一种猪链球菌9型ELISA抗体检测方法及其试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种猪链球菌9型抗体间接ELISA检测方法，涉及抗体的检测领域，尤其涉及利用猪链球菌9型荚膜多糖检测猪链球菌9型抗体的间接ELISA检测方法及其试剂盒。这种猪链球菌9型间接ELISA检测方法通过酸沉淀法提取荚膜多糖，并以其作为包被抗原，并通过对ELISA反应条件、检测方式和临界值确定方式的优化；能够实现对副猪嗜血杆菌抗体的准确检测，具有较好的特异性和敏感性；有效解决了目前临床上猪链球菌9型抗体没有特定检验方法的问题。猪链球菌9型抗体没有特定检验方法的问题。猪链球菌9型抗体没有特定检验方法的问题。

An ELISA antibody detection method for Streptococcus suis type 9 and its kit

【技术实现步骤摘要】
一种猪链球菌9型ELISA抗体检测方法及其试剂盒


[0001]本专利技术涉及兽医学领域。具体而言，本专利技术涉及一种快速检测猪链球菌9型(Streptococcus suis type9,SS9)抗体的ELISA检测方法及其检测试剂盒。

技术介绍

[0002]猪链球菌病是一种重要的人畜共患病，猪发病后临床症状以脑膜炎、败血症和关节炎为主要特征。该病在世界范围内流行，给全球养猪业带来了巨大的经济损失。猪链球菌根据荚膜多糖分型，共分为29种血清型，根据其菌株不同毒力，它们可以分为高致病性，低致病性和无致病性菌株。近年来，猪链球菌9型(Streptococcus suis serotype 9，SS9)在中国、澳大利亚、比利时、荷兰和德国等国家猪场分离比率逐渐升高，现已成为猪链球菌的优势血清型之一。(王治方等，猪链球菌流行优势菌株的调查及耐药性，中国兽医学报.2020,40(12)；石大丽等，广西部分地区猪链球菌血清型及其毒力因子流行性调查分析.中国畜牧兽医.2019,46(04)；Evgueny Vinogradov，Structure deter本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测猪链球菌9型抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的抗原包被板为采用猪链球菌9型荚膜多糖作为包被抗原包被得到。2.根据权利要求1所述的检测猪链球菌9型抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述猪链球菌9型荚膜多糖的制备方法如下：(1)荚膜多糖粗提：将猪链球菌9型菌离心，取沉淀，将沉淀加入含有33mmol/L磷酸盐和145mmol/L NaCl pH 8.0的缓冲液中，获得细菌悬液；将细菌悬液离心，取上清液，将上清液除去核酸，离心，收集上清，加入80％的乙醇，2～8℃作用12小时，离心，沉淀即为粗制荚膜多糖；(2)酸沉淀法纯化荚膜多糖：将步骤(1)得到的粗制荚膜多糖溶解于水后，磷酸调pH至3.5，静置过夜；离心，收集上清，100KD超滤后，加入25％乙醇进行沉淀，并冷冻干燥，获得所述猪链球菌9型荚膜多糖。3.根据权利要求1所述的检测猪链球菌9型抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含猪链球菌9型阳性对照血清、猪链球菌9型阴性对照血清、样品稀释液、酶标抗体、20倍浓缩的洗涤液、底物溶液A、底物溶液B和终止液。4.一种检测猪链球菌9型抗体的间接ELISA检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：(1)荚膜多糖粗提：将猪链球菌9型菌离心，取沉淀，将沉淀加入含有33mmol/L磷酸盐和145mmol/L NaCl pH 8.0的缓冲液中，获得细菌悬液；将细菌悬液离心，取上清液，将上清液除去核酸，离心，收集上清，加入80％的乙醇，2～8℃作用12小时，离心，沉淀即为粗制荚膜多糖；(2)酸沉淀法纯化荚膜多糖：将步骤(1)得到的粗制荚膜多糖溶解于水后，磷酸调pH至3.5，静置过夜；离心，收集上清，100KD超滤后，加入25％乙醇沉淀并冷冻干燥，获得所述猪链球菌9型荚膜多糖；(3)包被：包被液将步骤(2)得到的猪链球菌9型荚膜多糖稀释为0.2μg/mL，得到抗原稀释液，在酶标板各孔均加入抗原稀释液100μL，室温包被；优选的，所述包被液为pH 9.6的0.05mol/L的碳酸盐缓冲液，所述包被时间为12
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16h；(4)封闭：甩干酶标板中的液体，用PBST清洗各孔后向每孔中加入150μL
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200μL的封闭液，37℃封闭2h，获得所述检测猪链球菌9型抗体的间接ELISA检测试剂盒的抗原包被板；优选的，所述封闭液为5％的BSA
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PBS缓冲液。5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：范红结，张鹏云，周红，蔺辉星，
申请(专利权)人：南京昌吉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：