一种地衣芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种地衣芽孢杆菌AQ19

【技术实现步骤摘要】
一种地衣芽孢杆菌及其应用


[0001]本专利技术涉及一种地衣芽孢杆菌，以及其作为益生菌在改善水质方面的应用，特别是在改善水产养殖水体方面的应用。

技术介绍

[0002]随着环境保护和农林牧渔业的生态发展，人们尝试开发无污染、无公害的微生物产品，以满足保持生态平衡、合理改造自然的要求。
[0003]尽管微生物的作用机理多样，但基于目前已揭示并达成的基本共识是：微生物的功能不是单一的，往往同时兼具多重功效，例如改善动/植物营养、刺激生长、抑制病菌、防治病虫害、改善水质等等。
[0004]具体到水产养殖领域，集约化高密度养殖是我国当前主要的水产养殖模式，但该模式往往因为饲料过量投喂引起残饵不断积累，进而导致水质恶化。其中，残饵中残留的淀粉是主要的水体污染物。因此，及时水解残饵(尤其是淀粉类有机污染物)是改善水产养殖水体的水质的重要途径。
[0005]因此，本领域希望能够筛选改善水质，尤其是改善水产养殖环境的水质的微生物。

技术实现思路

[0006]鉴于相关技术的上述问题和/或其他问题，本专利技术第一方面提供了一种地衣芽孢杆菌AQ19
‑
11，该地衣芽孢杆菌AQ19
‑
11保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：M 2022012。
[0007]本专利技术第二方面提供了一种微生物菌剂，其中，所述微生物菌剂为上述的地衣芽孢杆菌AQ19
‑
11的发酵菌液或所述发酵菌液制得的菌液制剂或所述发酵菌液经干燥制得的菌粉制剂。
[0008]本专利技术第三方面提供了上述的地衣芽孢杆菌AQ19
‑
11，其作为益生菌在改善水质方面的应用。
[0009]优选的，所述应用为改善水产养殖水体方面的应用。
[0010]本专利技术第四方面提供了上述的微生物菌剂，其作为益生菌在改善水质方面的应用。
[0011]优选的，所述应用为改善水产养殖水体方面的应用。
[0012]本专利技术第五方面提供了一种改善水质的产品，其中，所述改善水质的产品包含上述的地衣芽孢杆菌AQ19
‑
11或者包含上述的微生物菌剂。
[0013]本专利技术提供了一种地衣芽孢杆菌AQ19
‑
11，其对于水体无毒性，且能够水解水体中的淀粉，降低水体中的氨氮含量；本专利技术的地衣芽孢杆菌AQ19
‑
11 能够作为益生菌应用于改善水质，例如用于水环境治理，改善自然水体的水质，或者用于水产养殖，改善水产养殖水体的水质。
附图说明
[0014]图1为本专利技术的地衣芽孢杆菌AQ19
‑
11经染色后在100倍光学显微镜(油镜)下的菌体形态图；
[0015]图2为本专利技术的地衣芽孢杆菌AQ19
‑
11在营养琼脂平板上形成的菌落形态图；
[0016]图3为本专利技术的地衣芽孢杆菌AQ19
‑
11和各对照菌的淀粉酶水解试验结果图；
[0017]图4为本专利技术的地衣芽孢杆菌AQ19
‑
11对水产养殖水体中氨氮含量影响的结果图。
具体实施方式
[0018]以下通过具体实施方式对本专利技术作进一步的说明，但本专利技术并不限于这些具体实施方式。
[0019]下面具体实施方式中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。其中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件(例如参考J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指南》第三版，科学出版社)或按照产品说明书进行。
[0020]一、下面介绍本申请专利技术人从自然环境中分离筛选获得的本专利技术的地衣芽孢杆菌AQ19
‑
11(Bacillus licheniformis AQ19
‑
11)CCTCC No：M 2022012 的操作过程。
[0021]1)初筛；称取养殖淤泥1.0g(取自山东省昌邑市海丰水产养殖有限公司)，混悬于9mL无菌水中，振荡混匀后于80℃水浴静置10min，然后采用稀释涂布平板法和划线平板法在营养琼脂培养基上进行菌株的分离与纯化。无菌操作挑取生长情况良好的单菌落，作为候选菌株，分别接种至无菌营养肉汤后，在30℃、200r/min条件下摇床振荡培养18～24h后制成终浓度为1.0
×
10
6 CFU/mL的菌悬液；
[0022]2)以淀粉酶产生能力作为筛选评价指标进行进一步筛选；无菌操作将上述候选菌株的菌悬液，分别用移液器吸取5μL置于无菌圆形滤纸片上，然后粘贴在淀粉酶水解培养基平板上，于30℃恒温培养24h后在其表面覆盖一层碘液，观察并测定各个候选菌株产生的淀粉酶水解圈直径。
[0023]以专利技术人实验室中已有的淀粉酶产生菌株(以枯草芽孢杆菌 BYK201031)作为对照菌株，将候选菌株中淀粉酶水解圈直径最大的菌株，作为本专利技术筛选获得的具有淀粉酶产生能力的优良菌株，命名为AQ19
‑
11。
[0024]二、关于本专利技术的地衣芽孢杆菌AQ19
‑
11的鉴定过程如下：
[0025](1)分子生物学鉴定
[0026]根据细菌16S rRNA序列，采用系统发育分析对筛选获得的菌株AQ19
‑
11 进行分子生物学的鉴定。
[0027]具体的，将筛选获得的菌株AQ19
‑
11接种到100mL无菌营养肉汤中，在30℃、200r/min条件下摇床振荡培养24h后，于4℃、12000r/min离心1 min，弃上清，然后采用Ezup柱式基因组DNA抽提试剂盒提取菌株的基因组DNA；然后以基因组DNA为模板，对其16S rRNA对应的DNA进行PCR 扩增。其中，正向引物为27F：5
′‑
AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
‑3′
，反向引物为1492R：5
′‑
GGTTACCTTGTTACGACTT
‑3′
；PCR反应体系50.0μL： 10
×
Easy taq Buffer(Mg
2+
)5.0μL，High Pured NTP 4.0μL，正向反向引物各 0.5μL，Easy Taq酶1.0μL，双蒸水补足至50.0μL；PCR的扩增条件为:95℃预变性3min；95℃1min，60℃1min，72℃1min，共35个循环。
经1.0％琼脂糖凝胶电泳检测扩增片段，并采用上海天根生化科技有限公司的DNA纯化回收试剂盒进行切胶回收；回收样品送至上海迈普生物科技有限公司进行测序。
[0028]测定的AQ19
‑
11的16S rRNA对应的基因序列(如SEQ ID NO.1所示)。
[0029]利用GenBank数据库中的NCBI BLAST，将菌株AQ19
‑
11的16S rRNA 序列进行同源性比对，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种地衣芽孢杆菌AQ19
‑
11，该地衣芽孢杆菌AQ19
‑
11保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：M 2022012。2.一种微生物菌剂，其特征在于：所述微生物菌剂为权利要求1所述的地衣芽孢杆菌AQ19
‑
11的发酵菌液或所述发酵菌液制得的菌液制剂或所述发酵菌液经干燥制得的菌粉制剂。3.如权利要求1所述的地衣芽孢杆菌AQ19
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：盖春蕾，许拉，叶海斌，曹海鹏，李家胜，
申请(专利权)人：上海海洋大学绿奥环保科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：