一种具有促进益生菌生长和抗氧化作用的鱼鳞胶原蛋白肽及制备方法技术

本本发明专利技术属于水产食品加工领域，发明专利技术针对目前我国鱼鳞蛋白资源没有得到充分的利用，根据鱼鳞蛋白的特性，以鱼鳞为原料，通过对鱼鳞超高压、高频超声波等预处理，在不添加任何酸和碱条件下，利用多种蛋白复合酶进行分步酶解，通过膜分离、凝胶分离及反相HPLC分离技术，糖基化改性技术，开发了具有特定氨基酸多肽序列(Phe

【技术实现步骤摘要】
一种具有促进益生菌生长和抗氧化作用的鱼鳞胶原蛋白肽及制备方法


[0001]本专利技术属于水产食品加工领域，具体涉及鱼鳞为原料生产的具有促进益生菌生长和抗氧化功能的蛋白肽，以及蛋白肽的生产方法。

技术介绍

[0002]益生菌是一类对人体健康具有重大意义的微生物。常见有双歧杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、嗜热链球菌属等乳酸菌。益生菌具有促进机体吸收营养物质，提高机体免疫力，提高机体抗氧化水平，抑制肠道炎症等功能，对人体健康具有重要作用，如何高效促进益生菌的生长成为一个需解决的问题。目前有许多研究报道功能性低聚糖可以选择性地促进乳酸菌的增殖，常见的功能性低聚糖有大豆低聚糖、低聚果糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖等。近些年来，随着对人类健康研究的深入和物质分离纯化、鉴定技术的进步，介于氨基酸单体与大分子蛋白质之间的多肽的生理功能日益赢得科学界关注。依据肽的原料来源，外源性生物活性肽可分为动物源、植物源、微生物源活性肽等。生物活性肽的众多来源中，水生生物凭借资源丰富、生理结构与生理过程与陆生生物差别较大的特点，成为外源性生物活性肽资源的宝库。目前水生生物活性肽，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.本发明的目的在于提供一种以鱼鳞为原料制备具有促进益生菌生长和抗氧化的糖基化鱼鳞蛋白肽。该蛋白肽具有较好的促进益生菌生长和抗氧化作用。本发明另一目的是提供上述鱼鳞蛋白糖肽的制备方法。实现本发明的技术方案如下：本发明以鱼鳞为原料，经过大量的实验，开发了一种具有较好促进益生菌生长和抗氧化的鱼鳞蛋白糖肽及制备方法。该蛋白肽按照如下方法制备：(1)选用脱灰的罗非鱼鱼鳞，用符合饮用水卫生标准的清洁水清洗,然后加入3.0～7.0倍鱼鳞重量的水，通过110
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125℃处理60
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120分钟，得到鱼鳞浆液，利用振动筛分离，得到鱼鳞蛋白液。(2)将(1)得到的鱼鳞蛋白液，温度调整到60
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70℃，利用超声波发生器经超声波(频率为90
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120kH)处理20
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30分钟，再利用高静水压力(300
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400Mpa)处理10
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30分钟，改变鱼鳞蛋白的组织结构。(3)调节鱼鳞蛋白液中蛋白含量为10
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12％，按照鱼鳞蛋白液中蛋白重量0.5～1.0％的重量百分比加入复合蛋白酶进行分步酶解，第一步为蛋白重量0.4
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0.8％的复合蛋白酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶组成)，它们之间的质量比为(1～2：1：0.5)，在50～60℃条件下进行酶解反应0.5～2.0h；第二步为蛋白重量0.1
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0.3％的风味蛋白酶，在50～60℃条件下进行酶解反应0.2～1.0h；在90～95℃下保温10～20分钟，冷却至室温，通过板框过滤分离，收集分离液；(4)将步骤(3)所得的分离液通过二步超滤方法进行处理，利用孔径为6000道尔顿的陶瓷膜超滤，先将分子量小于6000道尔顿的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为3000道尔顿的膜将分子量小于3000道尔顿的蛋白肽分离出来。(5)取分子量为小于3000的蛋白肽液，再经过Sephadex G
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15凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第2个洗脱峰；通过浓缩、冷冻干燥，得到鱼鳞蛋白肽；再用RP
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HPLC反相高效液相色谱进行1次分离，反相HPLC的分离条件是以5～90％乙腈溶液作为洗脱液，取16
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18分收集的肽溶液；通过LC
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MS/MS对胶原蛋白肽的主要成分进行测定，其氨基酸序列为Phe
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Lys
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Asp
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Pro
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Ala
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Pro
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Arg
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Pro
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Ser、Lys
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Tyr
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Asp
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Pro
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Lys
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Glu
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Glu
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Leu的肽的含量为50～55％。(6)将步骤(5)得到的肽溶液与低聚异麦芽糖(肽：低聚异麦芽糖的质量比为5
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6：1)在90
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100℃反应30
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60min,通过浓缩、冷冻干燥，得到鱼鳞蛋白糖肽粉。本发明具有的优点:(1)本发明利用鱼鳞和低聚异麦芽糖开发的糖基化鱼鳞蛋白肽整个加工过程中没有添加酸或碱进行pH的调整，产品保持较好的功能特性。(2)开发的蛋白肽具有较好的促进益生菌生长和抗氧化作用。(3)本发明利用特定频率超声波结合超高压技术处理的鱼蛋白液，明显改善鱼鳞蛋白对酶的敏感性，酶解液中蛋白质含量为10％以上，降低酶的使用量。(4)开发的产品在温和条件下，经过适度酶解获得的鱼鳞蛋白肽与低聚异麦芽糖在较温和的条件下进行反应，不加任何添加剂。(5)本发明开发的产品具有良好的风味和色泽，能广泛应用于特需食品和营养食品。(6)本发明开发的产品具有较明确的肽的组成，其中Phe
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Lys
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Pro
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Ala
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Pro
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Pro
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Ser、Lys
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Tyr
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Asp
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Pro
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Lys
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Glu
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Glu
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Leu的肽的含量为50％以上。具体实施方式
实施例1具有促进益生菌生长和抗氧化作用的鱼蛋白糖肽及制备方法(1)选用脱灰的罗非鱼鱼鳞，用符合饮用水卫生标准的清洁水清洗,然后加入3.0倍鱼鳞重量的水，通过125℃处理60分钟，得到鱼鳞浆液，利用振动筛分离，得到鱼鳞蛋白液。(2)将(1)得到的鱼鳞蛋白液，温度调整到60℃，利用超声波发生器经超声波(频率为120kH)处理20分钟，再利用高静水压力(300Mpa)处理10分钟，改变鱼鳞蛋白的组织结构。(3)调节鱼鳞蛋白液中蛋白含量为10％，按照鱼鳞蛋白液中蛋白重量0.5％的重量百分比加入复合蛋白酶进行分步酶解，第一步为蛋白重量0.4％的复合蛋白酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶组成)，它们之间的质量比为(1：1：0.5)，在50℃条件下进行酶解反应2.0h；第二步为蛋白重量0.1％的风味蛋白酶，在60℃条件下进行酶解反应0.5h；在95℃下保温10分钟，冷却至室温，通过板框过滤分离，收集分离液；(4)将步骤(3)所得的分离液通过二步超滤方法进行处理，利用孔径为6000 道尔顿的陶瓷膜超滤，先将分子量小于6000道尔顿的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为3000道尔顿的膜将分子量小于3000道尔顿的蛋白肽分离出来。(5)取分子量为小于3000的蛋白肽液，再经过Sephadex G
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15凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第2个洗脱峰；通过浓缩、冷冻干燥，得到鱼鳞蛋白肽；再用RP
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HPLC反相高效液相色谱进行1次分离，反相HPLC的分离条件是以5～90％乙腈溶液作为洗脱液，取16
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18分收集的肽溶液；通过LC
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MS/MS对胶原蛋白肽的主要成分进行测定，其氨基酸序列为Phe
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Lys
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Asp
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Pro
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Ala
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Pro
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Pro
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Ser、Lys
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Asp
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Pro
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Glu
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Glu
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Leu的肽的含量为50.7％。(6)将步骤(5)得到的肽溶液与低聚异麦芽糖(肽：低聚异麦芽糖的质量比为5：1)在90℃反应60min,通过浓缩、冷冻干燥，得到鱼鳞蛋白糖肽粉。实施例2具有促进益生菌生长和抗氧化作用的鱼蛋白糖肽及制备方法(1)选用脱灰的罗非鱼鱼鳞，用符合饮用水卫生标准的清洁水清洗,然后加入7.0倍鱼鳞重量的水，通过110℃处理60分钟，得到鱼鳞浆液，利用振动筛分离，得到鱼鳞蛋白液。(2)将(1)得到的鱼鳞蛋白液，温度调整到70℃，利用超声波发生器经超声波(频率为90kH)处理30分钟，再利用高静水压力(350M...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘镜，罗永康，李家福，
申请(专利权)人：云南海王水产有限公司，
类型：发明
国别省市：