一种人血管炎检测试剂盒制造技术

本申请涉及医学检测的技术领域，具体公开了一种人血管炎检测试剂盒。所述试剂盒包括：由PR3抗原、MPO抗原、GBM抗原分别包被的荧光编码磁性微球的混合液；利用荧光素标记的二抗溶液；样本稀释液；微球清洗液。本申请提供的试剂盒能够同时获得抗PR3抗体、抗MPO抗体、抗GBM抗体的定性以及定量结果。体的定性以及定量结果。

【技术实现步骤摘要】
一种人血管炎检测试剂盒


[0001]本申请涉及医学检测的
，更具体地说，它涉及一种人血管炎检测试剂盒。

技术介绍

[0002]系统性血管炎(systemic vasculitis)是一组以血管坏死和炎症为主要病理改变的疾病，临床表现因受累血管的类型、大小、部位及病理特点不同而表现各异。常见的血管炎有魏格纳氏肉芽肿、显微镜下血管炎、肺出血
‑
肾炎综合征和结节性多动脉炎等。其常累及全身多个系统，既可以引起多系统多脏器功能障碍，但也可局限于某一脏器。由于血管炎的临床表现复杂，病情偏重，早期诊治困难，致残率、病死率高，预后差，因此，血管炎的早期治疗非常重要。
[0003]特征性的抗中性粒细胞胞质抗体(anti
‑
neutrophil cytoplasmic antibody，ANCA)是一种以中性粒细胞和单核细胞胞质成分为靶抗原的自身抗体，包括了大量的自身抗体，其中，抗蛋白酶3(PR3)抗体和抗髓过氧化物酶(MPO)抗体是最重要的ANCA抗体。研究表明，抗PR3抗体和抗MPO抗体参与了血管炎的发病机制。上述两种抗体可以激活人中性粒细胞并致脱颗粒反应，使中性粒细胞释放大量有害的蛋白水解酶和氧自由基，从而导致血管壁的损害，造成血管炎的发生。另外，肺出血
‑
肾炎综合征患者中还能检测到抗肾小球基底膜(GBM)抗体。因此，抗PR3抗体、抗MPO抗体、抗GBM抗体均为血管炎的检测指标。
[0004]目前，上述检测指标的检测方法通常有酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、放射免疫法(radioimmunoassay，RIA)、间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence，IIF)等。其中，ELISA法操作繁琐，且样本需要预处理，检测时间较长；RIA法虽可以直接以血浆为样本检测，但该法不仅会污染环境，还会对操作者有一定的放射性辐射，同时还需要尖端复杂的设备，成本也较高；IIF法操作相对复杂，需要价格较昂贵的荧光显微镜，只能进行定性检测，不能进行定量测定，在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别。同时，上述检测方法仅能实现对上述单一检测指标的定性或定量检测。

技术实现思路

[0005]为了能够同时获得抗PR3抗体、抗MPO抗体、抗GBM抗体的定性以及定量结果，本申请提供一种人血管炎检测试剂盒。
[0006]本申请提供的一种人血管炎检测试剂盒，采用如下的技术方案：
[0007]一种人血管炎检测试剂盒，所述试剂盒包括：
[0008]由PR3抗原、MPO抗原、GBM抗原分别包被的荧光编码磁性微球的混合液；
[0009]利用荧光素标记的二抗溶液；
[0010]样本稀释液；
[0011]微球清洗液。
[0012]本申请的试剂盒主要包括混合液和二抗溶液。混合液中包含利用PR3抗原、MPO抗
原和GBM抗原分别包被的荧光编码磁性微球；在进行抗PR3抗体、抗MPO抗体和抗GBM抗体定量联合检测的过程中，先将待测样本与混合液反应，通过混合液中的PR3抗原、MPO抗原和GBM抗原分别与待测样本中的待测抗PR3抗体、抗MPO抗体和抗GBM抗体的识别和结合，从而使得待测样本中的待测抗PR3抗体、抗MPO抗体和抗GBM抗体间接与荧光编码磁性微球结合。
[0013]利用荧光素标记的二抗溶液中包含抗人IgG抗体。在待测样本中的待测抗PR3抗体、抗MPO抗体和抗GBM抗体间接与荧光编码磁性微球结合后，再利用荧光素标记抗人IgG抗体与待测样本中的待测抗PR3抗体、抗MPO抗体和抗GBM抗体识别和结合，从而完成对待测样本中的待测抗PR3抗体、抗MPO抗体和抗GBM抗体的荧光标记。再利用流式细胞仪对待测样本中的待测抗PR3抗体、抗MPO抗体和抗GBM抗体进行检测，获得待测样本中的待测抗PR3抗体、抗MPO抗体和抗GBM抗体各自对应的荧光信号强度，再根据利用校准品制备的标准曲线中抗体相对浓度与荧光信号强度的关系，以检测获得的待测样本中的待测抗PR3抗体、抗MPO抗体和抗GBM抗体各自对应的荧光信号强度为基础，找到与之对应的抗体相对浓度，从而获得待测样本中的待测抗PR3抗体、抗MPO抗体和抗GBM抗体各自对应的浓度，完成对待测样本中抗PR3抗体、抗MPO抗体和抗GBM抗体的相对浓度检测。
[0014]试剂盒中除了包括混合液和二抗溶液外，还包括校准品和缓冲液。校准品为含有抗PR3抗体、抗MPO抗体和抗GBM抗体的标准浓度溶液，通过利用上述试剂盒检测不同浓度的标准溶液的荧光信号强度，从而获得抗PR3抗体、抗MPO抗体和抗GBM抗体与荧光信号强度的标准曲线。因此，利用本申请的试剂盒，可同时检测获得待测样本中抗PR3抗体、抗MPO抗体和抗GBM抗体的相对浓度。
[0015]所述样本稀释液为包含1％的BSA的1xPBS。
[0016]所述微球清洗液为包含1％的吐温
‑
20的1xPBS。
[0017]优选的，所述混合液中，PR3抗原与荧光编码磁性微球的包被比例为：40
‑
50μg的抗原包被1
×
107个磁性荧光编码微球。
[0018]优选的，所述混合液中，MPO抗原与荧光编码磁性微球的包被比例为：40
‑
50μg的抗原包被1
×
107个磁性荧光编码微球。
[0019]优选的，所述混合液中，GBM抗原与荧光编码磁性微球的包被比例为：40
‑
50μg的抗原包被1
×
107个磁性荧光编码微球。
[0020]通过采用上述技术方案，经过试验分析，制备混合液的过程中，将PR3抗原、MPO抗原和GBM抗原分别与荧光编码磁性微球的包被比例控制在上述范围内时，相同抗原相对浓度下检测获得的荧光信号强度基本一致；当PR3抗原、MPO抗原和GBM抗原分别与荧光编码磁性微球的包被比例小于或大于上述范围时，相同抗原相对浓度下检测获得的荧光信号强度均小于两者包被比例在上述范围内时的荧光信号强度。由此可知，将PR3抗原、MPO抗原和GBM抗原分别与磁性荧光编码微球的包被比例控制在上述范围内时，能够获得较为稳定的荧光信号强度，故最终获得的待测样本中抗PR3抗体、抗MPO抗体和抗GBM抗体的相对浓度较准确，因此，将PR3抗原、MPO抗原和GBM抗原与荧光编码磁性微球的包被比例控制在：40
‑
50μg抗原包被1
×
107个磁性荧光编码微球。
[0021]优选的，所述二抗溶液中，包含抗人IgG抗体，抗人IgG抗体的浓度为0.5
‑
4μg/ml。
[0022]通过采用上述技术方案，经过试验分析，制备二抗溶液的过程中，将荧光素标记的抗人IgG抗体浓度控制在上述范围内，相同抗体相对浓度下检测获得的荧光信号强度的变
化梯度基本一致；当荧光素标记的抗人IgG浓度为0.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人血管炎检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：由PR3抗原、MPO抗原、GBM抗原分别包被的荧光编码磁性微球的混合液；利用荧光素标记的二抗溶液；样本稀释液；微球清洗液。2.根据权利要求1所述的人血管炎检测试剂盒，其特征在于，所述混合液中，PR3抗原与荧光编码磁性微球的包被比例为：40
‑
50μg的抗原包被1
×
107个磁性荧光编码微球。3.根据权利要求1所述的人血管炎检测试剂盒，其特征在于，所述混合液中，MPO抗原与荧光编码磁性微球的包被比例为：40
‑
50μg的抗原包被1
×
107个磁性荧光编码微球。4.根据权利要求1所述的人血管炎检测试剂盒，其特征在于，所述混合液中，GBM抗原与荧光编码磁性微球的包被比例为：40
‑
50μg的抗原包被1
×
107个磁性荧光编码微球。5.根据权利要求1所述的人血管炎检测试剂盒，其特征在于，所述二抗溶液中，包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：李东琦，高静，刘丽丹，
申请(专利权)人：南京辰光医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：