β-谷甾醇在缓解奶牛乳腺炎症中的应用制造技术

本发明专利技术适用于医学技术领域，提供了β

【技术实现步骤摘要】
β
‑
谷甾醇在缓解奶牛乳腺炎症中的应用


[0001]本专利技术属于医学
，尤其涉及β
‑
谷甾醇在缓解奶牛乳腺炎症中的应用。

技术介绍

[0002]牛乳腺炎是影响全世界奶牛健康的一种主要疾病，其发病原因主要是由于病原菌的侵入，以及造成感染的各种诱因，如外伤、挤奶技术不佳。常见的致病菌包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌，涵盖革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌两大类。它们分布于空气、水体、饲料以及奶牛可接触物体表面，部分可由乳头导管入侵并进入乳腺组织，随后引发感染和炎症反应，导致奶牛罹患乳房炎，也有一部分通过饲料进入瘤胃内，当这些革兰氏阴性菌的死亡而导致细胞壁脱落产生内毒素，被机体吸收进入血液到达乳腺，也会诱发炎症。牛乳腺炎给奶牛业造成的危害包括：直接造成产奶量以及品质的降低；一些牛无法治愈而被淘汰所造成的损失；在治疗乳腺炎期间医疗费的开支；护理病牛所需额外的劳动力开支等。当今最普遍的治疗乳腺炎的方法是抗生素疗法，而这种疗法具有明显的弊端比如易产生抗药性；会影响奶牛的产奶性能和并且经过抗生素治疗的牛产出的牛奶中会有药物残留无法食用，影响养殖企业经济效益等等。因此，亟需寻求更为安全有效且成本低廉的天然活性物质以替代抗生素，进行提前预防。
[0003]β
‑
谷甾醇(β
‑
sitosterol)是植物甾醇类成分之一，广泛存在于自然界中的各种植物油、坚果等植物种子中，也存在于某些植物药中。目前，β
‑
谷甾醇以其特有的生物学特性(抗炎、抗肿瘤)被广泛应用到医药行业中，尤其是研究显示β
‑
谷甾醇的摄入量多少与人群许多慢性病的发生率有关系，因此β
‑ꢀ
谷甾醇的医药应用及其发展前景受到越来越多人的关注。β
‑
谷甾醇的多重药理作用，也使其作为一种新型绿色添加剂被广泛研究，我国农业部于2008年将植物甾醇列为“新型功能性饲料添加剂”允许其添加在家禽和生长育肥猪的养殖中。而对于β
‑
谷甾醇是否可以缓解牛乳腺炎症或者起到保护治疗效果，还未有深入研究。

技术实现思路

[0004]本专利技术实施例的目的在于提供β
‑
谷甾醇在缓解奶牛乳腺炎症中的应用，旨在解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]β
‑
谷甾醇在缓解奶牛乳腺炎症中的应用，包括以下步骤：
[0007]步骤1：将奶牛乳腺上皮细胞接种在含生长培养基的培养皿中，于细胞培养箱中培养；试验分为四组，分别是空白对照组、乳腺炎症模型组、β
‑
谷甾醇组和药物缓解组；
[0008]步骤2：奶牛乳腺上皮细胞细胞置于生长培养液中，β
‑
谷甾醇组加入β
‑ꢀ
谷甾醇，乳腺炎症模型组加入LPS，药物缓解组在加入β
‑
谷甾醇预处理后，加入LPS，随后提取收集RNA及蛋白；
[0009]步骤3：检测β
‑
谷甾醇对LPS诱导的乳腺上皮细胞模型中IL
‑
1β、TNF
‑ꢀ
α炎症因子以及caspase3、bax凋亡因子的调控作用；检测细胞内活性氧的累计或改善；
[0010]步骤4：通过qPCR、Western Blot方法初步探讨β
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谷甾醇对预防缓解脂多糖所诱导的奶牛乳腺炎症的调控机理。
[0011]进一步的，所述步骤1中，细胞培养箱中温度为37℃。
[0012]进一步的，所述步骤2中，β
‑
谷甾醇组加入1μMβ
‑
谷甾醇。
[0013]进一步的，所述步骤2中，乳腺炎症模型组加入1μg/mlLPS。
[0014]进一步的，所述步骤2中，药物缓解组在加入1μMβ
‑
谷甾醇预处理后加入1μg/mlLPS。
[0015]进一步的，所述步骤3中，通过qPCR、Western Blot方法检测β
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谷甾醇对LPS诱导的乳腺上皮细胞模型中IL
‑
1β、TNF
‑
α炎症因子以及caspase3、 bax凋亡因子的调控作用。
[0016]进一步的，所述步骤3中，利用荧光显微镜检测细胞内活性氧的累计或改善。
[0017]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0018]1)β
‑
谷甾醇可以预防改善LPS诱导的牛乳腺上皮细胞相关炎症因子的表达，具有抗乳房炎的功效；
[0019]2)β
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谷甾醇可以改善LPS诱导的牛乳腺上皮细胞氧化影响，具有抗氧化的功效；
[0020]3)β
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谷甾醇可以预防改善LPS诱导的牛乳腺上皮细胞相关凋亡因子的表达，具有抗凋亡的功效；
[0021]4)β
‑
谷甾醇能显著提高因LPS处理导致牛乳腺上皮细胞的HIF
‑
1α、 mTOR基因的抑制效果(P<0.01)。
附图说明
[0022]图1为β
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谷甾醇对牛乳腺上皮细胞活力影响示意图。
[0023]图2为β
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谷甾醇对LPS诱导的牛乳腺上皮细胞相关炎症因子的影响示意图。
[0024]图3为β
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谷甾醇对LPS诱导牛乳腺上皮细胞内ROS累计的影响示意图。
[0025]图4为β
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谷甾醇对LPS诱导牛乳腺上皮细胞相关凋亡因子的影响示意图。
[0026]图5为β
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谷甾醇对LPS诱导牛乳腺上皮细胞中HIF
‑
1α通路的影响示意图。
具体实施方式
[0027]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0028]以下结合具体实施例对本专利技术的具体实现进行详细描述。
[0029]实施例1
[0030]奶牛乳腺上皮细胞的培养：
[0031]奶牛乳腺上皮细胞为奶牛乳腺上皮细胞系(MAC
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T)。将MAC
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T细胞置于生长培养基【DMEM，10％FBS，5μg/ml胰岛素，1μg/ml氢化可的松， 1％青霉素
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链霉素(100IU/ml青霉素+100ug/ml链霉素)】中进行培养，传代2
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3次后，将MAC
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T细胞接种于含有2ml生长培养基的六孔板中进行培养，同时药物组加入1μMβ
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谷甾醇，炎症模型组加入1μg/ml LPS，药物缓解组加入1μMβ
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sitosterol以及1μg/ml LPS进行培养。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.β
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谷甾醇在缓解奶牛乳腺炎症中的应用，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：将奶牛乳腺上皮细胞接种在含生长培养基的培养皿中，于细胞培养箱中培养；试验分为四组，分别是空白对照组、乳腺炎症模型组、β
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谷甾醇组和药物缓解组；步骤2：奶牛乳腺上皮细胞细胞置于生长培养液中，β
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谷甾醇组加入β
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谷甾醇，乳腺炎症模型组加入LPS，药物缓解组在加入β
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谷甾醇预处理后，加入LPS，随后提取收集RNA及蛋白；步骤3：检测β
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谷甾醇对LPS诱导的乳腺上皮细胞模型中IL
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1β、TNF
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α炎症因子以及caspase3、bax凋亡因子的调控作用；检测细胞内活性氧的累计或改善；步骤4：通过qPCR、Western Blot方法初步探讨β
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谷甾醇对预防缓解脂多糖所诱导的奶牛乳腺炎症的调控机理。2.根据权利要求1所述的β
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谷甾醇在缓解奶牛乳腺炎症中的应用，其特征在于，所述步骤1中，细胞培养箱中温度为37℃。3.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：金永成，沈景林，刘馨璐，张晶，周长海，彭东乔，房恒通，史旭东，王传奇，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：