微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组、探针及应用制造技术

本发明专利技术提供微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组、探针及应用，属于禽圆环病毒2型检测技术领域，所述引物组包括上游引物AGV2

【技术实现步骤摘要】
微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组、探针及应用


[0001]本专利技术涉及禽圆环病毒2型检测
，尤其涉及微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组、探针及应用。

技术介绍

[0002]禽圆环病毒2型AGV2是2011年Rijsewijk等人首次在巴西的病鸡中发现的一种新发传染病。AGV2是鸡传染性贫血病毒(CAV)相关的环形病毒。同年，与AGV2序列同源性较高的一种人类病毒(HGyV)在法国人群的皮肤中被检出。2015年，新型环形病毒AGV2首次在中国内地的鸡群和健康的人群中发现。Bullenkamp等研究表明AGV2的VP3蛋白与CAV的VP3蛋白结构类似，能诱导癌细胞凋亡。AGV2已经在不同的地区(如意大利、南非、美国、巴西和荷兰)被检测到，这表明该病毒分布范围比较广。此外，一项检测市场销售的家禽疫苗是否被AGV2污染的研究中发现，巴西、加拿大和荷兰产的32株活性疫苗中发现有9株疫苗含有AGV2，这可能是造成AGV2分布范围比较广的原因。越来越多的证据表明AGV2对鸡和人均具有感染性，这不仅对家禽业而且对人类的健康也构成了巨大本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组和探针，其特征在于：所述引物组和探针的核苷酸序列如下所示：上游引物AGV2
‑
F：5
’
GACGATGGAGGAGTCACTGGTT 3
’
(SEQ ID NO：1)；下游引物AGV2
‑
R：5
’
GTCCGTCTGGGTYTCCTGTGT 3
’
(SEQ ID NO：2)；探针AGV2
‑
P：5
’
FAM
‑
CAGGAGGCTAGTGGACT
‑
BHQ1 3
’
(SEQ ID NO：3)。2.根据权利要求1所述的微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组和探针，其特征在于：所述上游引物AGV2
‑
F、下游引物AGV2
‑
R和探针AGV2
‑
P的摩尔比为9:9:5。3.根据权利要求1所述的微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组和探针在PCR扩增中的应用，其特征在于：退火温度为54.0℃。4.微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组和探针在PCR扩增中的应用，其特征在于：总的扩增体系为20μL：dd PCRTMSupermix for Probe 10μL，设置6个不同引物探针组合，浓度为600、600、900、900、1200、1200nmol/L上下游引物各1μL，对应浓度梯度为150、300、250、500、350、600nmol/L的探针1μL，模板2μL，最后用ddH2O补足20μL反应体系。5.根据权利要求4所述的微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组和探针在PCR扩增中的应用，其特征在于：dd PCR反应程序为：95℃预变性10min；94℃30s，退火温度60.0～50.0℃，40个循环，98℃固化10min，4℃结束反应，升降温度设置2.0℃/s。6.根据权利要求5所述的微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组和探针在PCR扩增中的应用，其特征在于：Real
‑
time PCR反应体系为20μL：Probe qPCR Mix，with UNG 10μL，上下游引物各0.4μL，浓度为900nmol/L，探针0.8μL，浓度为900nmol/L，ROX Reference Dye 0.4μL，模板2μL，ddH2O 6μL。7.根据权利要求6所述的微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的引物组和探针在PCR扩增中的应用，其特征在于：反应程序：95℃预变性30s；95℃5s，退火温度60℃34s，40个循环；4℃结束反应。8.微滴式数字PCR检测禽圆环病毒2型的方法，其特征在于：所...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢芝勋，张艳芳，曾婷婷，张民秀，谢丽基，罗思思，黄娇玲，王盛，邓显文，谢志勤，刘加波，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：