fmoc

A preparation method of conus peptide

【技术实现步骤摘要】
一种芋螺肽的制备方法


[0001]本专利技术涉及多肽合成领域，特别涉及一种制备芋螺肽的方法。
技术背景
[0002]芋螺肽(conotoxin CTX)，又叫芋螺毒素肽。是一类小分子多肽，属神经毒素。芋螺肽是腹足纲芋螺科的肉食性海洋软体动物所分泌的毒液中的一种成分，是芋螺对猎物进行麻痹捕食和防御外敌的武器，每种芋螺毒液中可能含50～200种不等的小分子多肽。
[0003]芋螺肽为信号肽介导表达的小分子多肽，是发现的最小核酸编码的动物神经毒素肽，大多由12～46个氨基酸残基组成，且含有2对或3对二硫键，其高密度的二硫键结构使得其稳定性大大提高，从而使得芋螺肽在各种理化环境中仍能很好的保持活性。
[0004]芋螺肽，英文名为Mu
‑
conotoxin，具体肽序如下：Pyr1‑
Gly2‑
Cys3‑
Cys4‑
Asn5‑
Gly6‑
Pro7‑
Lys8‑
Gly9‑
Cys
10
‑
Ser
11
‑
Ser
12
‑
Lys
13
‑
Trp
14
‑
Cys
15
‑
Arg
16
‑
Asp
17
‑
His
18
‑
Ala
19
‑
Arg
20
‑<br/>Cys
21
‑
Cys
22
‑
CONH2,Cyclic(3
→
15),(4
→
21),(10
→
22)tris(disulfide)
[0005]目前芋螺肽制备方式主要有三种，分别是生物组织提取法、化学合成法、基因工程制备。其中，生物组织提取产量受限，从芋螺体内直接分离提取芋螺毒素的工艺复杂，提取困难，成本高；基因工程制备工艺并不成熟，两者均难以实现芋螺毒素的产业化，并不能满足市场的需求。因此，需要通过固相多肽合成法大量合成，降低成本，以此满足科研用途及日益增长的市场需求。
[0006]专利CN110894225A公开了一种芋螺肽的规模化制备方法，该方法按照芋螺肽主链C端至N端的氨基酸顺序依次偶联肽树脂，裂解后采用空气氧化法合成三对二硫键，最后纯化制备得到产品。由于芋螺肽的序列较长且序列结构特殊，采用氨基酸逐步缩合的方法合成时，易形成折叠，导致树脂收缩严重，延长反应时间，进而线性肽中产生较多与目标产品性质极为接近的杂质。如D
‑
His
18
消旋杂质、Gly重排杂质。这些杂质与目标线性肽的理化性质相近，极大增加了二硫键正确配对的难度，产生大量芋螺肽的相关杂质，产品的分离纯化难度，导致产品收率大大降低。因此，迫切需要一种杂质含量低、纯度和收率高，合成成本低的芋螺肽的合成方法。

技术实现思路

[0007]针对现有技术在合成过程中存在副反应多，纯化难，收率低，纯度低的问题，本专利技术提供了一种芋螺肽的制备方法，该方法如下：
[0008]一种芋螺肽的制备方法：通过固相多肽合成法制备芋螺肽树脂，芋螺肽树脂酸解得到芋螺肽线性肽，线性肽环化获得芋螺肽粗品，芋螺肽粗品纯化得到芋螺肽精品；其中固相多肽合成法制备芋螺肽树脂的方法为：在Fmoc
‑
Cys(R3)
‑
Resin上通过固相偶联合成方法依次接入序列中相应的保护氨基酸或片段，制得芋螺肽线性肽树脂X
‑
Pyr
‑
Gly
‑
Cys(R1)
‑
Cys(R2)
‑
Y
‑
Pro
‑
Lys
‑
Gly
‑
Cys(R3)
‑
Ser(tBu)
‑
Ser(tBu)
‑
Lys(Boc)
‑
Trp(Boc)
‑
Cys(R1)
‑
Arg(Pbf)
‑
Z
‑
Arg(Pbf)
‑
Cys(R2)
‑
Cys(R3)
‑
Resin，其中，
[0009]X为氨基保护基团或H；
[0010]Y为Asn(Trt)
‑
Gly或Asn(Trt)
‑
(Hmb)Gly或Asn(Trt)
‑
(Dmb)Gly；
[0011]Z为Asp(OtBu)
‑
His(Trt)
‑
Ala或Asp(OtBu)
‑
His(Trt)
‑
(Dmb)Ala或Asp(OtBu)
‑
His(Trt)
‑
(Hmb)Ala；
[0012]R1、R2、R3选自Acm、Trt、tBu、MeBzl、MeOBzl、Bzl、Tacm、Mmt。
[0013]Asn5、Gly6若按照顺序偶联一个一个接在氨基酸树脂上，极易发生重排形成重排杂质，从而导致副反应的发生，而本专利技术将Asn5、Gly6形成二肽片段，或Hmb/Dmb保护的Gly二肽片段，能最大程度地抑制重排杂质的产生。
[0014]His
18
用常规的单个氨基酸接入树脂容易发生消旋副反应，产生D
‑
His
18
消旋杂质。将Asp
17
‑
His
18
‑
Ala
19
作为一个整体三肽片段接入树脂时，可以特异地抑制消旋反应的发生，从而很好的避免D
‑
His
18
消旋杂质的产生。
[0015]在一些实施例中，接入Y片段的步骤如下：用1次偶联直接接入，片段为：Fmoc
‑
Asn(Trt)
‑
Gly或Fmoc
‑
Asn(Trt)
‑
(Hmb)Gly或Asn(Trt)
‑
(Dmb)Gly；或用2次偶联依次接入，第一次为Fmoc
‑
(Hmb)Gly
‑
OH或Fmoc
‑
(Dmb)Gly
‑
OH或Fmoc
‑
Gly
‑
OH，第二次为Fmoc
‑
Asn(Trt)
‑
OH。
[0016]在一些实施例中，接入Z片段的步骤如下：用1次偶联直接接入，片段为：Fmoc
‑
Asp(OtBu)
‑
His(Trt)
‑
Ala或Fmoc
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
Resin。...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴丽芬，张利香，付菜花，李新宇，
申请(专利权)人：深圳市健元医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：