一种CEACAM5靶向的近红外荧光纳米抗体探针及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开一种CEACAM5靶向的近红外荧光纳米抗体探针及其制备方法和应用，涉及分子影像领域，该探针由CEACAM5纳米抗体重组蛋白和近红外荧光染料两部分组成。本发明专利技术实现了对CEACAM5分子的可视化，进一步实现了对CEACAM5分子阳性肿瘤的诊断。所述探针具有制备工艺简单，成本低廉，特异性高，稳定性高，且易于临床转化等优点。转化等优点。转化等优点。

【技术实现步骤摘要】
ID NO:2)上述纳米抗体重组蛋白NB41
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ABD的核苷酸序列为：cagttgcagctcgtggagtctggtggaggcttggtgcaggctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggaagcctcttcaggatcaatgccatggcctggttccgccaggctccagggaagcagcgcgagttggtcgcagctattactagtgctggtagtacaaactatgcagatttcgtgaagggccgattcaccatctccgcagacaacgccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgaaacctgaggacacagccgtctattactgtaatacaccctggcccgtagggagggactactggggccaggggacccaggtcaccgtctcctcagaacccaagacaccaaaaccacaaccagcagcagctcaacatgatgaagctgttgatgcgaactccctggcagaagcgaaagttctggccaaccgtgaactggataaatacggcgtgtccgactactacaaaaacctgatcaacaacgcaaaaactgttgaaggcgttaaggcactgatcgatgaaattctggcagcgctgccagcagctgctggcgctgctgct (SEQ ID NO:4)。
[0007]本专利技术还提供了一种新型的针对CEACAM5分子的纳米抗体重组蛋白，NB41
‑r/>ABD
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C，该纳米抗体重组蛋白的氨基酸序列为：QLQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSLFRINAMAWFRQAPGKQRELVAAITSAGSTNYADFVKGRFTISADNAKNTLYLQMNSLKPEDTAVYYCNTPWPVGRDYWGQGTQVTVSSEPKTPKPQPAAAQHDEAVDANSLAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINNAKTVEGVKALIDEILAALPAAACAAA (SEQ ID NO:3)上述纳米抗体重组蛋白NB41
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ABD
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C的核苷酸序列为：cagttgcagctcgtggagtctggtggaggcttggtgcaggctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggaagcctcttcaggatcaatgccatggcctggttccgccaggctccagggaagcagcgcgagttggtcgcagctattactagtgctggtagtacaaactatgcagatttcgtgaagggccgattcaccatctccgcagacaacgccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgaaacctgaggacacagccgtctattactgtaatacaccctggcccgtagggagggactactggggccaggggacccaggtcaccgtctcctcagaacccaagacaccaaaaccacaaccagcagcagctcaacatgatgaagctgttgatgcgaactccctggcagaagcgaaagttctggccaaccgtgaactggataaatacggcgtgtccgactactacaaaaacctgatcaacaacgcaaaaactgttgaaggcgttaaggcactgatcgatgaaattctggcagcgctgccagcagctgcttgtgctgctgct (SEQ ID NO:5)。
[0008]本专利技术所述的近红外荧光纳米抗体探针通过特异性靶向CEACAM5至肿瘤部位，并且在肿瘤部位有很好的聚集和滞留，具有较高的肿瘤背景比，适合用作活体内荧光成像和基于荧光成像的手术导航的探针。
[0009]本专利技术是一种高效的肿瘤标志物CEACAM5的检测技术，首先外源表达识别CEACAM5的纳米抗体重组蛋白NB41，NB41
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ABD或NB41
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ABD
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C。然后通过标记近红外荧光染料形成近红外荧光纳米抗体探针。
[0010]所述近红外荧光染料优选IRDye800CW、IRDye680RD、Cy7.5、Cy5.5中的任意一个。
[0011]本专利技术还提供一种增强近红外荧光纳米抗体探针体内循环时间从而增强信号的策略，通过在纳米抗体重组蛋白NB41的羧基端修饰白蛋白结合域(Albumin
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Binding Domain, ABD)序列，所形成的纳米抗体重组蛋白NB41
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ABD和NB41
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ABD
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C，能有效降低红外荧光纳米抗体探针体在肾脏的累积，提高其体内循环时间，增强肿瘤背景比。
[0012]本专利技术还提供一种近红外荧光纳米抗体探针NB41
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ABD
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IR800，并报道其在诊断CEACAM5阳性肿瘤中的应用。本专利技术通过创制CEACAM5特异性近红外荧光纳米抗体探针NB41
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ABD
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IR800，实现了对CEACAM5分子表达的无创可视化，进一步实现了CEACAM5阳性肿瘤的无创诊断，具有制备工艺简单，成本低廉，特异性高，稳定性高，且易于临床转化等优
点。
[0013]有益效果：本专利技术提供的用于检测肿瘤标志物CEACAM5的基于纳米抗体重组蛋白的近红外荧光探针、制备方法及应用，与现有技术相比，具有以下优势：能有效降低红外荧光纳米抗体探针体在肾脏的累积，减轻肾脏负荷，同时提高探针在体内循环时间，从而有效增强肿瘤背景比。本专利技术所述的CEACAM5特异性近红外荧光纳米抗体探针NB41
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ABD
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IR800，实现了对CEACAM5表达的无创可视化，进一步实现了对CEACAM5分子阳性肿瘤的无创诊断，具有制备工艺简单，成本低廉，特异性高，稳定性高，且易于临床转化等优点。
附图说明
[0014]图1为NB41
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ABD的SDS
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PAGE检测结果。
[0015]图2为NB41
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ABD
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IR800的ELISA结果。
[0016]图3为NB41
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ABD
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IR800的流式细胞术检测结果。
[0017]图4为NB41
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ABD
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IR800在小鼠皮下结肠癌模型中的荧光成像。
[0018]图5为NB41
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ABD
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IR800在小鼠皮下结肠癌模型中的荧光成像的定量分析结果。
具体实施方式
[0019]以下结合说明书附图介绍本专利技术的多个优选实施例，使其
技术实现思路
更加清楚和便于理解。本专利技术可以通过许多不本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种近红外荧光纳米抗体探针，其特征在于，所述探针包括识别CEACAM5分子的纳米抗体重组蛋白和近红外荧光染料。2.如权利要求1所述的近红外荧光纳米抗体探针，其特征在于，所述识别CEACAM5分子的纳米抗体重组蛋白选自NB41，NB41
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ABD和NB41
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ABD
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C中的任意一个。3.如权利要求2所述的近红外荧光纳米抗体探针，其特征在于，所述识别CEACAM5分子的纳米抗体重组蛋白NB41的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。4.如权利要求2所述的近红外荧光纳米抗体探针，其特征在于，所述识别CEACAM5分子的纳米抗体重组蛋白NB41
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ABD的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：李丹，梅超明，肖义泰，单鸿，
申请(专利权)人：中山大学附属第五医院，
类型：发明
国别省市：