一种抗氧化十肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种抗氧化十肽及其制备方法和应用，属于活性肽领域。本发明专利技术的抗氧化十肽的氨基酸序列为Ala

An antioxidant decapeptide and its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种抗氧化十肽及其制备方法和应用

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[0001]本专利技术属于活性肽领域，具体涉及一种抗氧化十肽及其制备方法和应用。

技术介绍
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[0002]随着全球社会老龄化现象的日益严重，老年痴呆等神经退行性疾病已经成为全球公众健康问题，亟待解决。因此，探索和研究具有改善或治疗与神经损伤相关的功能物质已成为热点和难点。氧化应激是指机体内产生的活性氧(ROS)水平和内源性抗氧化能力之间的细胞氧化还原失去平衡，抗氧化能力相对不足，机体内ROS相对增加，攻击机体内生物大分子，如蛋白质和DNA等，进而导致细胞和组织损伤。氧化应激在神经元功能障碍和神经退行性变的进展中起着关键作用。此外，发生在中枢神经系统中的氧化应激随着年龄的增加而增加，进而导致与年龄相关的神经退行性疾病的发生，如阿兹海默症和帕金森症等。因此，拮抗机体的氧化应激，恢复机体内氧化系统与抗氧化系统的平衡状态，可有效改善或抑制机体的神经损伤。
[0003]活性肽属于重要的食品功能因子，具有抗氧化、神经保护和免疫调节等生物活性，可广泛应用于食品和保健品，深受消费者的喜爱。核桃蛋白是一种优质的植物蛋白资源，将其进行酶解改性后，功能特性得到极大的改善。与核桃蛋白相比，核桃肽具有更好的营养价值和生理功能，在食品和保健食品等领域具有广泛的开发和利用前景。尽管目前已有不少关于核桃活性肽的报道，但具有较高活性的核桃肽产品仍然很少。此外，活性肽的生物活性与其化学结构，特别是氨基酸序列高度相关。因此，有必要开展核桃活性肽的制备工艺、结构鉴定与活性评价研究，揭示主要核桃活性肽的化学结构，有助于提高核桃产品的附加价值和市场竞争力，推动核桃产业的发展。

技术实现思路
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[0004]为此，本专利技术的第一个目的在于提供一种抗氧化十肽，其氨基酸序列为：Ala
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Tyr
‑
Asn
‑
Ile
‑
Pro
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Val
‑
Asn
‑
Ile
‑
Ala
‑
Arg(SEQ ID NO.1)，即AYNIPVNIAR。本专利技术的抗氧化十肽AYNIPVNIAR可抑制H2O2诱导的神经细胞损伤，同时缓解H2O2诱导的神经细胞氧化应激反应，具有潜在的脑部神经保护功效。
[0005]本专利技术的第二个目的在于提供上述抗氧化十肽的制备方法。
[0006]在一实施例中，采用酶解法并结合超滤和ODS色谱柱进行分离纯化，从核桃蛋白酶解液中获取，具体地包括以下步骤：
[0007](1)将核桃蛋白加入去离子水中，高速剪切分散后，调节pH值至7.5～8.5，先加入胰蛋白酶于37℃搅拌1～2h，随后加热至45～60℃，加入碱性蛋白酶；再搅拌水解4～12h，分步酶解结束后高温灭酶，离心取上清液，得到核桃蛋白水解液；在酶解过程中，酶的用量以核桃蛋白的质量为计算基准，其中胰蛋白酶0.5～2.0％，碱性蛋白酶1～2.5％；
[0008](2)核桃蛋白水解液经超滤膜(3kDa)后收集透过液，浓缩、冷冻干燥后获得核桃蛋白酶解液的低分子量组分；
[0009](3)核桃蛋白酶解液的低分子量组分采用ODS色谱柱进行纯化，用乙醇水溶液作为洗脱剂，流速为2.0～5.0mL/min，检测波长为220nm，收集合并成多个洗脱峰组分，检测抗氧化活性较强的组分从而获得抗氧化十肽。
[0010]优选地，所述的高温灭酶是90℃下处理10～15min。
[0011]优选地，是用乙醇水溶液作为洗脱剂，从体积比5：95～40：60梯度洗脱。
[0012]优选地，流速为4.0mL/min，检测波长为220nm，收集乙醇与水体积比为20：80洗脱的组分。
[0013]本专利技术的第三个目的在于提供上述抗氧化十肽在制备防治神经损伤的药物或食品中的应用。
[0014]优选地，所述的食品包括保健食品。
[0015]优选地，所述的防治神经损伤是指神经细胞氧化损伤。
[0016]更优选地，所述的神经细胞氧化损伤是指H2O2诱导的神经细胞氧化应激。
[0017]更优选地，所述的神经细胞是PC
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12细胞。
[0018]本专利技术的第四个目的在于提供一种防治神经损伤的药物或食品，含有上述的抗氧化十肽作为活性成分以及在药学或食品上可接受的载体或赋形剂。
[0019]优选地，所述的食品包括保健食品。
[0020]本专利技术的第四个目的在于提供核桃蛋白在制备上述的抗氧化十肽中的应用。
[0021]优选地，采用酶解法并结合超滤和ODS色谱柱进行分离纯化，从核桃蛋白酶解液中获取抗氧化十肽。
[0022]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
[0023]1.本专利技术的抗氧化十肽结构清晰明了，可通过对核桃蛋白酶解物进行分离纯化获得，也可通过多肽固相合成法获取。
[0024]2.实验表明本专利技术的抗氧化十肽可显著提高H2O2处理后PC
‑
12细胞存活率，并呈浓度梯度效应，同时缓解H2O2诱导的神经细胞氧化应激反应，说明该抗氧化十肽对H2O2诱导的神经细胞损伤具有较好的抑制作用，具有潜在的脑部神经保护作用，可用于制备防治神经损伤的药物、食品。
[0025]3.本专利技术能够推动核桃的深加工利用，提升核桃产品附加值和市场竞争力，促进该行业的可持续发展。
附图说明
[0026]图1是抗氧化十肽的二级质谱图。
[0027]图2是抗氧化十肽对H2O2诱导的PC
‑
12细胞活力的影响，其中不同字母表示平均值具有显著性差异(p<0.05)。
[0028]图3是抗氧化十肽对H2O2诱导的PC
‑
12细胞内ROS水平的影响，其中不同的字母表示平均值具有显著性差异(p<0.05)。
具体实施方式
[0029]本专利技术下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。
[0030]除非另有定义，本专利技术所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本专利技术。
[0031]本专利技术的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。
[0032]以下结合具体实施例对本专利技术作进一步详细的说明，但本专利技术的实施方式不限于此。
[0033]实施例1：高分化PC
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12细胞培养
[0034]PC
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12细胞系来自能移植的雄性大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤，可表达神经生长因子(NGF)受体。高分化PC...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗氧化十肽，其特征在于，氨基酸序列为Ala
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Tyr
‑
Asn
‑
Ile
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Pro
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Val
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Asn
‑
Ile
‑
Ala
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Arg。2.一种制备权利要求1所述的抗氧化十肽的方法，其特征在于，选自以下任一种方法：i.所述的抗氧化十肽是利用核桃蛋白进行酶解后分离得到；ii.所述的抗氧化十肽是通过多肽固相合成法将氨基酸连接得到。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的利用核桃蛋白进行酶解后分离得到，包括以下步骤：(1)将核桃蛋白加入去离子水中，高速剪切分散后，调节pH值至7.5～8.5，先加入胰蛋白酶于37℃搅拌1～2h，随后加热至45～60℃，加入碱性蛋白酶；再搅拌水解4～12h，分步酶解结束后高温灭酶，离心取上清液，得到核桃蛋白水解液；所述酶的用量以核桃蛋白的质量为计算基准，其中胰蛋白酶0.5～2.0％，碱性蛋白酶1～2.5％；(2)核桃蛋白水解液经超滤膜(3kDa)后收集透过液，浓缩、冷冻干燥后...

【专利技术属性】
技术研发人员：温玲蓉，杨宝，蒋跃明，
申请(专利权)人：中国科学院华南植物园，
类型：发明
国别省市：