一种丙二烯磷酸二乙酯杂质的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种丙二烯磷酸二乙酯杂质的检测方法，涉及化学药物分析领域，其采用三重四级杆质谱检测器，在ESI正离子模式下，MRM多反应监测模式进行检测。本发明专利技术使用高效液相质谱法的多反应监测模式(MRM)检测丙二烯磷酸二乙酯，灵敏度高，专属性强，可有效控制磷霉素钠中的丙二烯磷酸二乙酯至毒理学阈值(TTC)，即1.5μg/day。即1.5μg/day。即1.5μg/day。

【技术实现步骤摘要】
一种丙二烯磷酸二乙酯杂质的检测方法


[0001]本专利技术涉及化学药物分析领域，特别涉及一种丙二烯磷酸二乙酯杂质的检测方法。

技术介绍

[0002]磷霉素钠的合成路线中，在中间体水解反应未完全的情况下，加入乙醇后，可能会产生丙二烯磷酸二乙酯。通过美国Simulations Plus公司的ADME/T性质预测软件ADMET PredictorTM(version 9.5.0.16)对丙二烯磷酸二乙酯的毒性参数做全面预测，该杂质可能产生基因毒性，属于基因毒性杂质。
[0003]基因毒性杂质(也叫遗传毒杂质)，通常是指能够引起DNA突变、染色体断裂或者DNA重组的物质。由于基因毒性杂质在很低的浓度下即可诱导基因突变并导致染色体的断裂和重排，因此具有潜在的致癌性，近年来对其关注也越来越重，欧盟、美国等药品监管机构也相继发布了关于基因毒和致癌性杂质的指导原则。
[0004]当前面对的问题是，没有相应的检测方法对磷霉素钠中基因毒杂质丙二烯磷酸二乙酯进行研究和控制。
[0005]且基因毒杂质一般要求控制限度较低，相较于其它杂质的研究，难度较大。

技术实现思路

[0006]鉴于目前磷霉素钠的基因毒性杂质研究国内外均未有报道，对此药物的安全性研究不足。本专利技术要解决的技术问题是，提供一种灵敏度高、专属性强，可有效控制磷霉素钠中丙二烯磷酸二乙酯的检测方法，保证药品质量。本专利技术克服了目前磷霉素钠的基因毒性杂质研究空白的缺点，开发了杂质检测方法，用于产品质量的控制。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]一种丙二烯磷酸二乙酯杂质的检测方法，采用三重四级杆质谱检测器，在ESI正离子模式下，MRM多反应监测模式进行检测。
[0009]本专利技术还具有以下附加技术特征：
[0010]优选的，，包括以下步骤：
[0011](1)精密称取丙二烯磷酸二乙酯标准品，配制得到丙二烯磷酸二乙酯对照品储备液和梯度浓度的对照品溶液；
[0012](2)按外标法以MRM图谱中定量离子对的峰面积计算。
[0013]优选的，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶做为填充剂。
[0014]优选的，流动相A体积分数为0.1％甲酸水溶液，流动相B为100％乙腈，稀释液体积比为甲醇：水：甲酸＝55：35：10，流速0.8ml/min，柱温30℃，运行时间30min，梯度洗脱程序如下：
[0015]。
[0016][0017]优选的，所述检测条件为干燥气温度300℃，干燥气流量5L/min，雾化气压力20psi，鞘气温度400℃，鞘气流量11L/min，检测时间为1.6
‑
4.9min，其余时间不流入质谱仪。
[0018]优选的，丙二烯磷酸二乙酯多反应监测模式参数如下：
[0019]Fragmentor定量离子对/碰撞能量定性离子对/碰撞能量87177.09
‑
121(13)177.09
‑
103(25)
[0020]。
[0021]优选的，毛细管电压5500V，喷嘴电压500V。
[0022]优选的，进样量为5μl。
[0023]优选的，所述步骤(2)包括以定量离子的响应对浓度作线性回归方程，所述浓度包括5～7个梯度浓度。
[0024]本专利技术和现有技术相比，其优点在于：
[0025]本专利技术使用高效液相质谱法的多反应监测模式(MRM)检测丙二烯磷酸二乙酯，灵敏度高，专属性强，可有效控制磷霉素钠中的丙二烯磷酸二乙酯至毒理学阈值(TTC)，即1.5μg/day。
[0026]毒理学阈值具体含义为，每天摄入1.5μg的基因毒性杂质，被认为对于大多数药品来说是可以接受的风险(一生中致癌的风险小于100000分之1)。
[0027]本专利技术解决了磷霉素钠基因毒性杂质研究过程中的瓶颈问题，解决了基因毒性杂质的检测灵敏度问题。可有效控制磷霉素钠产品质量。该方法操作简捷，灵敏度高，分离度好，为控制产品质量提供了一种可行有效的分析方法。磷霉素钠对革兰阳性菌、阴性菌均有杀菌作用，对多种耐药的葡萄球菌有较强的抗菌作用，是临床常用的药物。
[0028]当前该检测方法已应用于企业生产中，对磷霉素钠进行稳定性检测，保证产品质量。
附图说明
[0029]下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。
[0030]图1为系统适用性线性回归方程；
[0031]图2为丙二烯磷酸二乙酯TIC图谱；
[0032]图3为丙二烯磷酸二乙酯定性离子图谱；
[0033]图4为丙二烯磷酸二乙酯定量离子图谱；
[0034]图5为结果线性回归方程。
具体实施方式
[0035]以下公开本专利技术的一些实施例，本领域技术人员可以根据本文内容，适当改进工艺参数实现。本专利技术可用于磷霉素钠原料药和制剂异构体杂质控制，也可用于磷霉素钙原料和制剂、磷霉素氨丁三醇原料和制剂异构体杂质控制。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。
[0036]一、方法开发步骤
[0037]根据丙二烯磷酸二乙酯结构，选择正离子模式。
[0038]调整流动相比例使色谱峰峰型、保留时间适宜。
[0039]使用OPTIMIZER软件优化，得到电压、碰撞能量、定量离子对和定性离子对。
[0040]二、检测方法
[0041]用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为100％乙腈，稀释液为甲醇：水：甲酸＝55：35：10，流速0.8ml/min，柱温30℃，进样量5μl，运行时间30min，按下表进行梯度洗脱。
[0042]表1流动相梯度洗脱程序
[0043][0044]采用三重四级杆质谱检测器，电喷雾离子化(ESI)正离子模式下，多反应监测模式(MRM)，干燥气温度300℃，干燥气流量5L/min，雾化气压力20psi，鞘气温度400℃，鞘气流量11L/min，毛细管电压5500V，喷嘴电压500V，检测时间为1.6
‑
4.9min，其余时间不流入质谱仪，丙二烯磷酸二乙酯多反应监测模式参数见下表。
[0045]表2丙二烯磷酸二乙酯多反应监测模式参数
[0046]Fragmentor定量离子对(碰撞能量)定性离子对(碰撞能量)87177.09
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121(13)177.09
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103(25)
[0047]取丙二烯磷酸二乙酯适量，精密称定，置容量瓶中，加甲醇溶解，稀释，配制成含杂质50ng/ml的溶液，作为对照品储备溶液。精密量取对照品储备溶液0.5ml置25ml容量瓶中，加本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种丙二烯磷酸二乙酯杂质的检测方法，其特征在于，采用三重四级杆质谱检测器，在ESI正离子模式下，MRM多反应监测模式进行检测。2.根据权利要求1所述的丙二烯磷酸二乙酯杂质的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)精密称取丙二烯磷酸二乙酯标准品，配制得到丙二烯磷酸二乙酯对照品储备液和梯度浓度的对照品溶液；(2)按外标法以MRM图谱中定量离子对的峰面积计算。3.根据权利要求1所述的丙二烯磷酸二乙酯杂质的检测方法，其特征在于，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶做为填充剂。4.根据权利要求1所述的丙二烯磷酸二乙酯杂质的检测方法，其特征在于，流动相A体积分数为0.1％甲酸水溶液，流动相B为100％乙腈，稀释液体积比为甲醇：水：甲酸＝55：35：10，流速0.8ml/min，柱温30℃，运行时间30min，梯度洗脱程序如下：5.根据权利要求1所述的丙二烯磷酸二乙酯杂质的检测方法，其特征在于，所述检测条件为干燥气温度300...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑玉林，陈玉双，
申请(专利权)人：上海峰林生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：