一种单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法及应用技术

本发明专利技术属于生物资源综合利用领域，具体涉及一种单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法及应用。将单环刺螠预处理后，加入优化后的复合蛋白酶酶解，灭酶后过滤收集上清；通过梯级透析获得粗溶液后，利用柱层析精细纯化，低温干燥得ACE抑制肽干粉。通过本方法制备得到的单环刺螠ACE抑制肽活性好，成本低，易于大量生产，可用于食品的组方生产。同时实现了单环刺螠的综合高值利用，具有良好的经济和社会效益。具有良好的经济和社会效益。具有良好的经济和社会效益。

【技术实现步骤摘要】
一种单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法及应用


[0001]本专利技术属于生物资源综合利用领域，具体涉及一种单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法及应用。

技术介绍

[0002]单环刺螠，又称海肠或海肠子，是生活在海边潮间带泥性底质或珊瑚礁区中的管状螠虫动物，因其营养组成和海参有较多相似之处，故有“裸体海参”的美称。单环刺螠蛋白质含量为22.84%，且富含多种人类必需氨基酸，粗脂肪含量低至4.24%。其体内含有多糖、多肽、功能蛋白等多种活性成分，在抗凝血、抗肿瘤、降血压、降血脂、降血糖等方面具有较好的开发前景。因此探究单环刺螠深加工工艺，提取和利用单环刺螠营养成分具有良好的现实意义。但由于原材料生产及深加工技术工艺的缺乏，单环刺螠的综合利用，特别是有关单环刺螠体内活性物质的规模制备尚未实现，极大限制了该类活性物质的运用。
[0003]血管紧张素转化酶(ACE)又称激肽酶Ⅱ，是一种血管内皮细胞膜结合酶，其可将人体中的血管紧张素I转化为血管紧张素II，导致人体血管收缩，促使血压升高，目前认为ACE与高血压症密切相关。
[0004]现阶段使用最广泛的处方合成类降压药如:阿米洛利、卡托普利等，均旨在抑制血管紧张素I转化酶活性。但长期服用处方类降压药,会随之产生副作用。而天然食物来源的ACE抑制肽具有安全、易被人体吸收、产生的不良影响少等优势，已成为新药研发和替代治疗的可选择途径。如将食源性蛋白通过不同的酶酶解后，再利用多种分离纯化方法，从动植物中获得天然的ACE抑制活性肽片段，其主要来源于牛奶、大豆、鸡蛋、大蒜、玉米等。海洋生物来源的ACE抑制肽也有陆续报道，目前已从贝类、甲壳类、以及各种鱼中提取到多种类型的ACE抑制肽。与陆生动、植物来源相比，海洋生物来源的ACE抑制肽因与人体存在较远的亲缘关系，基本不存在人畜共患疾病的风险。同时由于结构较为新颖，活性相对较高，具有较高的市场应用价值。但目前报道的ACE抑制肽的制备工艺繁琐，来源相对局限，生产成本较高，难以实现大量生产。本专利技术利用前期开发制备的单环刺螠自溶酶进行单环刺螠的复合酶解，制备出较高活性的ACE抑制肽。生产成本降低，可用于大量生产。目前，尚未有单环刺螠来源ACE抑制活性肽分离纯化的报道。

技术实现思路

[0005]根据上述现有技术，本专利技术公开一种单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法及应用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法，将单环刺螠预处理后，加入蛋白酶进行酶解，灭酶后过滤收集上清；通过梯级透析获得粗溶液后，利用柱层析精细纯化，低温干燥得ACE抑制肽干粉；其中，所述酶为单环刺螠自溶酶、地衣芽孢杆菌蛋白酶、胶原蛋白酶、枯草芽孢杆菌蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或多种。
[0007]所述收集的上清液依次经10kDa、3kDa、1kDa进行梯度透析，收集1kDa以下截留组
分。
[0008]进一步的说：（1）将
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20
‑‑
10℃冷冻储存的单环刺螠置于20
‑
30℃解冻3
‑
5h，去杂质后，加入其5
‑
10倍体积的处理液对其浸泡20
‑
40min，匀浆；（2）在步骤（1）得到的匀浆液中添加其质量1
‑
3％的酶，调节温度至30
‑
55℃，pH为4
‑
11，酶解1
‑
5h，80
‑
100℃灭酶10
‑
20min。冷却至15
‑
25℃，6000—10000 r/min离心10
‑
30 min，过滤收集上清液；（3）将步骤（2）所得的上清液依次装入截留分子量10kDa、3kDa、1kDa的透析袋进行梯度透析，每次透析于4
‑
10℃的透析液中透析10
‑
20h，得到1kDa以下截留组分粗溶液；（4）将步骤（3）所得的ACE抑制肽粗溶液，通过葡聚糖凝胶柱层析进行精细纯化，用含有0.01
‑
0.05mol/L的Zn离子的无菌水洗脱，收集洗脱液经228nm测定吸光度，将吸光度为228nm的洗脱液低温干燥，得ACE抑制肽。
[0009]所述步骤（1）处理液为：每100mL处理液中含氯化钠0.9g、氯霉素0.05
‑
0.1g、青霉素0.05
‑
0.1g、EDTA
·
2Na 0.05
‑
0.5g，余量为无菌水。
[0010]所述步骤（3）透析液为0.9%的生理盐水、pH7.0的磷酸盐缓冲液、无菌水中的一种或几种。
[0011]所述纯化后的ACE抑制肽经低温烘干、低温喷雾干燥、低温减压干燥、旋转蒸发干燥中一种或几种方式进行干燥处理。
[0012]所述低温干燥时采用的助干剂为海藻糖、菊粉、麦芽糊精、β
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环糊精、玉米淀粉、脱脂奶粉中的一种或几种；其中，助干剂添加量为所含固形物总体质量的8
‑
200%，干燥温度为30
‑
55℃。
[0013]优选地，纯化后的液体选择菊粉作为助干剂，30
‑
55℃低温喷雾干燥制备。
[0014]一种所述方法获得的单环刺螠ACE抑制肽，按所述方法获得分子量为1000Da以下的单环刺螠ACE抑制肽。
[0015]一种所述单环刺螠ACE抑制肽的应用，所述单环刺螠ACE抑制肽在制备作为调理高血压症的食品中的应用，进一步的，该食品为保健食品或医学配方食品。
[0016]本专利技术方法通过最优酶解法由单环刺螠中提取获得ACE抑制肽，并且进一步的优化方法确定了ACE抑制肽活性最强的肽段区间，并选择合适的干燥助剂，利用低温喷雾干燥法进行生产。由此可见本专利技术所得ACE抑制肽活性好，活性肽肽段相对集中，生产成本低，易于大量生产。进而可用于食品的组方生产。同时实现了单环刺螠的综合高值利用，具有良好的经济和社会效益。
附图说明
[0017]图1为本专利技术中制备的单环刺螠自溶酶蛋白电泳图，其中，M为蛋白marker，1为经透析所得的单环刺螠自溶酶，2为层析后所得的单环刺螠自溶酶。
[0018]图2为5种蛋白酶酶解单环刺螠制备ACE抑制肽的ACE抑制效果对比图。
[0019]图3为不同干燥温度对ACE抑制率的影响，其中，1为120℃，2为80℃，3为30℃，4为55℃，5为100℃。
具体实施方式
[0020]以下结合实例对本专利技术的具体实施方式做进一步说明，应当指出的是，此处所描述的具体实施方式只是为了说明和解释本专利技术，并不局限于本专利技术。
[0021]实施例1：单环刺螠自溶酶的制备1.1单环刺螠自溶酶粗酶溶液的制备：（1）取
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20
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10℃冷冻储存的单环刺螠废弃内脏常温解冻，待彻底解冻后，用无菌水清洗，去除杂质。加入PBS（0本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法，其特征在于：将单环刺螠预处理后，加入蛋白酶进行酶解，灭酶后过滤收集上清；通过梯级透析获得粗溶液后，利用柱层析精细纯化，低温干燥得ACE抑制肽干粉；其中，所述酶为单环刺螠自溶酶、地衣芽孢杆菌蛋白酶、胶原蛋白酶、枯草芽孢杆菌蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或多种。2.按权利要求1所述的单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法，其特征在于：所述收集的上清液依次经10kDa、3kDa、1kDa进行梯度透析，收集1kDa以下截留组分。3.按权利要求1或2所述的单环刺螠中提取ACE抑制肽的方法，其特征在于：（1）将
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10℃冷冻储存的单环刺螠置于20
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30℃解冻3
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5h，去杂质后，加入其5
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10倍体积的处理液对其浸泡20
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40min，匀浆；（2）在步骤（1）得到的匀浆液中添加其质量1
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3％的酶，调节温度至30
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55℃，pH为4
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11，酶解1
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100℃灭酶10
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20min，冷却至15
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25℃，6000—10000 r/min离心10
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30 min，过滤收集上清液；（3）将步骤（2）所得的上清液依次装入截留分子量10kDa、3kDa、1kDa的透析袋进行梯度透析，每次透析于4
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10℃的透析液中透析10
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20h，得到1kDa以下截留组分粗溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦绪栋，杨林彤，黄栋，秦松，
申请(专利权)人：中科肽谷山东生命科学研究有限公司，
类型：发明
国别省市：