一种SPF级实验大小鼠的AGEs饲料及其制作与含量测定方法技术

本发明专利技术提供了一种SPF级实验大小鼠的AGEs饲料及其制作与含量测定方法。本发明专利技术AGEs饲料通过以下方法得到：将酪蛋白、玉米淀粉、玉米糊精、糖、纤维素、大豆油、胱氨酸、维生素、S10022M混合矿物质粉和酒石酸氢胆碱混合均匀并平铺，均匀加热；将加热得到的物质冷却并碾碎，并补加维生素和矿物质；将所得混合物压制定型，并真空封装；将所得封装后产品进行灭菌处理，即得所述AGEs饲料。还包含有测试高AGEs饲料各营养成分含量的检测方法，将荧光及表面荧光法和反向高效液相色谱法两种检测方法结合，可提高AGEs含量的测定准确性，也可以同时评估饲料中原有营养素的含量。原有营养素的含量。原有营养素的含量。

【技术实现步骤摘要】
一种SPF级实验大小鼠的AGEs饲料及其制作与含量测定方法


[0001]本专利技术属于动物饲养
，尤其是指一种SPF级实验大小鼠的AGEs饲料及其制作与含量测定方法。

技术介绍

[0002]晚期糖基化终产物(Advanced Glycation End Products,AGEs)是在非酶促条件下，氨基酸、蛋白质、脂类或核酸等大分子物质的游离氨基酸与还原糖(葡萄糖、果糖、戊糖等)的醛基经过缩合、重排、裂解、氧化修饰后产生的一组稳定的终末产物。分为内源性和外源性两种，其中外源性/食源性膳食晚期糖基化终产物(DietaryAGEs,dAGEs)是人体内AGEs的主要来源之一，主要是通过美拉德反应(亦称非酶棕色化反应，是广泛存在于食品工业的一种非酶褐变，经过复杂的历程最终生成棕色甚至是黑色的大分子物质类黑精或称拟黑素。)或烹饪过程中脂肪酸的自氧化形成的，特别是在烧烤、油炸和烘焙过程中，通常是由一组不同种类的化合物组成的，其中Nε
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羧甲基赖氨酸复合物(CML)、Nε
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羧乙基(CEL)、吡咯素和甲基乙二醛是最常见的。如果人体的组织和循环系统中累积了过多的AGEs，会促进人体的衰老和许多病理过程。已有研究发现，AGEs在糖尿病及其并发症、阿尔茨海默病、动脉粥样硬化等疾病以及衰老的发生发展中起着重要作用。为了探究dAGEs对机体的可能作用及其机制，从而帮助人类预防由于现代饮食导致的AGEs相关疾病的发生，大小鼠模型作为良好的科研工具被广泛应用。科研所需的检测方法对结果的准确性要求严格，不同于市面上的产品检测要求的简便、快捷、和灵敏。且大小鼠饲料是一种复合食品，不同于上述的单一某种食品的AGEs含量检测，较之更为复杂。此外，由于为了对实验动物进行造模，因此需检测由于烘烤饲料营养成分的损耗情况。然而，在上述科学研究过程中，需要开发一种既能符合SPF级别实验大小鼠的微生物控制要求、又能明确AGEs含量、以及确保其他营养成分无显著差异的一种特殊高AGEs饲料。

技术实现思路

[0003]为解决上述技术问题，本专利技术提出了一种SPF实验大小鼠高AGEs干预饲料的制作方法，该饲料可以作为实验大小鼠造模的特殊饲料，模拟人类在日常饮食中摄入过多的AGEs所带来的危害。为保障科研实验的顺利开展，高AGEs饲料需要与原饲料(本专利技术中使用的是AIN
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93G标准饲料)除AGEs外，在其他营养成分上无显著差异。因此本专利技术还包含有测试高AGEs饲料各营养成分含量的检测方法，将荧光及表面荧光法和反向高效液相色谱法两种检测方法结合，可提高AGEs含量的测定准确性，也可以同时评估饲料中原有营养素的含量。从而有利于相关科研工作者们应用不同品牌或标准的饲料进行制作和测定。
[0004]本专利技术的第一个目的在于提供一种SPF级实验大小鼠的AGEs饲料的制作方法，所述制作方法包括以下步骤：
[0005]S1：以质量份数计，将150
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250份酪蛋白、380
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420份玉米淀粉、120
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150份玉米糊精、80
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120份糖、40
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55份纤维素、65
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80份大豆油、2
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5份胱氨酸、45
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55份维生素、30
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40份
S10022M混合矿物质粉和2
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3份酒石酸氢胆碱混合均匀并单层平铺，均匀加热；
[0006]S2：将步骤S1中加热得到的物质冷却并碾碎，并补加维生素和矿物质；
[0007]S3：将步骤S2中所得混合物压制定型，并真空封装；
[0008]S4：将步骤S3中所得封装后产品进行灭菌处理，即得所述AGEs饲料。
[0009]在本专利技术的一个实施例中，步骤S1中，加热温度为120
‑
140℃，加热时间为2.5
‑
3h。
[0010]在本专利技术的一个实施例中，步骤S1中，还包括间隔30分钟
‑
1小时喷洒纯净水。
[0011]在本专利技术的一个实施例中，步骤S4中，通过钴C60γ辐照进行灭菌处理。
[0012]在本专利技术的一个实施例中，所述辐照的剂量10
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15kGy。
[0013]本专利技术的第二个目的在于提供所述的制作方法所得SPF级实验大小鼠的AGEs饲料。
[0014]本专利技术的第三个目的在于提供一种检测权利要求6所述的SPF级实验大小鼠的AGEs饲料的方法，所述AGEs饲料中AGEs的含量测定，包括以下步骤：
[0015]1)游离荧光化合物测定：将AGEs饲料粉末加入水中，混合均匀，随后加入亚铁氰化钾(15％w/v)和醋酸锌(30％w/v)溶液，将所得混合物固液分离取上清液，定量定容，过滤并稀释，测定稀释溶液荧光值；在0.1mol/L H2SO4中溶解1μg/mL的奎宁硫酸盐溶液(用奎宁硫酸盐结合游离AGE，所测得就是游离AGEs的值)，使用荧光光谱仪测定荧光效应的线性关系；AGEs值以样品的荧光强度AU/mg表示；
[0016]2)总荧光化合物测定：使用蛋白酶E酶解AGEs饲料粉末，振荡混合反应，固液分离取液相，并将液相稀释至少1/50，检测稀释液的荧光值。
[0017]在本专利技术的一个实施例中，还包括所述AGEs饲料中CML含量，所述CML含量包括游离CML的含量和结合性CML的含量，
[0018]其中，所述游离CML的含量通过以下方法检测：
[0019](1)取定量AGEs饲料溶液，加入三氯乙酸，再加入正己烷，4500
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5000转离心10
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12min，得到沉淀蛋白；
[0020](2)取步骤(1)中所得沉淀蛋白用乙醇冲洗，并用盐酸进行水解，加水稀释得到待测蛋白水解液，使用高效液相色谱检测蛋白分散液中CML的含量；
[0021](3)使用高效液相色谱检测步骤(2)中所得待测蛋白水解液的CML含量；
[0022]所述结合性CML的含量通过以下方法检测：
[0023]S1：取定量AGEs饲料溶液，加入硼酸钠缓冲液进行还原反应，然后加入硼氢化钠溶液并静置得到混合溶液，之后将混合溶液置于冰上孵育，与预冷处理的三氯乙酸混合并离心，得到沉淀蛋白；
[0024]S2：取S1中所得沉淀蛋白用乙醇冲洗，并用盐酸进行水解，加水稀释得到待测蛋白水解液；
[0025]S3：使用高效液相色谱检测步骤S2中所得待测蛋白水解液的CML含量。
[0026]在本专利技术的一个实施例中，步骤(1)或S1中，所述三氯乙酸的质量浓度为55
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60％。
[0027]在本专利技术的一个实施例中，步骤(2)或S2中，所述盐酸的浓度为5
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6mol/L。
[0028]在本专利技术的一个实施例中，S1中，所述硼酸钠缓冲液的浓度为0.2
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种SPF级实验大小鼠的AGEs饲料的制作方法，其特征在于，所述制作方法包括以下步骤：S1：以质量份数计，将150
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250份酪蛋白、380
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420份玉米淀粉、120
‑
150份玉米糊精、80
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120份糖、40
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55份纤维素、65
‑
80份大豆油、2
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5份胱氨酸、45
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55份维生素、30
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40份S10022M混合矿物质粉和2
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3份酒石酸氢胆碱混合均匀并平铺，均匀加热；S2：将步骤S1中加热得到的物质冷却并碾碎，并补加维生素和矿物质；S3：将步骤S2中所得混合物压制定型，并真空封装；S4：将步骤S3中所得封装后产品进行灭菌处理，即得所述AGEs饲料。2.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤S1中，加热温度为120
‑
140℃，加热时间为2.5
‑
3h。3.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤S1中，还包括间隔30分钟
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1小时喷洒纯净水。4.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤S4中，通过钴C60γ辐照进行灭菌处理。5.根据权利要求4所述的制作方法，其特征在于，所述辐照的剂量10
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15kGy。6.权利要求1
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5任一项所述的制作方法所得SPF级实验大小鼠的AGEs饲料。7.一种检测权利要求6所述的SPF级实验大小鼠的AGEs饲料的方法，其特征在于，所述AGEs饲料中AGEs的含量测定，包括以下步骤：1)游离荧光化合物测定...

【专利技术属性】
技术研发人员：万忠晓，张秋萍，王春民，李锐，李建，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：