检测SARS-COV-2的引物探针组合物、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术揭示了一种检测SARS

【技术实现步骤摘要】
检测SARS-COV-2的引物探针组合物、试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学检测
，尤其涉及一种检测SARS-COV-2的引物探针组合物、试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]新型冠状肺炎病毒(SARS-COV-2)是一种新发现的冠状病毒，可以引起严重的呼吸系统疾病。其常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。和许多经典的呼吸道病毒一样，新型冠状肺炎病毒(SARS-COV-2)能够在人群间快速传播，并且有些感染者并未出现明显的感染症状，给病毒的控制带来了极大的困难。目前全球感染人数和死亡人数不断快速攀升，在无有效治疗方法出现之前，病毒的筛查和控制是防控进一步蔓延的最佳手段。
[0003]对SARS-COV-2进行核酸检测是目前唯一准确有效的检测手段。核酸检测通常采用荧光定量PCR或者基因测序法。基因测序法虽然较为准确但是存在检测时间长，检测成本高，检测方法难以在临床中广泛使用。实时荧光定量PCR技术是一种在核酸检测过程中广泛应用的方法，该技术通过在PCR反应中加入荧光标记，实时监测荧光信号的累积来监测整个反应过程。因此，相对于基因测序法而言，实时荧光定量PCR(即实时荧光qPCR)SARS-COV-2对具有高灵敏性、高特异性、高通量、快速等优势，因此可被用于对SARS-COV-2的快速筛查与检测。
[0004]然而，传统的实时荧光定量PCR对SARS-COV-2进行检测时存在核酸阳性检出率较低的缺陷，其本质原因是进行实时荧光定量PCR检测时所使用的试剂盒中的对SARS-COV-2的特异性检测不佳。
[0005]有鉴于此，有必要对现有技术中的SARS-COV-2进行快速特异性检测的试剂盒及检测方法予以改进，以解决上述问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于揭示一种检测SARS-COV-2的引物探针组合物、试剂盒及检测方法，用以解决现有技术中的试剂盒以及基于该试剂盒采用实时荧光定量PCR对SARS-COV-2进行检测过程中所存在的核酸阳性检出率较低且检测结果不准确的缺陷。
[0007]为实现上述第一个专利技术目的，本专利技术提供了一种检测SARS-COV-2的引物探针组合物，包括：
[0008]用于对SARS-COV-2中的ORF1ab基因特异性地扩增检测的第一特异性引物及第一特异性探针；
[0009]用于对SARS-COV-2中的N基因特异性地扩增检测的第二特异性引物及第二特异性探针；
[0010]用于对内参基因β-actin特异性地扩增检测的第三特异性引物及第三特异性探针；
COV-2进行检测过程中所存在的核酸阳性检出率较低且检测结果不准确的缺陷。
附图说明
[0030]图1为采用本专利技术所揭示的试剂盒并采用本专利技术所揭示的用于非诊断目的检测SARS-COV-2的检测方法对阳性质控品分别为10拷贝、100拷贝及1000拷贝时ORF1ab基因进行特异性检测的检测效果对比图；
[0031]图2为采用本专利技术所揭示的试剂盒并采用本专利技术所揭示的用于非诊断目的检测SARS-COV-2的检测方法对阳性质控品分别为10拷贝、100拷贝及1000拷贝时N基因进行特异性检测的检测效果对比图；
[0032]图3为采用本专利技术所揭示的试剂盒并采用本专利技术所揭示的用于非诊断目的检测SARS-COV-2的检测方法对阴性质控品进行特异性检测的检测效果对比图，该阴性质控品为甲型流感病毒。
具体实施方式
[0033]下面结合附图所示的各实施方式对本专利技术进行详细说明，但应当说明的是，这些实施方式并非对本专利技术的限制，本领域普通技术人员根据这些实施方式所作的功能、方法、或者结构上的等效变换或替代，均属于本专利技术的保护范围之内。
[0034]在本申请各实施例中，术语“非诊断目的”指并非旨在获得个体是否感染SARS-CoV-2(新型冠状肺炎病毒)并罹患肺炎的信息。该检测方法可以在以科研为目的的实验中的检测培养物中检测出是否有SARS-CoV-2。
[0035]实施例一：
[0036]本实施例揭示了一种检测SARS-COV-2的引物探针组合物(以下简称“引物探针组合物”)，可在荧光定量PCR检测时对标记待测样本是否呈SARS-COV-2(新型冠状肺炎病毒)呈阳性进行准确快速的特异性检测，并可尤其对目标区域一的基因(即ORF1ab基因)和/或目标区域二的基因(即N基因)进行特异性检测，并能够与目前已知的其他流感病毒或者具有类似蛋白及遗传结构的其他病毒予以特异性检测，提高对携带SARS-COV-2的待检测样本的准确检测，避免出现SARS-COV-2核酸检测转阳的现象。
[0037]具体的，在本实施例中，该引物探针组合物包括：用于对SARS-COV-2中的ORF1ab基因特异性地扩增检测的第一特异性引物及第一特异性探针；用于对SARS-COV-2中的N基因特异性地扩增检测的第二特异性引物及第二特异性探针；用于对内参基因β-actin特异性地扩增检测的第三特异性引物及第三特异性探针。
[0038]ORF1ab基因的核苷酸序列如下所示：
[0039]GCTTCATGCACTTTGTCCGAACAACTGGACTTTATTGACACTAAGAGGGGTGTATACTGCTGCCGTGAACATGAGCATGAAATTGCTTGGTACACGGAACGTTCTGAAAAGAGCTATGAATTGCAGACACCTTTTGAAATTAAATTGGCAAAGAAATTTGACACCTTCAATGGGGAATGTCCAAATTTTGTATTTCCCTTAAATTCCATAATCAAGACTATTCAACCAAGGGTTGAAAAGAAAAAGCTTGATGGCTTTATGGGTAGAATTCGATCTGTCTATCCAGTTGCGTCACCAAATGAATGCAACCAAATGTGCCTTTCAACTCTCATGAAGTGTGATCATTGTGGTGAAACTTCATGGCAGACGGGCGATTTTGTTAAAGCCACTTGCGAATTTTGTGGCACTGAGAATTTGACTAAAGAAGGTGCCACTACTTGTGGTTACTTACCCCAAAATGCTGTTGTTAAAATTTATTGTCCAGCATGTCACAATTCAGAAGTAGGACCTGAGCATAGTCTTGC
CGAATACCATAATGAATCTGGCTTGAAAACCATTCTTCGTAAGGGTGGTCGCACTATTGCCTTTGGAGGCTGTGTGTTCTCTTATGTTGGTTGCCATAACAAGTGTGCCTATTGGGTTCCACGTGCTAGCGCTAACATAGGTTGTAACCATACAGGTGTTGTTGGAGAAGGTTCCGAAGGTCTTAATGACAACCTTCTTGAAATACTCCAAAAAGAGAAAGTCAACATCAATATTGTTGGTGACTTTAAACTTAATGAAGAGA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测SARS-COV-2的引物探针组合物，其特征在于，包括：用于对SARS-COV-2中的ORF1ab基因特异性地扩增检测的第一特异性引物及第一特异性探针；用于对SARS-COV-2中的N基因特异性地扩增检测的第二特异性引物及第二特异性探针；用于对内参基因β-actin特异性地扩增检测的第三特异性引物及第三特异性探针；所述第一特异性引物的正向引物具有如SEQ NO.1所示核苷酸序列，所述第一特异性引物的反向引物具有如SEQ NO.2所示核苷酸序列，所述第一特异性探针具有如SEQ NO.3所示核苷酸序列；所述第二特异性引物的正向引物具有如SEQ NO.4所示核苷酸序列，所述第二特异性引物的反向引物具有如SEQ NO.5所示核苷酸序列，所述第二特异性探针具有如SEQ NO.6所示核苷酸序列；所述第三特异性引物的正向引物具有如SEQ NO.7所示核苷酸序列，所述第三特异性引物的反向引物具有如SEQ NO.8所示核苷酸序列，所述第三特异性探针具有如SEQ NO.9所示核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，所述第一特异性探针与第二特异性探针的5
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端标记有荧光报告基团，3
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端标记有荧光淬灭基团；所述荧光报告基团选自FAM、HEX、TET、JOE、NED、VIC、CY3、CY5、ROX或TAMRA中的任意一种，所述荧光淬灭基团选自MGB、BHQ或Phosphorothioate中的任意一种。3.一种非诊断目的检测SARS-C...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚鲁帅，刘晨，
申请(专利权)人：无锡正则精准医学检验有限公司，
类型：发明
国别省市：