一株具有促进石斛新根生长能力的瘤菌根菌菌株TP-13及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一株具有促进石斛新根生长能力的瘤菌根菌(Epulorhiza sp.)菌株TP

【技术实现步骤摘要】
一株具有促进石斛新根生长能力的瘤菌根菌菌株TP
‑
13及其应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及一株具有促进石斛新根生长能力的瘤菌根菌菌株TP
‑
13及其应用。

技术介绍

[0002]石斛属(Dendrobium Sw.)附生植物，石斛，又名万丈须。假鳞茎丛生，伸长呈茎状，多节；总状花序生茎上部节上，具花数朵或仅 1朵；花大而艳丽，花被片开展，侧萼片宽阔的基部着生在蕊柱足上，与唇瓣基部共同形成萼囊；唇瓣3裂。本属国产种类中具细茎而花小的类群，如细茎石斛、铁皮石斛、梳唇石斛、美花石斛、钩状石斛、霍山石斛等是中药“石斛”的原植物；茎粗而花大的种类均可作花卉供观赏。其中铁皮石斛(Dendrobium officinale)被《道藏》誉为“中华九大仙草之首”，具有多种药理作用。然而石斛植物自然条件下繁殖率低，生长周期长，再加上生境破坏严重，导致野生资源极度匮乏，因此急需人工栽培石斛的方法。
[0003]铁皮石斛幼苗可通过非共生萌发培养和共生萌发培养两种方式获得，通过非共生萌发培养，虽具有较高幼苗率，但是方法获得的幼苗移植到自然环境，由于缺少与之建立共生关系的真菌伙伴，适应能力弱，抗病原微生物能力差，生长缓慢，且存活率低，导致后继生长严重受阻。而共生萌发培养技术是指在特定的基质(培养基)中同时播种植物种子和侵染促进种子萌发的共生真菌，该方法可以提高种子的萌发率、幼苗形成率。但由于兰科植物与其真菌伙伴组成复杂多样，幼苗建成后，幼苗矮小，抵御外界阻力能力弱，生长往往受阻停滞或者直接致死，故幼苗后期生长需要与更适合的真菌形成共生，刺激幼苗继续生长。因此，确定能与铁皮石斛幼苗形成共生关系并促进其生长的有效真菌是培育、保护铁皮石斛的关键环节。而菌根化的幼苗的获取是开展铁皮石斛保护、回归、重建种群实践以及发展铁皮石斛恢复友好栽培的基础。铁皮石斛在各生长阶段所需的真菌种类不一样，通过测定铁皮石斛原球茎和组培苗的生理指标发现，内生真菌主要通过产生内源激素来调节铁皮石斛的生长发育的。然而，现有技术报道了从铁皮石斛幼苗分离获得的真菌菌株，有些菌株能够对石斛种子和原球茎致死，有些菌株则能够促进铁皮石斛生长，主要体现在提高幼苗增长、叶绿素含量、促进营养元素的吸收等方面。新根生长是影响幼苗移栽成活率的重要影响因素，因此，提供一种石斛幼苗新根的内生菌株对于人工培育石斛幼苗会有较大的帮助。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一株瘤菌根菌菌株TP
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13，具有促进铁皮石斛新根生长的能力，从而实现石斛的高效栽培。
[0005]本专利技术提供了一株具有促进石斛新根生长能力的瘤菌根菌 (Epulorhiza sp.)菌株TP
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13，保藏编号为CCTCC NO：M 20211285。
[0006]优选的，所述瘤菌根菌菌株TP
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13的ITS序列如SEQ ID NO:1 所示。
[0007]本专利技术提供了一种用于石斛栽培的产品，包括所述瘤菌根菌菌株 TP
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13和可接受的辅料。
[0008]优选的，所述产品包括微生物菌剂和石斛栽培用菌肥。
[0009]本专利技术提供了所述瘤菌根菌菌株TP
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13或所述产品在石斛栽培中的应用。
[0010]优选的，所述石斛生长包括石斛新根生长、促进幼苗叶片、萌蘖的生长和提高幼苗干重。
[0011]优选的，所述石斛包括铁皮石斛。
[0012]本专利技术提供了一种提高石斛新根生长的方法，包括以下步骤：
[0013]将石斛幼苗和所述瘤菌根菌菌株TP
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13进行共生培养。
[0014]优选的，所述共生培养用培养基为燕麦培养基。
[0015]优选的，所述共生培养的温度为23～27℃，所述共生培养的光暗周期L/D＝12/12，光照强度为2000～3000Lx。
[0016]本专利技术提供的具有促进石斛新根生长能力的瘤菌根菌菌株 TP
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13，保藏编号为CCTCC NO：M 20211285。所述菌株TP
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13是从铁皮石斛幼苗迁地诱导获得的形成共生关系的幼苗菌根中分离筛选得到的。将菌株TP
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13与石斛植物共生培养，菌株TP
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13将石斛植物的菌根化，与其他同批分离的菌株相比，显著促进铁皮石斛幼苗新根的生长，为获得适应性强、成活率高的优质石斛种苗提供了有效途径，有望实现重建石斛种群和实现药用石斛的高效栽培。同时菌株TP
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13 还能不同程度促进幼苗叶片、萌蘖的生长，提高幼苗的干重，从而促进石斛幼苗的生长。
[0017]本专利技术提供一种提高石斛新根生长的方法，该方法简单，操作容易，成本低，适于推广应用，在珍稀濒危兰科植物的回归保护、种群重建实践、药用兰科植物的生态栽培、解决铁皮石斛栽培产业的优质种苗来源瓶颈问题等方面都具有巨大的推广价值。
附图说明
[0018]图1为本专利技术提供的菌株TP
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13与铁皮石斛幼苗共生培养后新根生长能力形态图。
[0019]生物材料保藏信息
[0020]瘤菌根菌属真菌(Epulorhiza sp.)，于2021年10月15日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址：湖北省武汉市武昌区八一路武汉大学，保藏编号为：CCTCC NO:M 20211285，菌株编号为TP
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13。
具体实施方式
[0021]本专利技术提供了一株具有促进石斛新根生长能力的瘤菌根菌菌株TP
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13，保藏编号为CCTCC NO：M 20211285。
[0022]在本专利技术中，所述菌株TP
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13是从铁皮石斛幼苗迁地诱导获得的形成共生关系的幼苗菌根中分离筛选得到的。所述菌株TP
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13的形态特征如下：在PDA平板上培养10天，其菌落呈白色毯状，气生菌丝较发达，规则圆形发散生长，菌落表面粗糙、干燥。所述菌株TP
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13 的菌丝特征如下：在25
±
2℃条件下培养箱内黑暗培养10天，光学显微镜下观察，菌丝粗3.51～4.65μm，分枝近直角，新菌丝着生于老菌丝，新菌丝具更明显隔膜，且隔膜数量更多，老菌丝细胞壁具有加厚现象，隔室较长。采用ITS基因片段进行分子鉴定，所述瘤菌根菌菌
株TP
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13的ITS序列优选如SEQ ID NO:1所示,所述菌株TP
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13与真菌Epulorhiza sp.(登录号：KC154064.1)最为相似，最大相似度达到97.28％。综合形态学、生理生化和分子鉴定结果表明，菌株TP
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13 属于瘤菌根菌(Epulorhiza sp.)。
[0023]在本专利技术中，所述瘤菌根菌菌株TP
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13的扩大培养方法，优选如下：...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株具有促进石斛新根生长能力的瘤菌根菌(Epulorhiza sp.)菌株TP
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13，其特征在于，保藏编号为CCTCC NO：M 20211285。2.根据权利要求1所述瘤菌根菌菌株TP
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13，其特征在于，所述瘤菌根菌菌株TP
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13的ITS序列如SEQ ID NO:1所示。3.一种用于石斛栽培的产品，其特征在于，包括权利要求1或2所述瘤菌根菌菌株TP
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13和可接受的辅料。4.根据权利要求3所述产品，其特征在于，所述产品包括微生物菌剂和石斛栽培用菌肥。5.权利要求1或2所述瘤菌根菌菌株TP
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴益花，高江云，陈德赟，李能奇，
申请(专利权)人：云南大学，
类型：发明
国别省市：