可结合于MR1蛋白与β2微球蛋白的复合体的候选物质的捕获方法、可结合于MR1蛋白与β2微球蛋白的复合体的候选物质的制造方法和MAIT细胞的配体候选物质的制造方法技术

提供：能够更广泛地捕获可结合于MR1蛋白与β2微球蛋白的复合体的候选物质的方法。本发明专利技术的可结合于MR1蛋白与β2微球蛋白的复合体的候选物质的捕获方法包括如下工序：复合体形成工序，使被检物质与MR1蛋白与β2微球蛋白共存，形成被检物质、MR1蛋白和β2微球蛋白的复合体；及，还原工序，用还原剂将前述复合体还原。原。原。

It can bind to MR1 protein and \u03b2 Capture method of candidate substances of 2 microglobulin complex, which can bind to MR1 protein and \u03b2 2. Manufacturing method of candidate substance of microglobulin complex and manufacturing method of ligand candidate substance of MAIT cell

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】可结合于MR1蛋白与
β
2微球蛋白的复合体的候选物质的捕获方法、可结合于MR1蛋白与
β
2微球蛋白的复合体的候选物质的制造方法和MAIT细胞的配体候选物质的制造方法


[0001]本专利技术涉及：可结合于MR1蛋白与β2微球蛋白的复合体的候选物质的捕获方法、可结合于MR1蛋白与β2微球蛋白的复合体的候选物质的制造方法和MAIT细胞的配体候选物质的制造方法。

技术介绍

[0002]黏膜相关恒定T(Mucosal
‑
associated invariant Tcell：MAIT)细胞最初被鉴定为存在于肠道中的T细胞。然而，之后明确了以黏膜组织为代表的全身均存在MAIT细胞，并启示会引发感染症和自身免疫性疾病。认为MAIT细胞的T细胞受体(TCR)识别并激活会被呈递至MR1(MHC I类相关蛋白1)蛋白与β2微球蛋白(β2m蛋白)的复合体的、源自肠道菌群等的代谢产物(非专利文献1)。
[0003]现有技术文献
[0004]非专利文献
[0005]非专利文献1：Dale I.Godfrey et.al.,“The biology and functional importance of MAIT cells”,Nature Immunogolg,2019,vol.20,pages 1110
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1128

技术实现思路

[0006]专利技术要解决的问题
[0007]由于MR1蛋白和β2m蛋白以配体依赖性的方式形成前述复合体，因此配体的存在与否会使前述复合体的形成与否发生变化。因此，利用该现象进行了MAIT细胞的配体的筛选。此外，维生素及其代谢物(以下也统称为“维生素代谢物”)已被鉴定为MAIT细胞的配体。然而，通过以前述复合体的形成为指标的方法尚未鉴定出内源性的配体等除维生素代谢物以外的配体或其候选物质。
[0008]因此，本专利技术的目的在于，提供能更广泛地捕获能与前述复合体结合的候选物质的方法。
[0009]用于解决问题的方案
[0010]为了实现前述目的，本专利技术的可结合于MR1蛋白与β2微球蛋白的复合体的候选物质的捕获方法(以下也称为“捕获方法”)包括如下工序：复合体形成工序，使被检物质与MR1蛋白与β2微球蛋白共存，形成被检物质、MR1蛋白和β2微球蛋白的复合体；及
[0011]还原工序，用还原剂将前述复合体还原。
[0012]本专利技术的可结合于MR1蛋白与β2微球蛋白的复合体的候选物质的制造方法(以下也称为“候选物质的制造方法”)包括如下工序：还原复合体形成工序，由被检物质、MR1蛋白和β2微球蛋白形成经还原的被检物质、MR1蛋白和β2微球蛋白的复合体；及
[0013]检测工序，检测前述经还原的复合体中的被检物质，
[0014]前述还原复合体形成工序通过本专利技术的候选物质的捕获方法而实施。
[0015]本专利技术的MAIT细胞的配体候选物质的制造方法(以下也称为“配体候选物质的制造方法”)包括如下工序：检测工序，从被检物质中检测能结合于MR1蛋白与β2微球蛋白的复合体的候选物质；
[0016]接触工序，使前述检测工序中检测出的候选物质、MR1蛋白和β2微球蛋白与MAIT细胞接触；及
[0017]选择工序，基于前述接触工序中的前述MAIT细胞的活化，选择MAIT细胞的配体候选物质，
[0018]前述检测工序通过本专利技术的候选物质的制造方法而实施。
[0019]本专利技术的可结合于MR1蛋白与β2微球蛋白的复合体的候选物质的捕获试剂盒(以下也称为“捕获试剂盒”)包含MR1蛋白、β2微球蛋白和还原剂，
[0020]所述试剂盒用于前述本专利技术的捕获方法。
[0021]专利技术的效果
[0022]根据本专利技术，能更广泛地捕获能与前述复合体结合的候选物质。因此，根据本专利技术，例如能鉴定除维生素代谢物以外的配体或其候选物质。
附图说明
[0023]图1是关于实施例1中的复合体的热力学稳定性的图。
[0024]图2是示出实施例2中的、峰的有无因为有无还原处理而不同的数据的图。
[0025]图3是示出实施例2中的峰的区域面积因为有无还原处理而不同的数据的图。
具体实施方式
[0026]<捕获方法>
[0027]如上所述，本专利技术的可结合于MR1蛋白与β2微球蛋白的复合体的候选物质的捕获方法包括如下工序：复合体形成工序，使被检物质与MR1蛋白与β2微球蛋白共存，形成被检物质、MR1蛋白和β2微球蛋白的复合体；及，还原工序，用还原剂将前述复合体还原。本专利技术的捕获方法的特征在于，前述复合体形成工序后，实施将前述复合体还原的还原工序，其它工序和条件没有特别限制。本专利技术的捕获方法中，例如，通过在前述还原工序中将前述复合体还原，从而能够将有助于形成前述复合体的被检物质以捕获于前述复合体的状态固定。因此，根据本专利技术的捕获方法，能更广泛地捕获能与前述复合体结合的候选物质。
[0028]本专利技术人等得到如下想法：利用形成前述复合体来鉴定MAIT细胞配体的鉴定方法中，有助于前述复合体的形成的物质(候选物质)中的一部分与MAIT细胞的配体(维生素B9(叶酸、维生素M)、双氯芬酸(2
‑
(2
‑
(2,6
‑
二氯苯基氨基)苯基)乙酸)、N
‑
(6
‑
甲酰基
‑
3,4
‑
二氢
‑4‑
氧代
‑2‑
蝶啶基)
‑
乙酰胺(N
‑
(6
‑
formyl
‑
3,4
‑
dihydro
‑4‑
oxo
‑2‑
pteridinyl)
‑
acetamide，Ac6FP))、5
‑
(2
‑
氧代亚丙基氨基)
‑6‑
D
‑
核糖基氨基尿嘧啶(5
‑
(2
‑
oxopropylideneamino)
‑6‑
D
‑
ribitylaminouracil，5
‑
OP
‑
RU)等)相比，与前述复合体的结合力相对较弱，因此前述鉴定方法的处理中前述候选物质从复合体上脱落，其结果可能无法鉴定除维生素代谢物以外的配体。此外，本专利技术人等进行了深入研究，发现通过对所形成的复合体实施还原处理，从而能更广泛地捕获能与前述复合体结合的候选物质，以至完成
了本专利技术。本专利技术的捕获方法中，通过与被检物质形成前述复合体后，对前述复合体进行还原处理，由此能够在将候选物质保持于前述复合体上的状态下进行固定，因此能够预防前述候选物质的脱落，推测由此能更广泛地捕获能与前述复合体结合的候选物质。但是，本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种可结合于MR1蛋白与β2微球蛋白的复合体的候选物质的捕获方法，其包括如下工序：复合体形成工序，使被检物质与MR1蛋白与β2微球蛋白共存，形成被检物质、MR1蛋白和β2微球蛋白的复合体；及还原工序，用还原剂将所述复合体还原。2.根据权利要求1所述的捕获方法，其中，所述还原工序中，将所述复合体中的亚胺还原而胺化。3.根据权利要求1或2所述的捕获方法，其中，所述还原工序中，将所述MR1蛋白的赖氨酸残基与所述被检物质形成的亚胺还原而胺化。4.根据权利要求1至3中任一项所述的捕获方法，其包括在形成所述复合体后对所述复合体进行纯化的纯化工序，所述还原工序中，用还原剂将所述纯化工序中得到的复合体还原。5.根据权利要求1至4中任一项所述的捕获方法，其中，所述还原工序中，通过氢化物还原剂将所述复合体还原。6.一种可结合于MR1蛋白与β2微球蛋白的复合体的候选物质的制造方法，其包括如下工序：还原复合体形成工序，由被检物质、MR1蛋白和β2微球蛋白形成经还原的被检物质、MR1蛋白和β2微球蛋白的复合体；及检测工序，检测所述经还原的复合体...

【专利技术属性】
技术研发人员：本园千寻，山崎晶，
申请(专利权)人：国立大学法人大阪大学，
类型：发明
国别省市：