【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及液相色谱固定相，具体讲是一种高ph稳定反相色谱固定相及其制备方法。
技术介绍
1、反相液相色谱具有柱效高、分离能力强、保留机理清楚等优点，是液相色谱分离模式中使用最为广泛的一种，广泛应用于药物分子、生物大分子、蛋白质及酶等样品的分离分析。反相色谱是以表面非极性载体为固定相，以比固定相极性强的溶剂为流动相的一种液相色谱分离模式。反相色谱固定相大多是硅胶表面键合疏水基团，基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离。但是当使用反相固定相对碱性化合物进行分析时，除了疏水作用，还伴随着碱性化合物和硅胶表面残留的硅烷醇之间的静电相互作用，因此会导致碱性化合物的峰形拖尾等[borges,e.m.et al,j.pharm.biomed.anal,2013,77,100-115]。而为了改善碱性化合物拖尾的问题，研究者们在流动相方面提出了一系列改善措施，为减少硅醇基和碱性化合物的离子交换作用，可以使用低ph值流动相以抑制硅醇基的电离，或使用高ph值流动相抑制生物碱的电离，也可加入有机胺改性剂竞争占据离子化硅醇基，从而阻断碱性化合物与硅醇基间的相互作用。其中用高ph方法分析碱性化合物时，当流动相ph>8时，由于二氧化硅颗粒的溶解，会发生硅胶表面侵蚀，导致柱效下降，柱压增加，硅胶基质填料色谱柱的柱床坍塌，因此硅胶基质填料在碱性条件下的耐受程度是一个具有挑战性的问题[kirkland,j.j.；henderson,j.w.；de stefano,j.j.；van straten,m.a.；claessens,h.a.j
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一，提供一种高ph稳定反相色谱固定相的制备方法。
2、本专利技术的技术解决方案如下：
3、一种高ph稳定反相色谱固定相，其结构式如下：
4、其中silica gel为硅胶，r为苯基、氧苯基或碳数为5-27的烷基链，n＝0-5。
5、本专利技术还公开了一种高ph稳定反相色谱固定相的制备方法，包括以下步骤：
6、s1：硅胶预处理：将硅胶加入浓度为10～40wt％的强酸溶液中，加热回流搅拌1～48小时，过滤，用水洗涤至ph＝6～7，所得固体于80～160℃条件下真空干燥8～24小时，得酸化后硅胶；
7、s2：硅烷化反应键合：在氮气或氩气保护下，在有机溶剂中加入硅烷偶联剂、碱性催化剂和酸化后硅胶，在40～150℃下反应3～24小时，过滤，依次用二甲苯、甲醇、甲醇水、甲醇、四氢呋喃洗涤，所得固体于40～80℃条件下真空干燥8～24小时，得到中间体；
8、s3：第一步液相硅烷化反应封端：在氮气或氩气保护下，在有机溶剂中加入硅烷化试剂、碱性催化剂和中间体，在30～180℃下反应3～24小时，过滤，依次用二甲苯、甲醇、甲醇水、甲醇、四氢呋喃洗涤，所得固体于40～80℃条件下真空干燥8～24小时，得到初步封端的固定相；
9、s4：第二步液相硅烷化反应封端：在氮气或氩气保护下，在有机溶剂中加入两种或两种以上三甲基硅烷化试剂、碱性催化剂和初步封端的固定相，在30～180℃下反应3～24小时，过滤，依次用二甲苯、甲醇、甲醇水、甲醇、四氢呋喃洗涤，所得固体于40～80℃条件下真空干燥8～24小时，得到色谱固定相。
10、进一步地，步骤s1中，所述强酸为盐酸、硝酸、硫酸中的至少一种。
11、进一步地，步骤s2中，所述硅烷偶联剂有如下结构：
12、其中，x为氯、甲氧基或乙氧基中的一种，r为苯基、氧苯基或碳数为5-27的烷基链。
13、进一步地，步骤s2中，所述有机溶剂为与水不互溶的二氯甲烷、甲苯、二甲苯、正庚烷、异辛烷中的至少一种。
14、进一步地，步骤s2中，所述碱性催化剂为二异丙基乙胺、三乙胺、1,8-二氮杂环[5,4,0]十一烯-7、1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯、n,n-二甲基吡啶、吡啶、咪唑中的至少一种。
15、进一步地，步骤s3中，所述硅烷化试剂为正辛基二甲基氯硅烷、正庚基二甲基氯硅烷、正己基二甲基氯硅烷、正戊基二甲基氯硅烷、正丁基二甲基氯硅烷、正丙基二甲基氯硅烷的至少一种。
16、进一步地，步骤s3中，
17、所述碱性催化剂为二异丙基乙胺、三乙胺、1,8-二氮杂环[5,4,0]十一烯-7、1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯、n,n-二甲基吡啶、吡啶、咪唑中的至少一种；
18、所述有机溶剂为甲苯、二甲苯、正庚烷、异辛烷、二苯醚中的至少一种。
19、进一步地，步骤s4中，
20、所述硅烷化试剂三甲基氯硅烷、六甲基二硅氮烷、三甲基硅咪唑、三氟甲磺酸三甲基硅烷、双(三甲基硅)乙酰胺、双(三甲基硅)三氟乙酰胺、二甲基氨三甲基硅烷中的两种或两种以上；
21、所述有机溶剂为甲苯、二甲苯、正庚烷、异辛烷、二苯醚中的至少一种；
22、所述碱性催化剂为二异丙基乙胺、三乙胺、1,8-二氮杂环[5,4,0]十一烯-7、1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯、n,n-二甲基吡啶、吡啶、咪唑中的至少一种。
23、进一步地，步骤s1中，所述强酸溶液的用量为每克硅胶5-20ml；
24、步骤s2中，
25、所述有机溶剂的用量为每克硅胶5-20ml；
26、所述硅烷偶联剂的用量为每克硅胶1-10mmol；
27、所述碱性催化剂的用量为每克硅胶3-30mmol；
28、步骤s3中，
29、所述有机溶剂的用量为每克硅胶5-20ml；
30、所述每种硅烷化试剂的用量为每克硅胶1-20mmol；
31、所述碱性催化剂的用量为每克硅胶1-40mmol；
32、步骤s4中，
33、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种高pH稳定反相色谱固定相，其特征在于，其结构式如下：其中Silica Gel为硅胶，R为苯基、氧苯基或碳数为5-27的烷基链，n＝0-5。
2.一种高pH稳定反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的一种高pH稳定反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述强酸为盐酸、硝酸、硫酸中的至少一种。
4.根据权利要求2所述的一种高pH稳定反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述硅烷偶联剂有如下结构：
5.根据权利要求2所述的一种高pH稳定反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述有机溶剂为与水不互溶的二氯甲烷、甲苯、二甲苯、正庚烷、异辛烷中的至少一种。
6.根据权利要求2所述的一种高pH稳定反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述碱性催化剂为二异丙基乙胺、三乙胺、1,8-二氮杂环[5,4,0]十一烯-7、1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯、N,N-二甲基吡啶、吡啶、咪唑中的至少一种。
7.根据权利要求2所述的一种高
8.根据权利要求2所述的一种高pH稳定反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤S3中，
9.根据权利要求2所述的一种高pH稳定反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤S4中，
10.根据权利要求2所述的一种高pH稳定反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所用的强酸溶液的用量为每克硅胶5-20mL；
...【技术特征摘要】
1.一种高ph稳定反相色谱固定相，其特征在于，其结构式如下：其中silica gel为硅胶，r为苯基、氧苯基或碳数为5-27的烷基链，n＝0-5。
2.一种高ph稳定反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的一种高ph稳定反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤s1中，所述强酸为盐酸、硝酸、硫酸中的至少一种。
4.根据权利要求2所述的一种高ph稳定反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤s2中，所述硅烷偶联剂有如下结构：
5.根据权利要求2所述的一种高ph稳定反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤s2中，所述有机溶剂为与水不互溶的二氯甲烷、甲苯、二甲苯、正庚烷、异辛烷中的至少一种。
6.根据权利要求2所述的一种高ph稳定反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤s...
【专利技术属性】
技术研发人员：俞冬萍，韩紫薇，郭志谋，金高娃，周永正，
申请(专利权)人：赣江中药创新中心，
类型：发明
国别省市：
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