【技术实现步骤摘要】
琥珀酰亚胺酯及其制备、处理和检测方法
[0001]本专利技术涉及琥珀酰亚胺酯及其制备、处理和检测方法。
技术介绍
[0002]琥珀酰亚胺活性酯常用于荧光免疫、荧光探针、细胞染色等。包括特异性的DNA染色,用于染色体分析、细胞周期、细胞凋亡等相关研究。另有很多核酸染料在多色染色系统中是非常有用的复染剂,可作为背景对照,标记细胞核使细胞内结构的空间关系一目了然。
[0003]在免疫分析中荧光标记的单克隆抗体技术为流式细胞仪在研究细胞膜和细胞内各种功能性抗原、肿瘤基因蛋白等领域扩展了无限的应用空间。荧光探针可以通过蛋白质交联剂共价结合在单克隆抗体上。
[0004]在核酸检测中荧光染料对细胞核染色后定量测量细胞所发出的荧光强度,就可以确定细胞核中DNA、RNA的含量,并可以对细胞周期和细胞的增殖状况进行分析。有多种荧光染料可以对细胞中的DNA或RNA染色,常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst 33342等,RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。
[0005]目前市面上的荧光染料价格比较高,其相关的活性酯因产率低、纯化困难且不稳定,导致染料活性酯生产成本更加高昂,这也推高了基因测序技术及荧光染料生物标记的成本,同时限制了它的推广应用。所以优化工艺,降低生物染料活性酯的生产成本是其技术发展的必然方向。另外常规的检测的手段,对活性较高的琥珀酰亚胺活性酯难以检查或者检测结果偏差较大。
[0006]降低成本的重要方向之一就是降低琥珀酰亚胺活性酯的合成成本。
[0007]传统技术 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种琥珀酰亚胺酯的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:在三乙胺存在的条件下,在溶剂中使化合物A与TSTU进行缩合反应,得到琥珀酰亚胺酯;其中,所述的化合物A的结构式为:结构式为:
其中,R
11
和R
12
独立地为
‑
O
‑
、
‑
S
‑
或
‑
N
‑
;R
21
、R
22
、R
23
和R
24
独立地为
‑
SO3H、
‑
OH、
‑
NH2、
‑
F、
‑
Cl、或
‑
Br;R
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、R
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、R
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、R
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、R
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、R
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、R
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和R
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独立地为
‑
H、
‑
F、
‑
Cl、或
‑
Br;并且,所述的缩合反应在以下条件中的至少一个下进行:条件1:所述的缩合反应在氮气或惰性气体保护下进行;条件2:所述的缩合反应的反应温度为0~
‑
50℃,不包括0℃;条件3:所述的TSTU分至少2次加入反应体系。2.如权利要求1所述的琥珀酰亚胺酯的制备方法,其特征在于,所述的化合物A为
和/或,所述的琥珀酰亚胺酯的制备方法包括以下步骤:在氮气或惰性气体保护下,在三乙胺存在的条件下,在溶剂中使化合物A与TSTU进行缩合反应,得到琥珀酰亚胺酯;和/或,所述的琥珀酰亚胺酯的制备方法包括以下步骤:在三乙胺存在的条件下,在溶剂中使化合物A与TSTU进行缩合反应,反应温度为0~
‑
50℃,得到琥珀酰亚胺酯;和/或,所述的琥珀酰亚胺酯的制备方法包括以下步骤:在三乙胺存在的条件下,在溶剂中使化合物A与TSTU进行缩合反应,得到琥珀酰亚胺酯,其中,所述的TSTU分至少2次加入反应体系;和/或,所述的琥珀酰亚胺酯的制备方法包括以下步骤:所述的化合物A与三乙胺的摩尔比为1:5
‑
20;又例如,所述的化合物A与三乙胺的摩尔比为为1:5
‑
15,又例如,所述的化合物A与三乙胺的摩尔比为1:10;和/或,所述的溶剂为酰胺类溶剂,如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺;
和/或,所述的化合物A和溶剂的用量比为0.05
‑
0.20mol:1L;又例如,所述的化合物A和溶剂的用量比为0.10
‑
0.16mol:1L;又例如,所述的化合物A和溶剂的用量比为0.16mol:1L、0.15mol:1L、0.14mol:1L、0.13mol:1L或0.12mol:1L;和/或,所述的化合物A与TSTU的摩尔比为1:1
‑
5;又例如,所述的化合物A与TSTU的摩尔比为1:2
‑
4;又例如,所述的化合物A与TSTU的摩尔比为1:3;和/或,所述的缩合反应的反应温度为0~
‑
30℃进行,不包括0;例如,所述的反应在0~
‑
20℃进行;又例如,所述的缩合反应在
‑
10℃进行;和/或,所述的反应时间为0.1
‑
10h;又例如,所述的反应时间为0.1
‑
5h;又例如,所述的反应时间为1h;和/或,所述的TSTU分至少2次加入反应体系,例如,分2
‑
10次加入反应体系,又例如,分2
‑
5次加入反应体系,又例如,分2次、分3次、4次或5次加入反应体系;和/或,所述的缩合反应的具体步骤包括:将TSTU加入到温度为
‑
70~
‑
10℃以下的含有化合物A和三乙胺的溶液中进行反应;优选地,所述的TSTU在氮气或惰性气体保护下加入反应体系;优选地,所述的含有化合物A和三乙胺的溶液通过将化合物A和TEA溶于所述溶剂中得到;和/或,所述的制备方法还包括后处理;优选地,所述的后处理包括:将反应液的pH值调节为5
‑
7.5,例如,将反应液的pH值调节为6
‑
7;更优选地,所述的后处理包括:将反应液与含有pH值调节剂的二氯甲烷溶液混合,使得pH值为5
‑
7.5;更优选地,所述的后处理还包括:将反应液与含有pH值调节剂的二氯甲烷溶液的混合物与石油醚混合。3.如权利要求2所述的琥珀酰亚胺酯的制备方法,其特征在于,所述的琥珀酰亚胺酯的制备方法包括以下步骤:在氮气或惰性气体保护下,在三乙胺存在的条件下,在溶剂中使化合物A与TSTU进行缩合反应,反应温度为0~
‑
50℃,得到琥珀酰亚胺酯,其中,所述的TSTU分至少2次加入反应体系;和/或,所述的后处理包括:将反应液加入到含有pH值调节剂的二氯甲烷中,使得pH值为5
‑
7.5,再加入石油醚,有固体析出,过滤;和/或,所述的溶剂和二氯甲烷的体积比为1:10
‑
20,例如为1:15;和/或,所述的二氯甲烷和石油醚的体积比为1
‑
5:1,例如为2
‑
4:1,又例如为3:1;和/或,所述的pH值调节剂和二氯甲烷的体积比为1:100
‑
200,例如1:150。4.一种含有琥珀酰亚胺酯的溶液的处理方法,其包括:将含有琥珀酰亚胺酯的溶液的pH值调节为5
‑
7.5;其中,所述的琥珀酰亚胺酯为:
其中,R
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32
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33
、R
34
、R
35
、R
36
、R...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨明三,张少桥,王明,李汉东,章文蔚,
申请(专利权)人:湖北华大基因研究院,
类型:发明
国别省市:
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