一株无色杆菌及其应用、包含该无色杆菌的土壤改良菌剂制造技术

本发明专利技术属于土壤修复菌剂技术领域，具体为一株无色杆菌及其应用、包含该无色杆菌的土壤改良菌剂。该株无色杆菌(Achromobacter sp.)WX1501，保藏日期为2017年6月28日，保藏编号为CCTCC No:M2017392。包含该无色杆菌的土壤改良菌剂按重量份包括：枯草芽孢杆菌2

【技术实现步骤摘要】
一株无色杆菌及其应用、包含该无色杆菌的土壤改良菌剂


[0001]本专利技术属于土壤修复菌剂
，具体为一株无色杆菌及其应用、包含该无色杆菌的土壤改良菌剂。

技术介绍

[0002]植物病害离不开农药的使用，农药一旦进入土壤，残留是不可避免的。残留的农药容易通过植物进入人体，对人体造成危害。虽然土壤对农残有一定的自我降解能力，但自然降解所需的时间较长，需要一个较长的休耕期。随着科技的进步，各种低毒杀菌剂被开发后用于植物病害的防治，异菌脲就是其中一种。异菌脲是一种高效广谱、触杀型杀菌剂，被广泛用于灰霉病的防治，种植草莓、番茄的土壤中常常出现异菌脲超标，产生的草莓、番茄中也常常被检出异菌脲。
[0003]无色杆菌属菌是Achromobacter属的微生物，原产地为中国。近年来，无色杆菌在农用生产中的应用渐渐变得热门。如中国专利文献CN 110699279A公开了一种无色杆菌及其在改善花生铁营养中的应用，其分离得到的菌株具有较强的产铁载体能力，可将土壤中难溶性的铁转化为有效铁，从而增加土壤养分，促进植物对土壤铁的吸收。中国专利文献CN 112694999 A还公开了一株木糖氧化无色杆菌、包括木糖氧化无色杆菌的菌剂，其分离得到的菌株能够在72h内将500mg/kg的敌草隆降解90％以上，敌草隆为一种低毒的取代脲类除草剂。
[0004]本申请的专利技术人于2017年在南海海底沉积物中分离纯化得到一株无色杆菌，对其做了保藏。在对一块被机油污染的耕地土壤进行改良时，专利技术人使用了该无色杆菌，发现这株无色杆菌其对异菌脲也有较好的降解作用。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一株无色杆菌及其应用，以期能降解土壤中所含的异菌脲。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：本专利技术提供了一株无色杆菌(Achromobacter sp .) WX1501，保藏日期为2017年6月28日，保藏编号为 CCTCC No:M2017392。
[0007]上述无色杆菌(Achromobacter sp .) WX1501在降解土壤中异菌脲的应用。申请人在后续的实验中发现，无色杆菌(Achromobacter sp .) WX1501对异菌脲有较好地降解作用。
[0008]本专利技术还提供了一种包含该无色杆菌的土壤改良菌剂。
[0009]在一个实施例中，所述土壤改良菌剂按重量份包括：枯草芽孢杆菌2
‑
3份、地衣芽孢杆菌1
‑
2份、多粘类芽孢杆菌0.5
‑
1份、解淀粉芽孢杆菌0.5
‑
1份、无色杆菌0.5
‑
1份，无色杆菌为保藏编号为CCTCC No:M2017392的无色杆菌。
[0010]作为改进，所述枯草芽孢杆菌有效活菌含量≥80亿/g、地衣芽孢杆菌有效活菌含量≥40亿/g；多粘类芽孢杆菌有效活菌含量≥20亿/g、解淀粉芽孢杆菌有效活菌含量≥20
亿/g、无色杆菌≥10亿/g。
[0011]本专利技术的有益效果：本专利技术提供的无色杆菌(Achromobactersp.)WX1501对土壤中的异菌脲具有较好的降解效果，该无色杆菌与其他常用的土壤改良微生物菌株协同使用，拓展了现有土壤改良菌剂的性能。
[0012]生物保藏说明无色杆菌(Achromobactersp.)WX1501，于2017年6月28日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌区，保藏编号为CCTCCNo:M2017392。
具体实施方式
[0013]实施例1无色杆菌的筛选方法1、实验仪器与试剂箱式沉积物采泥器（德国HYDRO
‑
BIOS
‑
KIEL）、表面张力测定仪（山东淄博科森公司Auto
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tensi
⁃
ometerZL
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2型）、生物安全柜（上海力身科学仪器有限公司）、电子天平（梅特勒
‑
托利多国际贸易(上海)有限公司）、磁力搅拌器（上海梅颖浦仪器仪表制造有限公司）、微生物试剂分液器（杭州大微生物技术有限公司）、纯水仪（Smart
‑
RO上海力身科学仪器有限公司）、叠加式恒温振荡箱（摇床）（苏州捷美电子有限公司）、两槽式培养箱（重庆雅马拓科技有限公司）、PCR扩增仪（HealForce）、立式灭菌器（山东新华医疗器械股份有限公司）等富集培养基(g)：NaNO21.0，CH3COONa4.8，K2HPO4
·
3H2O1.2，Fe3PO4·
4H2O0.01，蒸馏水定容至1L(固体培养基加2%的琼脂)，pH7.0，121
°
C高压灭菌20min。
[0014]筛选培养基(g):NaNO20.5，CH3COONa3.4，K2HPO4·
3H2O1.0，Fe3PO4·
4H2O0.01，MgSO4·
7H2O0.01，NaCl30，蒸馏水定容至1L,pH7.0，121℃高压灭菌20min。
[0015]2、样品的采集使用箱式沉积物取样器，对沉积物表层以下5cm处的沉积物进行采集，用50mL的无菌离心管进行插管，随后用无菌橡胶塞进行封口保存，样品置于冰盒中带回实验室。
[0016]、菌株的富集一次富集：取250g沉积物加到5L的富集瓶中，加入750mL富集培养基，并加入适量的纤维棉，在室温条件下连续曝气富集培养2个月，再此期间每隔5天分别添加50ml的灭菌海水和50ml的富集培养基。
[0017]二次富集：将第一次富集的含有细菌附着量较大的纤维棉样品按5%的比例接种到含有0.2%石油的富集培养基中，于30
°
C，180r/min摇床振荡培养48h，重复操作3次，淘汰弱势菌群。
[0018]、无色杆菌的分离与纯化取适量的富集液使用无菌水稀释至10
‑4、10
‑5、10
‑6，均匀涂布于加有0.5%石油的筛选固体培养基平板上，置于30℃培养48h后，选择不同形态特征的菌落，重新转接至添加0.5%原油的筛选培养基中，相同条件下培养以验证是否具有原油降解能力，培养液变混后，进一步纯化，并检测发酵液表面张力，直至得到有降解能力的纯培养菌株。
[0019]石油降解率的测定：将活化至对数生长期的菌株悬液2mL接入100mL含0.5%石油的筛选培养基
中，以不接菌种的 100 mL 含 0.5% 石油的筛选培养基作为对照，于30
ꢀ°
C，180 r/min摇床振荡培养48 h，采用紫外分光光度法测定。
[0020]ꢀ×
100%发酵液表面张力测定：原油降解菌一般会代谢产生乳化剂一类的生物活性物质，以降低发酵液的表面张力，增强对原油的降解代谢能力。因此，检测发酵液的表面张力变化可以间接反映原油降解菌的代谢活性和原油的乳化、降解情况。本试验中发酵液表面张力测定采用表面张力测定仪。
[0021]、无色杆本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株无色杆菌(Achromobacter sp .) WX1501，保藏日期为2017年6月28日，保藏编号为 CCTCC No:M2017392。2.如权利要求1所述的无色杆菌(Achromobacter sp .) WX1501在降解土壤中异菌脲的应用。3.包含无色杆菌的土壤改良菌剂，其特征在于：所述无色杆菌为权利要求1所述的一株无色杆菌(Achromobacter sp .) WX1501。4.如权利要求3所述的包含无色杆菌的土壤改良菌剂，其特征在于：所述土壤改良菌剂按重量份包括：枯草芽孢杆菌2
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【专利技术属性】
技术研发人员：王勇军，宋福强，吴酬飞，李艳洁，周巍，
申请(专利权)人：浙江归野生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：