处理生物样本的试剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种处理生物样本的试剂，其组成包括：裂解液和蛋白酶K溶液，所述裂解液包括缓冲剂、蛋白变性剂、表面活性剂以及金属离子，所述蛋白酶K溶液包括蛋白酶K和蛋白酶K缓冲液，所述蛋白酶K的浓度为1

【技术实现步骤摘要】
处理生物样本的试剂及其应用


[0001]本专利技术涉及一种处理生物样本的试剂及其应用，属于分子生物学


技术介绍

[0002]生物样本的处理是进行分子生物学实验的重要技术手段。在分子生物学的研究中，所涉及的生物样本种类非常多，其中动物组织样本是较为常见的样本类型。动物组织样本经过裂解处理后，可以释放出样本中的核酸，经过核酸纯化的步骤后即可进行下游实验。然而，动物组织的裂解相对困难，尤其是肺、肝脏等组织，在未经组织研磨破碎的情况下，消化裂解所需的时间较长。组织消化裂解主要依靠蛋白酶K的作用，蛋白酶K可以降解蛋白，使组织裂解得以顺利进行。通常的裂解液需要在加热条件下使用以增强蛋白酶K的效率，但是在加热过程中也会使蛋白酶K的活性逐渐降低，导致在长时间加热的情况下无法彻底裂解动物组织。此外，对于使用核酸进行PCR扩增的实验，通常需要先纯化核酸，再进行PCR扩增，如果能避免核酸纯化的步骤，也可以大大节约实验时间。本专利技术针对上述问题，提供了一种效果良好的生物样本处理试剂，对于动物组织样本，尤其是较难裂解的动物组织样本，无需进行研磨破碎处理，就可以达到良好的裂解效果，并且裂解后的组织样本经加热和稀释处理后，可以直接进行PCR扩增或核酸富集操作。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供一种处理生物样本的试剂。
[0004]本专利技术采用的技术方案为：
[0005]一种处理生物样本的试剂，包括：裂解液和蛋白酶K溶液，所述裂解液包括缓冲剂、蛋白变性剂、表面活性剂以及金属离子，所述蛋白酶K溶液包括蛋白酶K和蛋白酶K缓冲液，所述蛋白酶K的浓度为1
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30mg/mL，优选的，蛋白酶K浓度为10
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30mg/mL，更为优选的，蛋白酶K浓度为20
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30mg/mL。
[0006]优选的，所述缓冲剂为三羟基氨基甲烷
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盐酸、磷酸二氢钠
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磷酸氢二钠、硼酸
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硼酸钠、磷酸氢二钠
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磷酸二氢钾、磷酸二氢钾
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氢氧化钠、巴比妥钠
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盐酸或甘氨酸
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氢氧化钠中的一种或数种，缓冲剂的浓度为1mM
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100mM，试剂的pH值为7.0
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9.0。
[0007]更优选的，所述缓冲剂为三羟基氨基甲烷
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盐酸、磷酸二氢钠
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磷酸氢二钠、磷酸氢二钠
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磷酸二氢钾、磷酸二氢钾
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氢氧化钠中的一种或数种，缓冲剂的浓度为5mM
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70mM，更优选的浓度为10mM
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50mM，缓冲液的pH值为7.5
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8.5，更优选的，试剂的pH值为8.0。
[0008]优选的，所述蛋白变性剂为盐酸胍、硫氰酸胍、尿素、硫脲、碘化钠、高氯酸钠、溴酸钠、十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠或月桂醇醚硫酸钠中的一种或数种，浓度为0.1M
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5M。
[0009]更优选的，所述蛋白变性剂为盐酸胍、硫氰酸胍、尿素、硫脲、十二烷基硫酸钠中的一种或数种，浓度为0.2M
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4.5M，更优选的浓度为0.25M
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4M。
[0010]优选的，所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基磺酸
钠、月桂醇醚硫酸钠、N
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月桂酰肌氨酸钠、N
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月桂酰谷氨酸钠、椰油酰胺烷醇硫酸钠、硬脂酸甲酯磺酸钠、十六烷基二苯基醚单磺酸钠、单硬脂酸甘油硫酸酯钠盐、N
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月桂酰基谷氨酸二酯、壬基酚聚氧乙烯醚、辛基酚聚氧乙烯醚、聚氧乙烯山梨醇酐单棕榈酸酯、脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙二醇双月桂酸酯、聚氧丙烯聚氧乙烯甘油醚中的一种或数种的混合物，浓度为0.05％
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5％(m/V)，优选的浓度为0.1％
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4％(m/V)，更优选的浓度为0.2
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3％(m/V)。
[0011]优选的，所述金属离子为钠离子、锂离子、钙离子、镁离子、锰离子、锌离子中的一种或数种的混合物，浓度为1mM
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50mM，优选的浓度为2mM
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40mM，更优选的浓度为3mM
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30mM。
[0012]优选的，所述蛋白酶K缓冲液为三羟基氨基甲烷
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盐酸、磷酸二氢钠
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磷酸氢二钠、硼酸
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硼酸钠、磷酸氢二钠
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磷酸二氢钾、磷酸二氢钾
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氢氧化钠、巴比妥钠
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盐酸或甘氨酸
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氢氧化钠的一种或数种，浓度为1mM
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100mM，优选的浓度为5mM
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70mM，更优选的浓度为10mM
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50mM，蛋白酶K缓冲液的pH值为7.0
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9.0，优选的pH值为7.5
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8.5，更优选的pH值为8.0。
[0013]优选的，所述蛋白酶K溶液还包括金属离子，所述金属离子为钠离子、锂离子、钙离子、镁离子、锰离子、锌离子中的一种或数种的混合物，浓度为1mM
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50mM，优选的浓度为2mM
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40mM，更优选的浓度为3mM
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30mM。
[0014]优选的，所述蛋白酶K溶液还包括甘油，甘油浓度为0.1％
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50％(m/V)，优选的浓度为0.2％
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30％(m/V)，更为优选的浓度为0.5％
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20％(m/V)。
[0015]本专利技术还公开了上述的处理生物样本的试剂在裂解生物样本中的应用。
[0016]优选的，其步骤为：取生物样本，加入至离心管中，加入裂解液和蛋白酶K溶液，摇晃混匀后离心，加热使样本裂解，加热过程中过一段时间充分混匀一次。
[0017]优选的，加热温度为37
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65℃。
[0018]优选的，裂解完成后，将样本加热处理，然后用水稀释，稀释后的溶液作为模板进行PCR扩增。
[0019]优选的，加热温度为70
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90℃，加热时间为10
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30分钟。
[0020]优选的，加热温度为75
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80℃，加热时间为15
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20分钟。
[0021]优选的，稀释倍数为2
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100倍。
[0022]优选的，稀释倍数为20
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50倍。
[0023]裂解完全的样本经加热和稀释处理后，可以直接进行PCR扩增。所述的加热处理可以降解蛋白变性剂，降低蛋白变性剂对于PCR扩增的抑制，同时可以灭活蛋白酶K。所述的稀释处理可以降低样本裂解液中PCR抑制物的浓度，并降低核本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.根据权利要求1所述的处理生物样本的试剂，其组成包括：裂解液和蛋白酶K溶液，所述裂解液包括缓冲剂、蛋白变性剂、表面活性剂以及金属离子，所述蛋白酶K溶液包括蛋白酶K和蛋白酶K缓冲液，所述蛋白酶K的浓度为1
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30mg/mL。2.根据权利要求1所述的裂解液，其特征在于：所述缓冲剂为三羟基氨基甲烷
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盐酸、磷酸二氢钠
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磷酸氢二钠、硼酸
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硼酸钠、磷酸氢二钠
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磷酸二氢钾、磷酸二氢钾
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氢氧化钠、巴比妥钠
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盐酸或甘氨酸
‑
氢氧化钠中的一种或数种，缓冲剂的浓度为1mM
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100mM，所述裂解液的pH值为7.0
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9.0。3.根据权利要求1所述的裂解液，其特征在于：所述蛋白变性剂为盐酸胍、硫氰酸胍、尿素、硫脲、碘化钠、高氯酸钠、溴酸钠、十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠或月桂醇醚硫酸钠中的一种或数种，浓度为0.1M
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5M。4.根据权利要求1所述的裂解液，其特征在于：所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基磺酸钠、月桂醇醚硫酸钠、N
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月桂酰肌氨酸钠、N
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月桂酰谷氨酸钠、椰油酰胺烷醇硫酸钠、硬脂酸甲酯磺酸钠、十六烷基二苯基醚单磺酸钠、单硬脂酸甘油硫酸酯钠盐、N
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月桂酰基谷氨酸二酯、壬基酚聚氧乙烯醚、辛基酚聚氧乙烯醚、聚氧乙烯山梨醇酐单棕榈酸酯、脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙二醇双月桂酸酯、聚氧丙烯聚氧乙烯甘油醚中的一种或数种的混合物，浓度为0.05％
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5％m/V。5.根据权利要求1所述的裂解液，其特征在于：所述金属离子为钠离子、锂离子、钙离子、镁离子、锰离子、锌离子中的一种或数种的混合物，浓度为1mM
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50mM。6.根据权利要求1所述的处理生物样本的试剂，其特征在于：所述蛋白酶K缓冲液为三羟基...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋东亮，孙晓亮，
申请(专利权)人：翌圣生物科技上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：