一种建立吴茱萸标准汤剂定量指纹图谱的方法技术

本发明专利技术公开了一种建立吴茱萸标准汤剂定量指纹图谱的方法，涉及指纹图谱的建立领域，包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备；(2)供试品溶液的制备；(3)超高效液相色谱分析；(4)定量指纹图谱的建立，将多批次液相色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”，匹配共有峰，生成对照特征图谱，选定参照峰，计算各特征峰的相对保留时间，并结合柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱3个成分的含量测定，建立吴茱萸标准汤剂的定量指纹图谱。本发明专利技术通过一次分析可同时实现吴茱萸标准汤剂特征图谱和含量测定的检测，能有效减少测定时间、提高工作效率，为吴茱萸配方颗粒的质量和一致性评价提供保障。障。

A method of establishing quantitative fingerprint of Evodia rutaecarpa standard decoction

【技术实现步骤摘要】
一种建立吴茱萸标准汤剂定量指纹图谱的方法


[0001]本专利技术涉及指纹图谱的建立领域，具体是一种建立吴茱萸标准汤剂定量指纹图谱的方法。

技术介绍

[0002]吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth.、石虎E.rutaecarpa(Juss.)Benth.var.officinalis(Dode)Huang或疏毛吴茱萸E.rutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huang的干燥近成熟果实，具有散寒止痛，降逆止呕，助阳止泻的功效，用于厥阴头痛，寒疝腹痛，寒湿脚气，经行腹痛，脘腹胀痛，呕吐吞酸，五更泄泻等。现代研究表明，吴茱萸中主要含有生物碱类、苦味素类、挥发油类和黄酮类等成分，其中吴茱萸碱和吴茱萸次碱为其主要活性成分。现代药理研究表明，其具有镇痛抗炎、抗溃疡、抗菌、抗肿瘤以及对心血管系统的保护等作用[刘丽.中草药,2020,51(10):2689
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2702]。
[0003]中药配方颗粒是在中医药理论指导下，由单味中药饮片经水提、分离、浓缩、干燥、制粒而成，按照中医临床处方调配后，可供患者冲服使用的颗粒[国家药监局.关于结束中药配方颗粒试点工作的公告,2021
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20.]。是为适应现代社会需求而出现的一种新的饮片使用形式，具有免煎易服、剂量准确、安全卫生、便于携带等优点，既满足了中医临床辨证论治、随证加减的临床用药特点，又有利于药房调剂及中药的标准化，在现代临床中被广泛使用。《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》中规定为使中药配方颗粒能够承载中药饮片安全性、有效性，需要以标准汤剂为桥接。因此，中药配方颗粒生产工艺及质量标准研究应以标准汤剂为对照，标准汤剂是衡量中药配方颗粒是否与其相对应的中药饮片临床汤剂基本一致的物质基准，标准汤剂的质量标准研究对中药配方颗粒的质量控制尤为重要。
[0004]目前，国家药典委已公布吴茱萸配方颗粒国家标准，其药材来源为吴茱萸基原，标准中规定的质量控制方法包括特征图谱和含量测定两项，在进行样品质量检测时，分别采用两种仪器、两种方法对吴茱萸配方颗粒进行质量控制，分析时间和效率被制约。此外，张红梅等建立了吴茱萸药材的UPLC定量指纹图谱，通过相似度及柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量测定，对来自不同产地的吴茱萸药材进行质量评价[张红梅.中国实验方剂学杂志,2014,20(17):69
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73.]，但文中匹配确定了指纹图谱中9个共有峰，且未对9个峰进行峰指认。戚华文等采用HPLC技术，建立了吴茱萸药材的定量指纹图谱方法，对13个共有色谱峰进行匹配和质谱定性，并对吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱和水仙苷4个成分进行含量测定，但采用的HPLC技术分析时间过长，影响分析时间和效率[戚华文.中草药,2021,52(14):4341
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4347.]。
[0005]现有的标准及文献中，吴茱萸(石虎)标准汤剂缺少有效的质量控制方法，难以为吴茱萸(石虎)配方颗粒的质量控制提供参考。基原相近的吴茱萸配方颗粒国标方法存在分析时间较长，分析效率低，质控方法不够全面等问题，且文献报道吴茱萸药材的质控方法多
为醇提，且分析时间长，无法满足吴茱萸(石虎)标准汤剂的质控需求。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一，因此，本专利技术利用UPLC技术，建立一种快速高效用于吴茱萸(石虎)标准汤剂质量检测的方法，为吴茱萸(石虎)标准汤剂及配方颗粒的质量和一致性评价提供保障。
[0007]本专利技术的技术解决方案如下：
[0008]一种建立吴茱萸标准汤剂定量指纹图谱的方法，包括以下步骤：
[0009](1)制备对照品溶液；
[0010](2)制备多批次吴茱萸标准汤剂供试品溶液；
[0011](3)将步骤(2)中的多批次吴茱萸标准汤剂供试品溶液分别在超高效液相色谱分析仪中进行分析，获得多批次液相色谱图；
[0012](4)定量指纹图谱的建立，将步骤(3)中的多批次液相色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件，匹配共有峰，生成对照特征图谱，选定参照峰，计算各特征峰的相对保留时间，并同时在上述同一台超高效液相色谱分析仪对柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱3个成分的含量测定，建立吴茱萸标准汤剂的定量指纹图谱。
[0013]优选地，具体包括以下步骤：
[0014]a：指纹图谱方法的建立：
[0015]步骤a1：对照品溶液的制备：取绿原酸、金丝桃苷对照品适量，精密称定，以50
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100％的甲醇(V/V)或50
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100％的乙醇(V/V)制成含绿原酸、金丝桃苷的混合对照品溶液；
[0016]步骤a2：供试品溶液的制备：取吴茱萸标准汤剂冻干粉，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入体积浓度为50
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100％的甲醇溶剂或体积浓度为50
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100％的乙醇溶剂，料液比(样品与溶剂的比)为1：25
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1：100g/mL，密塞，称定重量，回流或超声处理10
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30min，放冷至室温，用相应溶剂补足损失重量，摇匀、离心、取上清液滤过，即得吴茱萸标准汤剂供试品溶液；
[0017]步骤a3：超高效液相色谱(UPLC)分析：按照步骤2方法制备3个以上不同批次吴茱萸标准汤剂供试品溶液，分别吸取对照品溶液及供试品溶液，分别注入超高效液相色谱仪，分别记录液相色谱图；
[0018]步骤a4：指纹图谱的建立：将至少3个以上不同批次吴茱萸标准汤剂供试品液相色谱图导入“中药色谱特征图谱相似度评价系统软件”，匹配共有峰，生成对照特征图谱，对共有峰进行指认；并以绿原酸和金丝桃苷为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间；
[0019]b：含量测定方法的建立：
[0020]步骤b1：对照品溶液的制备：取柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱对照品适量，精密称定，加入50
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100％的甲醇(V/V)或50
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100％的乙醇(V/V)制成含柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的对照品混合溶液；
[0021]步骤b2：供试品溶液的制备：取吴茱萸标准汤剂冻干粉，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入体积浓度为50
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100％的甲醇溶剂或体积浓度为50
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100％的乙醇溶剂，料液比(样品与溶剂的比)为1：25
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1：100g/mL，密塞，称定重量，回流或超声处理10
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30min，放冷至室温，用相应溶剂补足损失重量，摇匀、离心、取上清液滤过，即得吴茱萸标准汤剂供试品溶
液；
[0022]步骤b3：超高效液相色谱(UPLC)分析：按照步骤2方法制备3个以上不同批次吴茱萸标准汤剂供试品溶液，分别吸取对照品溶液及供试品溶液，分别注入超高效液相色本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种建立吴茱萸标准汤剂定量指纹图谱的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备对照品溶液；(2)制备多批次吴茱萸标准汤剂供试品溶液；(3)将步骤(2)中的多批次吴茱萸标准汤剂供试品溶液分别在超高效液相色谱分析仪中进行分析，获得多批次液相色谱图；(4)定量指纹图谱的建立，将步骤(3)中的多批次液相色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件，匹配共有峰，生成对照特征图谱，选定参照峰，计算各特征峰的相对保留时间，并同时在上述同一台超高效液相色谱分析仪对柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱3个成分的含量测定，建立吴茱萸标准汤剂的定量指纹图谱。2.根据权利要求1所述的一种建立吴茱萸标准汤剂定量指纹图谱的方法，其特征在于，a：指纹图谱方法的建立：步骤a1：对照品溶液的制备：取绿原酸、金丝桃苷对照品，以体积分数为50
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100％的甲醇或体积分数为50
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100％的乙醇为溶剂，制成含有绿原酸、金丝桃苷的混合对照品溶液；步骤a2：供试品溶液的制备：取吴茱萸标准汤剂冻干粉，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入体积浓度为50
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100％的甲醇溶剂或体积浓度为50
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100％的乙醇溶剂，料液比为1：25
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1：100g/mL，密塞，称定重量，回流或超声处理10
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30min，放冷至室温，用相应溶剂补足损失重量，摇匀、离心、取上清液滤过，即得吴茱萸标准汤剂供试品溶液；步骤a3：超高效液相色谱分析：按照步骤a2方法制备3个以上不同批次吴茱萸标准汤剂供试品溶液，分别吸取对照品溶液及供试品溶液，分别注入超高效液相色谱仪，分别记录液相色谱图；步骤a4：指纹图谱的建立：将至少3个以上不同批次吴茱萸标准汤剂供试品液相色谱图导入“中药色谱特征图谱相似度评价系统软件”，匹配共有峰，生成对照特征图谱，对共有峰进行指认；并以绿原酸和金丝桃苷为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间；b：含量测定方法的建立：步骤b1：对照品溶液的制备：取柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱对照品适量，精密称定，加入体积分数50
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100％的甲醇或体积分数50
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100％的乙醇制成含柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的对照品混合溶液；步骤b2：与步骤a2一致；步骤b3：超高效液相色谱分析：按照步骤2方法制备3个以上不同批次吴茱萸标准汤剂供试品溶液，分别吸取对照品溶液及供试品溶液，分别注入超高效液相色谱仪，测定对照品与供试品中柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的相应峰面积；步骤b4：含量测定方法的建立：通过外标法计算吴茱萸标准汤剂冻干粉中柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量。3.根据权利要求2所述的一种建立吴茱萸标准汤剂定量指纹图谱的方法，其特征在于，所述步骤a1中，制成的混合对照品溶液浓度分别为每1mL含绿原酸20
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40μg、金丝桃苷10
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30μg。4.根据权利要求2所述的一种建立吴茱萸标准汤剂定量指纹图谱的方法，其特征在于，所述a3和b3中，超高效液相色谱分析的色谱条件为：色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH Shield RP18，内径2.1mm，柱长100mm，粒径1.7μm，柱温为30
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【专利技术属性】
技术研发人员：梁鑫淼，薛倩倩，金红利，陆绍铭，张旗，刘艳芳，许妍，
申请(专利权)人：赣江中药创新中心，
类型：发明
国别省市：