β-谷甾醇在治疗缺血性脑卒中的应用制造技术

本发明专利技术涉及β

【技术实现步骤摘要】
β
‑
谷甾醇在治疗缺血性脑卒中的应用


[0001]本专利技术涉及医药领域，具体涉及β
‑
谷甾醇在治疗缺血性脑卒中的应用。

技术介绍

[0002]缺血性脑卒中是一种急性脑血管疾病，具有发病率高、死亡率高和致残率高的特点，给患者的家庭经济和社会医疗带来了巨大的负担。目前采用阿替普酶、尿激酶等溶栓药物进行血管再通被认为是治疗缺血性脑卒中的标准策略，但由于治疗时间窗短和易出血的风险，大大限制了其临床应用。因此，深入探索新的潜在治疗靶点已成为该领域的重点研究方向。
[0003]缺血性脑卒中是一个复杂的病理生理过程，其发生机制十分复杂，包括能量衰竭，兴奋性中毒，神经炎症，细胞凋亡及氧化应激等。这些环节互为因果，相互影响，形成恶性循环，最终导致神经元细胞不可逆性坏死。其中神经元细胞凋亡被认为是导致脑损伤的中心环节和关键因素。
[0004]细胞内胆固醇及胆固醇代谢物稳态紊乱是神经细胞凋亡的一个重大诱因。其中NPC1L1基因是近年来新发现的与胆固醇吸收密切相关的位点，是维持生物体胆固醇动态平衡的重要因素，同时也是新型降脂药物依折麦布的作用靶点。
[0005]β
‑
谷甾醇是植物甾醇类成分之一，属于四环三萜类化合物，广泛存在于各种植物油、植物种子、果蔬中。β
‑
谷甾醇在抗氧化、抗高血脂、抗炎、免疫调节、抗肿瘤、中枢神经系统等方面表现出良好的药理作用。目前仍未见β
‑
谷甾醇在治疗缺血性脑卒中方面的相关报道。因此，将β
‑
谷甾醇引入到治疗缺血性脑卒中药物中(单独或多药联合治疗)，具有重大现实意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供一种β
‑
谷甾醇在治疗和/或预防缺血性脑卒中的应用。尤其是在制备治疗和/或预防缺血性脑卒的药物中的应用。
[0007]本专利技术的另一实施方案提供一种β
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谷甾醇在抑制神经细胞内胆固醇过度积累中的应用。其是通过与NPC1L1蛋白有效结合来抑制神经细胞内胆固醇过度积累。
[0008]本专利技术的另一实施方案提供一种β
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谷甾醇在抑制缺血性脑卒中神经细胞的内质网应激导致的细胞凋亡中的应用。
[0009]本专利技术的另一实施方案提供β
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谷甾醇在治疗和/或预防缺血性脑卒中大脑梗死中的应用。
[0010]本专利技术的另一实施方案提供β
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谷甾醇在治疗和/或预防缺血性脑卒中神经功能损伤中的应用。
[0011]本专利技术提供一种用于治疗和/或预防缺血性脑卒中的药物，其特征在于以β
‑
谷甾醇作为有效成分。任选与其他治疗和/或预防缺血性脑卒中的药物联合使用。所述其他治疗和/或预防缺血性脑卒中的药物优选中药、植物药提取物、有效部位或有效成分、NPC1L1的
小分子化合物、核酸类如RNAi、多肽类或蛋白质类药物。
[0012]β
‑
谷甾醇的给药方式包括腹腔注射、皮下注射和/或口服给药。给药剂量优选2
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100mg/kg，优选10
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50mg/kg。
[0013]本专利技术的优点在于：公开了β
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谷甾醇在治疗缺血性脑卒中的应用，其目的在于将β
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谷甾醇引入到缺血性脑卒中的治疗中，采用β
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谷甾醇对OGD/R原代神经元细胞进行干预，发现β
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谷甾醇可以显著抑制神经细胞内胆固醇蓄积，并且动物模型小鼠腹腔注射后可以显著抑制缺血性脑卒中模型动物神经元凋亡，改善模型动物的神经行为等。本专利技术为治疗缺血性脑卒中提供了新的药效物质，这为β
‑
谷甾醇在医药上的新应用提供可靠的依据。
附图说明
[0014]图1是β
‑
谷甾醇通过直接作用于NPC1L1靶点产生抑制神经元细胞内胆固醇蓄积的作用图；图A：不同处理组原代神经元细胞内胆固醇染色的情况；图B：试验小鼠皮层脑组织中的NPC1L1表达水平；图C：β
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谷甾醇与NPC1L1分子对接图。
[0015]图2是β
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谷甾醇抑制MCAO/R诱导的内质网应激/神经元凋亡基因的蛋白表达图。
[0016]图3是β
‑
谷甾醇对动物模型小鼠脑梗死情况的改善及神经行为的改善图；图A：试验小鼠大脑切片的TTC染色图；图B：试验小鼠的神经功能评分图；图C：试验小鼠大脑的脑含水量情况图。
具体实施方式
[0017]以下内容是结合具体的优选实施方式对本专利技术所作的进一步详细说明，不能认定本专利技术的具体实施只局限于这些说明。对于本专利技术所属
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本专利技术的保护范围。
[0018]实施例1：β
‑
谷甾醇对神经元细胞内胆固醇转运及转运受体NPC1L1的影响
[0019]1、实验方法
[0020](1)神经元的原代培养：在超净台外将孕鼠(E14
‑
15d)过量麻醉处死，置于解剖盘中，75％酒精喷洒消毒，迅速剖开腹部取出胎珠，置于盛有预冷(冰浴)D
‑
Hank
’
s平衡液的玻璃皿中。无菌条件下分离单个胚胎，剥离脑壳迅速取出双侧大脑(冰上操作)。解剖显微镜下剥去血管膜，取大脑皮层组织，置于预冷的D
‑
Hank
’
s液中，剪碎成1
‑
2mm3小块，转移至0.25％胰蛋白酶溶液，37℃消化20min。用含20％胎牛血清的DMEM溶液(含0.5mM谷氨酰胺，100U/mL青霉素，100U/mL 链霉素)漂洗组织3次，终止消化。用经火抛光打磨的玻璃移液管反复吹打成浑浊液(动作轻缓，避免产生气泡)，至无明显可见组织块，过200目筛网，制备单细胞悬液，细胞计数板及显微镜下计细胞个数。DMEM培养基将单细胞悬液稀释重悬到适宜密度，接种于预先包被多聚赖氨酸(PLL,25μg/mL)的细胞培养板内。将细胞培养板移入CO2培养箱培养，24h后全量换Neurobasal培养液(含2％B27，0.5mM谷氨酰胺，100U/mL青霉素，100U/mL链霉素)，此后每隔2d半量换液一次，每次换液前在倒置显微镜下观察细胞生长情况。根据细胞生长情况，培养7
‑
14d可用于实验。
[0021](2)糖氧剥夺(OGD/R)细胞模型的建立：正常培养原代皮层神经元细胞7
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14d(视细胞生长状况而定)。在超净工作台上，将正常皮层神经元细胞培养基吸除，PBS液反复洗涤3
次，随后加入glucose
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free DMEM培养基，以5％CO2、95％N2、37℃缺氧孵育2h，然后吸净无糖培养液，PBS液再洗涤3次，加入Neruobasal(含2％B27，100U/mL青霉素，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.β
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谷甾醇在制备治疗和/或预防缺血性脑卒的药物中的应用。2.β
‑
谷甾醇在制备抑制神经细胞内胆固醇过度积累的药物中的应用。3.权利要求2所述的应用，其特征在于是通过与NPC1L1蛋白有效结合来抑制神经细胞内胆固醇过度积累。4.β
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谷甾醇在制备抑制缺血性脑卒中神经细胞的内质网应激导致的细胞凋亡的药物中的应用。5.β
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谷甾醇在制备治疗和/或预防缺血性脑卒中大脑梗死的药物中的应用。6.β
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谷甾醇在制备治疗和/或预防缺血性脑卒中神经功能损伤的药物中的应用。7.权利要求1
‑
6任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐秀玲，杨乐，招明高，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：