过表达DLL4基因的内皮细胞系及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提出了过表达DLL4基因的内皮细胞系及其构建方法和应用，所述构建细胞系的方法包括：将内皮细胞的DLL4基因进行过表达。本发明专利技术的细胞系过表达DLL4基因，能够促进内皮细胞的增殖、减少内皮细胞血管化、促进肝祖细胞向胆管细胞分化等，有助于构建血管发育、肝再生和肿瘤血管生成等模型，可应用于基因缺陷性血管疾病、肝损伤和肿瘤等疾病的机制研究以及临床前靶向药物的研发和筛选等，具有广阔的应用前景。前景。

Endothelial cell line overexpressing Dll4 gene and its construction method and Application

【技术实现步骤摘要】
过表达DLL4基因的内皮细胞系及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域。具体地，本专利技术涉及过表达DLL4基因的内皮细胞系及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]正常的血管系统是维持内环境稳定和细胞生长代谢的基础，其功能的维持由多个内外因素共同决定，其中Notch信号通路作为人体内一条进化上十分保守的传导通路，在血管功能调控中起着特殊的作用。DLL4是Notch的DSL(Delta/Serrste/Lag2)配体家族5种配体(DLL1、DLL3、DLL4、Jagged1、Jagged2)之一，表达在血管发展的网络之中，参与血管的生成，对维持血管正常发育生成是必须的。除了对生理性血管生成的影响，Notch信号也参与了缺血后损伤血管的修复以及肿瘤组织血管的形成过程，为临床治疗提供了新靶点。
[0003]肝脏是损伤后能够快速再生的实质性器官，但是这种再生能力并不是无限的。在许多疾病条件下，由于各种病理因素的影响，其再生能力并不能完全代偿肝细胞及肝功能的缺失，这使得移植仍是治疗爆发性肝衰竭及末期慢性肝病的最终选择，在肝源愈发短缺的今天研究肝再生非常必要。
[0004]目前，DLL4在疾病如肝损伤后再生以及肿瘤发生发展特别是在血管发生及生长中的分子机制仍有待研究。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本专利技术提出了一种构建细胞系的方法、细胞系及其应用和培养基，本专利技术的细胞系过表达DLL4 基因，能够促进内皮细胞的增殖、减少内皮细胞血管化、促进肝祖细胞向胆管细胞分化等，有助于构建血管发育、肝再生和肿瘤血管生成等模型，可应用于基因缺陷性血管疾病、肝损伤和肿瘤等疾病的机制研究以及临床前靶向药物的研发和筛选等，具有广阔的应用前景。在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种构建细胞系的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：将内皮细胞的DLL4基因进行过表达。由此，根据本专利技术实施例的方法构建的细胞系过表达DLL4基因，能够促进内皮细胞的增殖、减少内皮细胞血管化、促进肝祖细胞向胆管细胞分化等，有助于构建血管发育、肝再生和肿瘤血管生成等模型，可应用于基因缺陷性血管疾病、肝损伤和肿瘤等疾病的机制研究以及临床前靶向药物的研发和筛选等，具有广阔的应用前景。
[0006]根据本专利技术的实施例，所述构建细胞系的方法还可以具有下列附加技术特征：
[0007]根据本专利技术的实施例，所述内皮细胞选自SK
‑
HEP
‑
1、HUVEC或原代内皮细胞。
[0008]根据本专利技术的实施例，所述方法包括：1)将构建有DLL4基因过表达的质粒进行扩增；
[0009]2)将上步所得的质粒进行慢病毒包装，获得DLL4基因过表达慢病毒；3)使用所述DLL4 基因过表达慢病毒感染内皮细胞，得到DLL4基因过表达的细胞系。
[0010]根据本专利技术的实施例，所述质粒选自pLV
‑
DLL4
‑
GFPSpark。该质粒购买自北京义翘神州科技股份有限公司(Cat:HG10171
‑
ACGLN)，其扩增的过程包括质粒转化大肠感受态细胞、挑单克隆菌落、菌体扩增和质粒提取。
[0011]根据本专利技术的实施例，所述慢病毒选自HEK
‑
293T或HEK
‑
293FT。HEK
‑
293T细胞可用于逆转录病毒的生产、基因表达和蛋白生产，HEK
‑
293FT能获得高低度的慢病毒。
[0012]根据本专利技术的实施例，所述慢病毒包装采用的质粒选自psPAX2和pMD2.G。这两种质粒与pLV
‑
DLL4
‑
GFPSpark共同构成三质粒系统，增加载体稳定性，安全生产高滴度、高感染力的慢病毒颗粒。
[0013]根据本专利技术的实施例，所述方法进一步包括：4)将所得DLL4基因过表达的细胞系进行流式细胞分选。由此，通过细胞分选可以获得DLL4基因高表达的内皮细胞。
[0014]在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种细胞系。根据本专利技术的实施例，所述细胞系中DLL4基因过表达。由此，根据本专利技术实施例的细胞系能够促进内皮细胞的增殖、减少内皮细胞血管化、促进肝祖细胞向胆管细胞分化等，有助于构建血管发育、肝再生和肿瘤血管生成等模型，可应用于基因缺陷性血管疾病、肝损伤和肿瘤等疾病的机制研究以及临床前靶向药物的研发和筛选等，具有广阔的应用前景。
[0015]根据本专利技术的实施例，所述细胞系于2021年10月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO：23037，科学描述为细胞株。
[0016]根据本专利技术的实施例，所述细胞系是通过前面所述构建细胞系的方法获得的。
[0017]在本专利技术的第三方面，本专利技术提出了前面第二方面所述细胞系的应用。本专利技术的细胞系过表达DLL4基因，能够促进内皮细胞的增殖、减少内皮细胞血管化、促进肝祖细胞向胆管细胞分化等，有助于构建血管发育、肝再生和肿瘤血管生成等模型，可应用于基因缺陷性血管疾病、肝损伤和肿瘤等疾病的机制研究以及临床前靶向药物的研发和筛选等，具有广阔的应用前景。
[0018]根据本专利技术的实施例，所述细胞系用于构建疾病模型，所述疾病模型用于基因缺陷性血管疾病、肝损伤、肿瘤疾病的机制研究、靶向药物的研发和/或筛选。
[0019]根据本专利技术的实施例，所述细胞系用于使肝祖细胞向胆管方向分化。
[0020]根据本专利技术的实施例，所述细胞系用于使肝祖细胞的BSEP基因、HES1基因、CK19 基因、MRP1
‑
6基因表达上调。
[0021]在本专利技术的第四方面，本专利技术提出了一种培养基。根据本专利技术的实施例，所述培养基含有第一方面所述构建细胞系的方法获得的细胞系或第二方面所述细胞系所分泌的代谢物。由此，促进了肝祖细胞向胆管方向分化。
[0022]在本专利技术的第五方面，本专利技术提出了一种促进内皮细胞增殖的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：将内皮细胞的DLL4基因进行过表达。专利技术人发现，内皮细胞的DLL4 基因过表达可以促进内皮细胞增殖。
[0023]在本专利技术的第六方面，本专利技术提出了一种降低内皮细胞成管能力的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：将内皮细胞的DLL4基因进行过表达。专利技术人发现，内皮细胞的DLL4基因过表达可以降低内皮细胞成管能力。
[0024]在本专利技术的第七方面，本专利技术提出了一种使肝祖细胞向胆管方向分化的方法、使
肝祖细胞的BSEP基因、HES1基因、CK19基因和/或MRP1
‑
6基因表达上调的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：将前面第二方面所述细胞系与肝祖细胞进行共培养；或者将肝祖细胞培养于前面第四方面所述培养基中。
[0025]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种构建细胞系的方法、促进内皮细胞增殖的方法或降低内皮细胞成管能力的方法，其特征在于，包括：将内皮细胞的DLL4基因进行过表达。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述内皮细胞选自SK
‑
HEP
‑
1、HUVEC或原代内皮细胞。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述构建细胞系的方法包括：1)将构建有DLL4基因过表达的质粒进行扩增；2)将上步所得的质粒进行慢病毒包装，获得DLL4基因过表达慢病毒；3)使用所述DLL4基因过表达慢病毒感染内皮细胞，得到DLL4基因过表达的细胞系。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述质粒选自pLV
‑
DLL4
‑
GFPSpark；所述慢病毒选自HEK
‑
293T或HEK
‑
293FT，所述慢病毒包装采用的质粒选自psPAX2和pMD2.G；任选地，所述构建细胞系的方法进一步包括：4)将所得DLL4基因过表达的细胞系进行流式细胞分选。5.一种细胞系，其特征在于，所述细胞系中DLL4基因过表达。6...

【专利技术属性】
技术研发人员：王韫芳，柳娟，陈虹宇，
申请(专利权)人：北京清华长庚医院，
类型：发明
国别省市：