一种外周血DMARDs耐药相关的标志物的筛选方法技术

本发明专利技术公开了一种外周血DMARDs耐药相关的标志物的筛选方法，属于生物医学技术领域，步骤为：通过生物信息学方法初步筛选与RA治疗药物耐药相关的外周血标志物；利用临床样本对初步筛选的耐药标志物进行验证，明确其表达水平与药物治疗敏感性之间的关系；采用流式细胞技术分离外周血细胞中不同有核细胞亚群，对不同亚群细胞进行耐药标志物表达量检测，建立RA药物治疗耐药标志物检测方法；选取临床未接受药物治疗的RA患者进行前瞻性实验验证，验证已建立检测方法的有效性，明确其转化临床应用的可行性。本发明专利技术保证了候选标志物的可靠性，以患者外周血为样本建立有效简单的RA耐药标志物检测方法，并以前瞻性实验验证其可靠性。并以前瞻性实验验证其可靠性。并以前瞻性实验验证其可靠性。

A screening method of drug resistance related markers of DMARDs in peripheral blood

【技术实现步骤摘要】
一种外周血DMARDs耐药相关的标志物的筛选方法


[0001]本专利技术涉及生物医学
，特别涉及一种外周血DMARDs耐药相关的标志物的筛选方法。

技术介绍

[0002]RA，rheumatoid arthritis是一种影响关节的慢性自身免疫性疾病。其主要临床特点是受累关节的进行性对称性炎症改变，从而导致软骨破坏，骨质侵蚀，进而影响机体正常运动机能。RA早期只受累少数远端关节，但随着病情的进展，全身关节均可发生不同程度的病理变化，并伴发多种关节外症状。据统计，全球RA的发病率在0.3％到1.3％，我国RA发病率接近0.4％，其发病率随性别(RA在女性中的发病率大约是男性的3倍)，居住环境(北方高于南方，城市高于农村)有显著相关性。目前，RA是最普遍的慢性炎症疾病之一。早期RA的临床特征多为全身性症状，如疲劳、流感样症状、关节肿胀触痛和晨僵，如果得不到及时有效的干预治疗，随着病情进展会出现多种其他关节外症状，如胸膜腔积液、肺结节、间质性肺、淋巴瘤、中小动脉血管炎、角结膜炎、动脉粥样硬化、血液学异常(例如，贫血、白细胞减少症、中性粒细胞减少本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种外周血DMARDs耐药相关的标志物的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：筛选生物制剂DMARDs药物治疗耐药标志物，通过生物信息学方法初步筛选与RA治疗药物耐药相关的外周血标志物；步骤2：候选标志物临床样本验证，利用临床样本对初步筛选的耐药标志物进行验证，明确其表达水平与药物治疗敏感性之间的关系；步骤3：建立药物敏感性标志物检测方法，采用流式细胞技术分离外周血细胞中不同有核细胞亚群，对不同亚群细胞进行耐药标志物表达量检测，建立RA药物治疗耐药标志物检测方法，并优化标志物检出效率；步骤4：药物敏感性标志物检测方法临床验证，选取临床未接受药物治疗的RA患者进行前瞻性实验验证，验证已建立检测方法的有效性，明确其转化临床应用的可行性。2.如权利要求1所述的外周血DMARDs耐药相关的标志物的筛选方法，其特征在于，步骤1的具体步骤为：GEO数据库筛选接受生物制剂DMARDs药物治疗RA患者外周血基因表达谱芯片，分别对不同生物制剂DMARDs药物治疗后临床缓解症状为标准，区分耐药组与敏感组，并利用生物信息学方法筛选不同组别中耐药患者与敏感患者外周血中表达水平具有显著差异的基因，通过互作分析、免疫细胞浸润分析、以及基因功能分析筛选出关键节点基因为候选耐药相关标志物。3.如权利要求2所述的外周血DMARDs耐药相关的标志物的筛选方法，其特征在于，对RA治疗药物耐药特征性芯片数据进行标准化转换并进行差异分析，差异标准选取log2 FC>1,p<0.05，对所有满足差异筛选标准的基因进行基因功能富集分析，并利用生物信息学工具进行蛋白互作分析，并采用三种模式进行关键节点基因筛选，三种算法均取排名前30个基因为关键节点基因并对其进行合成分析，选择所有算法重叠基因为初步筛选标志物。4.如权利要求1所述的外周血DMARDs耐药相关的标志物的筛选方法，其特征在于，步骤2的具体步骤为：对候选标志物进行临床样本验证，以临床接受DMARDs治疗RA患者外周血为样本，采用荧光定量PCR方法对候选标志物进行基因扩增，通过对比治疗药物敏感性不同的患者，验证候选基因的可靠性，对通过验证的候选基因进行表达量分析，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王秋波，刘庆阳，钱希铭，殷剑，褚莹，姜风英，
申请(专利权)人：无锡市第九人民医院，
类型：发明
国别省市：