一种检测PCDHB6基因表达丰度的试剂在制备卵巢癌干性诊断试剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测PCDHB6基因表达丰度的试剂在制备卵巢癌干性诊断试剂中的应用。PCDHB6基因是一种细胞粘连蛋白的编码基因，其表达丰度与卵巢癌患者生存成正比关系，与卵巢癌干性标志物的表达丰度成反比关系，因此，检测PCDHB6基因表达丰度的试剂可用于制备卵巢癌干性诊断试剂。卵巢癌的干性程度与卵巢癌的恶性程度和生存相关，本发明专利技术将PCDHB6为标志物用于卵巢癌恶性程度的判断和患者生存的判断。用于卵巢癌恶性程度的判断和患者生存的判断。用于卵巢癌恶性程度的判断和患者生存的判断。

Application of a reagent for detecting the expression abundance of pcdhb6 gene in the preparation of dry diagnostic reagent for ovarian cancer

【技术实现步骤摘要】
和SEQ ID NO.8所示。
[0012]本专利技术优选的，所述检测PCDHB6基因蛋白丰度的试剂所采用的方法包括Western Blot、免疫组化和/或质谱。
[0013]本专利技术优选的，所述卵巢癌干性指原位卵巢癌组织细胞、卵巢癌腹水中的卵巢癌细胞、卵巢癌腹膜上的卵巢癌细胞、卵巢癌转移于其它人体部位的卵巢癌组织和细胞、原代培养卵巢癌细胞、卵巢癌细胞系细胞的干性程度。
[0014]本专利技术优选的，所述卵巢癌干性对临床的诊断意义为卵巢癌干性高应代表卵巢癌恶性程度高。
[0015]本专利技术优选的，所述卵巢癌干性对临床的诊断意义为卵巢癌干性高应代表卵巢癌患者生存期短。
[0016]本专利技术优选的，所述卵巢癌干性的标志物为CD44和CD133,CD44和CD133在卵巢癌细胞中的表达丰度应随卵巢癌细胞干性程度的提高而升高。
[0017]本专利技术的有益效果在于：本专利技术首次公开了检测PCDHB6基因表达丰度的试剂可用于制备卵巢癌干性诊断试剂的用途。检测PCDHB6基因mRNA丰度的试剂所采用的方法包括探针法、qRT
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PCR法和测序法。检测PCDHB6基因蛋白丰度的试剂所采用的方法包括western blot、免疫组化、质谱。本专利技术试剂可实现原位卵巢癌组织细胞、卵巢癌腹水中的卵巢癌细胞、卵巢癌腹膜上的卵巢癌细胞、卵巢癌转移于其它人体部位的卵巢癌组织和细胞、原代培养卵巢癌细胞、卵巢癌细胞系细胞的干性程度的检测，从而为临床卵巢癌干性检测方法提供新选择，为卵巢癌恶性程度的判断和患者生存的预测提供了新参考。
附图说明
[0018]为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：
[0019]图1为TCGA数据库中PCDHB6基因高表达和低表达卵巢癌组织中CD44和CD133基因表达水平的差异分析；
[0020]图2为外源过表达PCDHB6基因抑制卵巢癌干细胞干性标志物mRNA水平的作用效果；
[0021]图3为外源过表达PCDHB6基因抑制卵巢癌干细胞微球形成能力的作用效果；
[0022]图4为PCDHB6基因在卵巢癌干细胞和分化卵巢癌细胞中的mRNA水平差异分析结果；
[0023]图5为PCDHB6基因的低表达预示卵巢癌患者差预后的Kaplan
‑
meier分析结果；
[0024]图6为ROC曲线分析PCDHB6基因的mRNA表达水平诊断卵巢癌细胞系干性准确性的分析结果；
[0025]图7为ROC曲线分析PCDHB6基因的mRNA表达水平诊断卵巢癌组织干性准确性的分析结果。
具体实施方式
[0026]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本专利技术并能予以实施，实施例中未注明具体条件实验方法，通常按照常规条件
或按照制造厂商所建议的条件。所举实施例不作为对本专利技术的限定。
[0027]本专利技术中Caov3卵巢癌干细胞和分化Caov3卵巢癌细胞参见：Jingshu Liu，JiangfengQiu,Zhiqi Zhang,Lei Zhou,Yunzhe Li,Dongyan Ding,Yang Zhang,Dongling Zou,DongWang,Qi Zhou,Tingyuan Lang，SOX4 maintains the stemness of cancer cells via transcriptionallyenhancing HDAC1 revealed by comparative proteomics study.Cell Biosci.2021 Jan 22。
[0028]实施例1、PCDHB6表达高低与卵巢癌组织中CD44和CD133基因表达水平分析
[0029]自TCGA(The cancer genome atlas)数据库中下载卵巢癌患者mRNA、miRNA表达数据，从中提取PCDHB6、CD44、CD133的表达数据，对数据进行清洗和预处理，将样本分为 PCDHB6基因低表达和高表达两组，检测两组中CD44、CD133的表达差异。如图1所示， PCDHB6基因低表达和高表达两组组织中，CD44、CD133的表达有显著差异，表明PCDHB6 基因与卵巢癌细胞的干性有关。
[0030]实施例2、在卵巢癌细胞中外源过表达PCDHB6基因抑制卵巢癌细胞的干性
[0031](1)卵巢癌细胞的培养
[0032]实验用人卵巢癌细胞系Caov
‑
3购自美国类型培养物保藏中心(ATCC)，在含有10％胎牛血清的改良Eagle培养基(DMEM)中，置于37℃、含有5％CO2的孵箱中使用常规贴壁培养皿培养。
[0033](2)卵巢癌干细胞的培养
[0034]使用超低吸附培养皿，在含有10ng/ml FGF和20ng/ml EGF的DMEM/F
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12的无血清培养基悬浮培养，得到微球后，进行离心，得到卵巢癌干细胞，可进行下一步传代或实验。
[0035](3)建立PCDHB6基因过表达卵巢癌干细胞与对照组
[0036]利用慢病毒转染制备PCDHB6基因过表达卵巢癌干细胞细胞株和空载体对照细胞株。 PCDHB6基因过表达慢病毒载体为pcSLenti
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CMV
‑
PCDHB6
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3xFLAG
‑
PGK
‑
Puro
‑
WPRE，由PCDHB6基因连入pcSLenti
‑
CMV
‑
MCS
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3xFLAG
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PGK
‑
Puro
‑
WPRE的MCS而得，对照组由 pcSLenti
‑
CMV
‑
MCS
‑
3xFLAG
‑
PGK
‑
Puro
‑
WPRE包装空载体感染。提取实验组与对照组细胞的mRNA，使用qRT
‑
PCR法检测实验组及对照组的卵巢癌干细胞标志物CD44、CD133 mRNA 表达量，CD44的检测引物为F:5
’‑
ctgccgctttgcaggtgta
‑3’
(SEQ ID NO.1)，R: 5
’‑
cattgtgggcaaggtgctatt
‑3’
(SEQ ID NO.2)；CD133的检测引物为F:5
’‑
ttcttgaccgactgagaccca
‑3’ꢀ
(SEQ ID NO.3)，R:5
’‑
tcatgttctccaacgcctctt
‑3’
(SEQ ID NO.4)；内参GAPDH的检测引物为 F:5
’‑
ggagcgagatccctccaaaat
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测PCDHB6基因表达丰度的试剂在制备卵巢癌干性诊断试剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述PCDHB6基因全称为protocadherin beta6，在Pubmed数据中的ID为56130，在人类染色体中的位置为Chromosome 5,NC_000005.10(141150057
‑
141153287)。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述PCDHB6基因表达丰度指细胞中PCDHB6的mRNA丰度和蛋白丰度。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述检测PCDHB6的mRNA丰度的试剂所采用的方法包括探针法、qRT
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PCR法和/或测序法。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述方法为qRT
‑
PCR法，所述qRT
‑
PCR法使用的检测引物如SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：李蕴哲，郎廷元，周琦，杨玲玲，邹冬玲，
申请(专利权)人：重庆大学附属肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：