龙须菜ACE抑制肽、制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了龙须菜ACE抑制肽、制备方法及应用，属于ACE抑制肽技术领域，龙须菜ACE抑制肽，其氨基酸序列为：YIGNNPAKG。龙须菜ACE抑制肽的制备方法，包括以下步骤：S1：取龙须菜进行酶解，对酶解液进行过滤处理，得到澄清的多肽酶解液，S2：进行超滤处理，分别收集不同大小分子量的多肽组分并冻干得龙须菜多肽冻干，S3：进行质谱测定，进行分析，获得多条多肽序列，筛选得到多条不重复的多肽，S4：筛选出对接分数得分排名靠前的多肽，进行固相合成，然后测定ACE抑制活性，S5：选择ACE抑制率＞80％的多肽，得龙须菜ACE抑制肽。本发明专利技术以龙须菜作为原料，获得龙须菜ACE抑制肽的氨基酸序列，制备的龙须菜ACE抑制肽具有良好的ACE抑制活性。的龙须菜ACE抑制肽具有良好的ACE抑制活性。的龙须菜ACE抑制肽具有良好的ACE抑制活性。

Asparagus ACE inhibitory peptide, preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
龙须菜ACE抑制肽、制备方法及应用


[0001]本专利技术属于ACE抑制肽
，尤其涉及一种龙须菜ACE抑制肽、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]龙须菜属于红藻门，江蓠科，江离属，别名海草或海菜，是世界第三大海洋藻类植物。其高产量(中国第二)，低成本，养育范围广，经济价值高备受关注，其体内富含多糖、蛋白质、粗纤维等营养资源，本身就是作为食疗和药疗的天然食物，具有润肠通便、清热解毒、延年益寿等功效，常被用于开发利用多糖、多肽、藻红蛋白、膳食纤维等多种生物活性物质。因此，龙须菜在海洋食品、食品添加剂、功能食品、海洋药物等领域具有潜在开发价值。
[0004]血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽是经过蛋白水解后形成的小分子多肽，它具有显著的降血压作用，更有效的是它与其它普通降压药物比较发现，ACE抑制肽无毒副作用，并且对正常的血压无影响。ACE在血压调节中起重要作用，经碳端两个氨基酸(His
‑
Leu)的切除，能够把原本无活性的血管紧张素Ⅰ转变为具有活性的血管紧张素Ⅱ，引起血管收缩，使血压上升；ACE还会使具有血管舒张功能的舒缓激肤失活，同样又引起血压上升的情形， ACE抑制肽能够阻断ACE引起的两种生化反应过程，起到降血压的作用。
[0005]现有在从榛子、牦牛乳、贝肉、枸杞等食物中制备ACE抑制肽的技术，但未见以龙须菜作为原料制备ACE抑制肽的技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提出一种龙须菜ACE抑制肽、制备方法及应用，以龙须菜作为原料，获得龙须菜ACE抑制肽的氨基酸序列，制备的龙须菜ACE抑制肽具有良好的ACE抑制活性。
[0007]为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0008]本专利技术提供的龙须菜ACE抑制肽，其氨基酸序列为：YIGNNPAKG。
[0009]优选地，其分子量为932.4716Da。
[0010]优选地，其对ACE抑制的IC
5O
值为11.00
‑
11.46μmoL/L。
[0011]本专利技术还提供龙须菜ACE抑制肽的制备方法，包括以下步骤：S1：取龙须菜进行酶解，得到酶解液，对酶解液进行过滤处理，去除残渣得到澄清的多肽酶解液，S2：将步骤S1 得到的多肽酶解液经陶瓷膜过滤后，进行超滤处理，分别收集不同大小分子量的多肽组分并冻干得龙须菜多肽冻干，S3：对分子量小于1kDa的龙须菜多肽冻干进行质谱测定，对质谱测定的结果进行分析，获得多条多肽序列，删除重复序列，筛选得到多条不重复的多肽，S4：通过对接软件UCSF DOCK 6.9的小分子虚拟筛选模块，将多条多肽以与ACE分子对接的模式进行虚拟筛选，筛选出对接分数得分排名前20名的多肽，分别命名A1
‑
A20多肽，进行固相合成，然后测定ACE抑制活性，S5：选择ACE抑制率＞80％的多肽，得龙须菜ACE抑制肽。
[0012]优选地，步骤S1的具体步骤为：取龙须菜进行反复冲洗去除大颗粒杂质，进行沥干
水分1.8
‑
2.2h后，取龙须菜溶于超纯水中，在碱性蛋白酶的条件下进行酶解得到酶解液，将酶解液在95
‑
100℃灭活8
‑
12min，冷却后在7500
‑
8500r/min和4℃的条件下离心 18
‑
22min，去除残渣得到澄清的多肽酶解液。
[0013]优选地，酶解条件为：碱性蛋白酶添加量为超纯水的质量的1.8
‑
2.2％，pH值为8.2
‑
8.6，底物浓度为16
‑
20％，酶解温度为50
‑
60℃，酶解时间为2.8
‑
3.2h。
[0014]优选地，步骤S2的具体步骤为：将步骤S1得到的多肽酶解液经180
‑
220nm的陶瓷膜过滤后，然后分别采用＞10kDa、5
‑
10kDa、1
‑
5kDa、＜1kDa的超滤膜进超滤处理，分别收集不同大小分子量的多肽组分并冻干得龙须菜多肽冻干。
[0015]优选地，步骤S3的具体步骤为：采用Q
‑
Exactive质谱仪对分子量小于1kDa的龙须菜多肽冻干进行质谱测定，用C
18
除盐柱进行除盐，经由配备在线纳喷离子源的LC
‑
MS/MS 分析上样3μL的分子量小于1kDa的龙须菜多肽冻干，柱流量控制在300nL/min，柱温为 40℃，电喷雾电压2kV，质谱参数设置为：质量/电荷(m/z)＝100
‑
1500，一级MS的操作条件为：分辨率＝70000；AGC target＝3e6，最大IT＝50ms，扫描电荷＝1
‑
6，二级MS/MS的操作条件为：分辨率＝17500，topN＝20，隔离窗口＝2m/z，AGC target＝1e5，最大IT＝60ms， NCE/Stepped NCE＝28kv，动态排除时间＝30s，质谱原始文件由Peaks Studio进行分析，可信度指标
‑
10lgP的值设置为＞23.9，获得178多肽序列，删除重复序列，筛选得到101 条不重复的多肽。
[0016]优选地，步骤S4的具体步骤为：运用对接软件UCSF DOCK 6.9对ACE分子加氢、加电荷和除水、质子化预处理，保留Zn
2+
，剔除远离的Cl
‑
，进行能量最小化Amber ff12SB 处理，多肽分子以Discovery Studio 2019Client绘制小分子作为配体，最后确定ACE 的活性口袋，在口袋范围10，盒子边缘6的条件下虚拟筛选，将虚拟筛选的结果按照对接分数从高到低进行排名，筛选排名前20名的多肽，分别命名A1
‑
A20多肽。
[0017]本专利技术还提供上述的龙须菜ACE抑制肽在制备辅助降血压药物中的应用。
[0018]本专利技术的有益效果为：
[0019]1、以龙须菜作为原料，获得龙须菜ACE抑制肽的氨基酸序列，制备的龙须菜ACE抑制肽具有良好的ACE抑制活性。
[0020]2、龙须菜ACE抑制肽YIGNNPAKG与ACE口袋的氨基酸残基形成多种类型的相互作用。其中与Arg402、Tyr360、Tyr523和Hie410形成不同的氢键作用力；与Glu123、Glu384 和Arg124形成盐桥；Hid383行成π
‑
π堆积；与Tyr523、Glu123、Thr92形成疏水间作用，同时还与Zn701形成金属配位，氢键、疏水间作用、π
‑
π堆积、盐桥是YIGNNPAKG与ACE 发生结合的主导因素。
[0021]3、通过本专利技术方法制备得到的龙须菜ACE抑制肽YIGNNPAKG与ACE酶的相互作用强，活性高，可以应用于辅助降血压药物中。
附图说明
[0022]图1是本专利技术的不同大本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.龙须菜ACE抑制肽，其特征在于：其氨基酸序列为：YIGNNPAKG。2.根据权利要求1所述的龙须菜ACE抑制肽，其特征在于：其分子量为932.4716Da。3.根据权利要求1所述的龙须菜ACE抑制肽，其特征在于：其对ACE抑制的IC
5O
值为11.00
‑
11.46μmoL/L。4.龙须菜ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：取龙须菜进行酶解，得到酶解液，对酶解液进行过滤处理，去除残渣得到澄清的多肽酶解液；S2：将步骤S1得到的多肽酶解液经陶瓷膜过滤后，进行超滤处理，分别收集不同大小分子量的多肽组分并冻干得龙须菜多肽冻干；S3：对分子量小于1kDa的龙须菜多肽冻干进行质谱测定，对质谱测定的结果进行分析，获得多条多肽序列，删除重复序列，筛选得到多条不重复的多肽；S4：通过对接软件UCSF DOCK 6.9的小分子虚拟筛选模块，将多条多肽以与ACE分子对接的模式进行虚拟筛选，筛选出对接分数得分排名靠前的多肽，进行固相合成，然后测定ACE抑制活性；S5：选择ACE抑制率＞80％的多肽，得龙须菜ACE抑制肽。5.根据权利要求4所述的龙须菜ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S1的具体步骤为：取龙须菜进行反复冲洗去除大颗粒杂质，进行沥干水分1.8
‑
2.2h后，取龙须菜溶于超纯水中，在碱性蛋白酶的条件下进行酶解得到酶解液，将酶解液在95
‑
100℃灭活8
‑
12min，冷却后在7500
‑
8500r/min和4℃的条件下离心18
‑
22min，去除残渣得到澄清的多肽酶解液。6.根据权利要求5所述的龙须菜ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，酶解条件为：碱性蛋白酶添加量为超纯水的质量的1.8
‑
2.2％；pH值为8.2
‑
8.6；底物浓度为16
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20％；酶解温度为50
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60℃；酶解时间为2.8
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3.2h。7.根据权利要求4所述的龙须菜ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S2的具体步骤为：将步骤S1得到的多...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏永昌，刘智禹，刘淑集，陈贝，乔琨，许旻，陈晓婷，
申请(专利权)人：福建省水产研究所福建水产病害防治中心，
类型：发明
国别省市：