人膜性肾病诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及免疫检测领域，更具体地，本发明专利技术涉及一种用于人膜性肾病诊断的试剂盒。本发明专利技术的试剂盒可以通过单个样本同时定量检测抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体，并可以配合全自动仪器实现自动检测，因此可以通过单次样本检测获得稳定性好、准确性高的定量检测结果，并通过所述检测结果进行人膜性肾病的临床诊断。过所述检测结果进行人膜性肾病的临床诊断。过所述检测结果进行人膜性肾病的临床诊断。

【技术实现步骤摘要】
人膜性肾病诊断试剂盒


[0001]本专利技术涉及免疫检测领域，更具体地，本专利技术涉及一种用于人膜性肾病诊断的试剂盒。

技术介绍

[0002]自1948年，Hargraves最初描述狼疮细胞(lupus erythematosus cell，LE cell)现象后，人们开始认识到自身抗体的存在。自身抗体被定义为针对自身组织、器官、细胞及其成分的抗体。
[0003]膜性肾病(membranous nephropathy，MN)是肾病综合征中常见的病理类型之一，病理表现为免疫复合物在肾脏组织中大量沉积以及补体增高引起的蛋白尿。原发性MN被看作为主要发生在足细胞中的一类单独一个器官的自身免疫性疾病，发病率占MN的80％左右。在70％的原发性MN患者血清中可检测抗PLA2R(抗磷脂酶A2受体)抗体，在8％
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14％的原发性MN患者血清中抗THSD7A(含Ⅰ型血小板域蛋白7A)抗体呈阳性，而抗PLA2R抗体呈阴性。PLA2R联合THSD7A抗体检测有助于提高原发性MN患者临床诊断阳性率。
[0004]经过近70年的发展，到目前为止，已经发现了数百种自身抗体，也建立了多种自身抗体的检测方法，主要包括间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence，IIF)、乳胶凝集试验(latex agglutination test)、双向扩散试验(double diffusion test)、对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis，CIEP)、放射免疫法(radioimmunoassay，RIA)，线性免疫印迹法(line immunoassay，LIA)、酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)等。随着近些年来商业化试剂的普及，传统实验室自配试剂的方法，如双向扩散试验、对流免疫电泳等逐渐被淘汰。2015年，中国风湿病数据中心组织的自身抗体实验室室间比对显示，间接免疫荧光法、线性免疫印迹法和酶联免疫吸附法为目前我国自身抗体检测最常用的方法学。近些年来，一些医院也开始采用化学发光法(chemiluminiscence assay，CLIA)新技术进行自身抗体的检测。
[0005]磁性微球因其易于快速捕捉、清洗、表面积较大，且与生物分子易于分离和结合的优点，现被广泛应用于各种检测方法中。近年来，高灵敏、快速、操作简单、成本低廉的检测方法是各领域研究者寻求的热点。将磁性微球与流动注射相结合，实现免疫分析的自动化，磁性微球和免疫诊断试剂可以自由地悬浮分散在溶液中，通过外加磁场捕获与释放磁性微球，同时利用流动注射仪自动进样，从而实现快速、简便的检测。
[0006]目前市场上的人膜性肾病相关抗体的检测方法存在结果不够准、检测成本高、实验时间长以及需要多个样本等问题。因此，本领域亟需一种新的人膜性肾病诊断试剂盒，可以配合全自动仪器，通过单次检测的单次样本反应获得稳定性好、准确性高的诊断结果。

技术实现思路

[0007]如上所述，现有的人膜性肾病相关抗体的检测方法仍存在不足。因此，本领域亟需一种新的人膜性肾病诊断试剂盒，通过单个样本的单次样本反应同时定量检测抗PLA2R(抗
磷脂酶A2受体)抗体和抗THSD7A(Thrombospondin type
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1domain
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containing 7A，含Ⅰ型血小板域蛋白7A)抗体，并且通过所述检测结果进行临床诊断。
[0008]因此，在第一方面，本专利技术提供了一种用于人膜性肾病诊断的试剂盒，所述试剂盒包括：
[0009]分别包被有PLA2R抗原和THSD7A抗原的磁性荧光编码微球；
[0010]报告分子标记的检测抗体；
[0011]其中，所述磁性荧光编码微球为羧基、氨基和/或环氧基修饰的磁性荧光编码微球。
[0012]本专利技术的有益效果包括以下一个或多个：
[0013]1)通过单个检测样本的单次样本反应可以同时获得抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的定量检测结果，从而获得更准确的膜性肾病诊断结果；
[0014]2)可配合全自动仪器使用，无需手工操作，更为高效。
附图说明
[0015]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的实施方案。
[0016]图1是通过磁性荧光编码微球定量检测抗体的原理示意图。
[0017]图2是包被有PLA2R抗原和THSD7A抗原的磁性荧光编码微球分布图。
具体实施方式
[0018]下面将结合本专利技术的实施方案和附图，对本专利技术进行清楚、完整的描述。显然，所描述的实施方案仅仅是本专利技术的一部分实施方案，而不是全部的实施方案。基于本专利技术中的实施方案，本领域普通技术人员可以获得的所有其他实施方案，都属于本专利技术保护的范围。
[0019]如上所述，目前市场上的人膜性肾病相关抗体的检测方法或产品存在检测结果不够准确、检测成本高、实验时间长等问题，并且都需要多个样本在不同抗体的检测体系中分别进行检测，因此需要进行多次样本反应。本专利技术旨在提供一种用于人膜性肾病诊断的试剂盒，该试剂盒可使用单个样本通过单次样本反应来同时定量检测样本中的抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体，并且通过所述检测结果进行临床诊断。
[0020]因此，在第一方面，本专利技术提供了一种用于人膜性肾病诊断的试剂盒，所述试剂盒包括：
[0021]分别包被有PLA2R抗原和THSD7A抗原的磁性荧光编码微球；
[0022]报告分子标记的检测抗体；
[0023]其中，所述磁性荧光编码微球为羧基、氨基和/或环氧基修饰的磁性荧光编码微球。
[0024]本专利技术采用了表面积较大的磁性荧光编码微球作为抗原的载体微球，以包被较多的抗原，保证载体微球能够最大程度地与样本中的抗体相结合，从而提高检测灵敏度。此
外，现有技术中所用的微球通常为聚丙乙烯微球，在清洗微球的过程中，需要通过离心将荧光编码微球与液体分离。通过离心将荧光编码微球沉淀在容器底部，由于荧光编码微球没有被固定，通过移液枪吸走上清液的过程中，容易同时将荧光编码微球吸走，从而造成微球粒子的丢失，进而影响最终的对样本的检测结果。而本专利技术中的磁性荧光编码微球在清洗微球的过程中，可以通过磁力架将荧光编码微球与液体分离，即利用磁力架对磁性荧光微球的吸附作用将磁性荧光编码微球吸附、固定在容器底部，从而方便上清液的去除。因此，本专利技术所用的磁性荧光编码微球，不仅可以方便上清液的去除，而且能够提高样本检测结果的准确性。
[0025]在一个实施方案中，所述磁性荧光编码微球可以为羧基、氨基和/或环氧基修饰的磁性荧光编码微球。在一个优选实施方案中，所述包被有PLA2R抗原的磁性荧光编码微球为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于人膜性肾病诊断的试剂盒，所述试剂盒包括：分别包被有PLA2R抗原和THSD7A抗原的磁性荧光编码微球；报告分子标记的检测抗体，如抗人IgG抗体；其中，所述磁性荧光编码微球为羧基、氨基和/或环氧基修饰的磁性荧光编码微球。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述包被有PLA2R抗原的磁性荧光编码微球为羧基修饰的磁性荧光编码微球，所述包被有THSD7A抗原的磁性荧光编码微球为环氧基修饰的磁性荧光编码微球。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包括抗PLA2R抗体和抗THSD7A抗体的冻干粉或标准浓度溶液作为校准品、和/或缓冲液。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的试剂盒，其中，所述PLA2R抗原和THSD7A抗原与所述磁性荧光编码微球的包被比例为5μg至50μg抗原包被1
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107个磁性荧光编码微球。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的试剂盒，其中，所述报...

【专利技术属性】
技术研发人员：李东琦，高静，刘丽丹，
申请(专利权)人：南京辰光医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：