一种分离测定L-丙氨酸异丙酯盐酸盐对映异构体的高效液相色谱分析方法技术

本发明专利技术公开了一种采用高效液相色谱法测定L

【技术实现步骤摘要】
一种分离测定L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐对映异构体的高效液相色谱分析方法


[0001]本专利技术涉及药物的检测方法，具体涉及一种分离测定L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐对映异构体的高效液相色谱分析方法。

技术介绍

[0002]L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐作为一种重要的起始原料，其具有一个手性中心，被广泛用于药物的合成，比如富马酸丙酚替诺福韦（TAF）等。L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐的对映异构体杂质D
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丙氨酸异丙酯盐酸盐是TAF手性杂质的主要来源之一，更需要严格控制其对映异构体的含量。
[0003]近年来，对药物中的异构体要求越来越严格，不只是限度的要求，而是要求准确测定其含量。目前，L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐及其对映异构体尚无药典标准，文献中报道此类物质的检测主要有两种方法。一种是在205nm波长，采用离子对流动相（高氯酸）进行洗脱，冠醚类化合物键合硅胶为填料的手性色谱柱进行分离，此类方法灵敏度较差，且低波段检测，易受其他物质干扰，适用范围较小。另一种是采用邻苯二甲醛和N
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乙酰
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L
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半胱氨酸为衍生试剂进行衍生化反应后进行检测，在pH为7.0的磷酸盐溶液中衍生，随着反应时间的延长，L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐异构体衍生物含量先增大，后减小，衍生时间不易控制；且溶液稳定性较差，只有2.5 h。因此建立一种灵敏度高、衍生化稳定的液相色谱方法测定L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐异构体是很有必要的。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于建立一种可以快速准确分离测定L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐对映异构体的高效液相色谱分析方法，以弥补现有方法的不足。本专利技术采用苯甲酰氯为衍生试剂。
[0005]本专利技术的技术方案如下：一种分离测定L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐对映异构体的高效液相色谱分析方法，采用正相高效液相色谱法，其具体色谱条件如下：色谱柱：以直链淀粉衍生物键合硅胶为填充剂的手性色谱柱，柱填料粒径为3.5μm~5μm，柱长为150mm~250mm；流动相：正己烷
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无水乙醇
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二乙胺为流动相，正己烷
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无水乙醇的体积比为75:25~85:15；流速：1.0ml/min~1.2ml/min；柱温：12℃~20℃；检测波长：225
±
5nm；进样量：5μl~100μl。
[0006]优选色谱条件：以直链淀粉衍生物键合硅胶为填充剂；以正己烷
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无水乙醇
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二乙胺（80:20:0.1）为流动相；流速为1.0ml/min；检测波长为225nm；进样量为10μl。
[0007]样品溶液的制备：L
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丙氨酸异丙酯衍生物溶液：将L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐1.00g，溶解在甲醇(10mL）中，在室温下加入三乙胺（2.1
±
0.1mL）；在室温下搅拌15分钟后，将反应混合物冰水浴冷却至0~5℃，逐滴加入苯甲酰氯（0.88
±
0.5mL），控制滴加温度0~5℃；滴毕，将反应混合物在冰水浴（0~5℃）下搅拌2小时，即得；供试品溶液：精密移取L
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丙氨酸异丙酯衍生物溶液1ml，置50ml量瓶，加稀释剂溶解并定容至刻度，摇匀，用0.22μm有机系滤膜滤过，取续滤液，即得；所述稀释剂同流动相；对照溶液：精密移取供试品溶液1ml，置100ml量瓶，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，再精密移取1ml，置20ml量瓶，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，用0.22μm有机系滤膜滤过，取续滤液，即得；所述稀释剂同流动相。
[0008]计算方法：主成分自身对照法。
[0009]在一般条件下，L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐对映异构体在普通色谱柱上基本无保留，与L
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丙氨酸异丙酯不能分开；且其紫外吸收很弱，导致方法灵敏度很差，采用直链淀粉衍生
物键合硅胶为填充剂的色谱柱，可有效分离丙氨酸异丙酯的异构体；同时，衍生化反应可增强化合物的紫外吸收，提高方法的灵敏度。
[0010]本专利技术所述的高效液相色谱分析方法，实现了L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐与其异构体在色谱柱上的分离，增强了保留，使其可以有效分离。
[0011]在本专利技术的分析方法中，L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐衍生物保留时间约为8.633min，L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐异构体衍生物保留时间约为7.487min，分离度大于3.0，分析所需时间短，峰形对称性好。本专利技术方法的回收率高，平均回收率为99.2%，且灵敏度高，检测限达0.04μg/ml。同时，本专利技术采用苯甲酰氯为衍生试剂，价格便宜，适用于常规检查，且溶液稳定性达到24h，检测限可达到0.04μg/ml。采用本专利技术的方法能快速分离检测L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐的对映异构体，并能准确测定L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐异构体的含量。
附图说明
[0012]图1为100%供试品溶液的液相色谱图，L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐衍生物保留时间约8.633min，异构体衍生物保留时间约7.487min；图2为L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐衍生物的标准曲线图；图3为L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐异构体衍生物的标准曲线图；图4为对照溶液液相色谱图；图5为样品供试品溶液色谱图。
具体实施方式
[0013]下面通过实施例对本专利技术做进一步的说明，但实施例并不限制本专利技术的保护范围。
[0014]主要仪器及色谱条件：安捷伦1200系列高效液相色谱仪；配VWD紫外检测器，自动进样器，Waters色谱工作站。
[0015]试剂与药品：二乙胺（分析纯）、正己烷（HPLC级）、异丙醇（HPLC级）、甲醇（HPLC级）、三乙胺（分析纯）、苯甲酰氯（分析纯）、L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐、D
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丙氨酸异丙酯盐酸盐、L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐衍生物（N
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苯甲酰基
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D
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丙氨酸异丙酯）、D
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丙氨酸异丙酯盐酸盐衍生物（N
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苯甲酰基
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L
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丙氨酸异丙酯）。
[0016]实施例1 色谱条件的选择1.1 波长的选择流动相：正己烷
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无水乙醇
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二乙胺比例为80:20:0.1。
[0017]D
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丙氨酸异丙酯盐酸盐衍生物溶液的配制：称取D
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丙氨酸异丙酯盐酸盐衍生物约10mg，置于10ml量瓶中，加流动相作为稀释剂溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种采用高效液相色谱法分离测定L
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丙氨酸异丙酯盐酸盐对映异构体的方法，其特征在于：以直链淀粉键合硅胶为填充剂的手性色谱柱；以正己烷
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无水乙醇
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二乙胺为流动相；采用衍生化反应进行样品制备。2.如权利要求1所述的方法，正己烷
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无水乙醇的体积比为75:25~85:15。3.如权利要求1或2所述的方法，正己烷与无水乙醇的体积比为80:20...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟家庆，郭云程，周曌，唐铨，刘强，
申请(专利权)人：重庆药友制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：