含有Treg细胞的药物组合物以及在自身免疫性疾病中的用途制造技术

本发明专利技术涉及含有Treg细胞的药物组合物以及在自身免疫性疾病中的用途，本发明专利技术还提供一种PDE9A单克隆抗体，该抗体能够促进Treg细胞的增殖及提高其活性，增殖的Treg细胞具有较好的治疗免疫相关疾病的效果。的治疗免疫相关疾病的效果。

【技术实现步骤摘要】
含有Treg细胞的药物组合物以及在自身免疫性疾病中的用途


[0001]本专利技术涉及生物领域，更具体的涉及Treg细胞的增殖以及相应的用于免疫相关疾病的治疗。

技术介绍

[0002]调节性T细胞(Regulatory cells,简称Tregs)是一类控制体内自身免疫反应性的T细胞亚群，早期亦称做suppressor T cells。调节性T细胞可分为天然产生的自然调节性T细胞(n T
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regs)和诱导产生的适应性调节性T细胞(aT
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regs或i T
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regs)，如Th3、Tr1，另外尚有CD8 Treg、NKT细胞等，与自身免疫性疾病的发生关系密切，其异常表达可导致自身免疫性疾病。
[0003]调节性T细胞(Regulatory T cells)是维持机体免疫耐受的重要因素之一，它由胸腺产生后输出至外周，并通过主动调节的方式抑制存在于正常机体内潜在的自身反应性T细胞的活化与增殖，从而调节机体的免疫力，如防止自身免疫性疾病的发生。CD4*CD25
’
/FOXP3*细胞的数量减少或功能异常均有可能导致自身免疫病的发生，一些自身免疫性疾病如多发性硬化症、活动性类风湿关节炎、I型糖尿病等调节性T细胞的数量和功能均会发生变化。在许多恶性疾病如肺、胰腺和乳腺癌等已经发现调节性T细胞明显增高。调节性T细胞也阻断抗肿瘤免疫反应从而导致死亡率上升，也可用于骨髓移植术前术后的跟踪。
[0004]自身免疫性疾病(autoimmunediseases，AID)是机体因免疫功能紊乱对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织、器官、系统损伤所致的一类疾病，包括自身免疫性肝病(AILD)、自身免疫性甲状腺病、自身免疫性溶血性贫血、系统性硬化症、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、多发性脑脊髓硬化症、重症肌无力、硬皮病、混合性结缔组织病等多种疾病。AID发病机制不明确，临床表现和诊断方法各异，多种细胞因子参与发病，但以效应T细胞参与的免疫反应更为显著，且肾上腺皮质激素治疗和/或免疫抑制剂治疗AID有一定疗效。T细胞除了Th1、Th2亚群外，还包括Th17和Treg两个新亚群，Th17细胞的主要效应因子IL
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17有促炎效应，而Treg细胞分泌IL
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4、IL
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10和转化生长因子β(TGF
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β)等具有免疫抑制作用且两者在AID中的作用成为近年来的研究热点。
[0005]Treg细胞是Th1、Th2、Th17之外的T细胞亚群，具有免疫调节功能，能够分泌IL
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4、IL
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10和TGF
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β等细胞因子，在免疫稳态和诱导免疫耐受中发挥重要作用。Treg细胞可分为天然型调节T细胞(nTreg)和诱导型调节T细胞(iTreg)两类；nTreg由胸腺细胞分化发育而来；iTreg由外周成熟T细胞受到特异性抗原刺激并在细胞因子的诱导下分化而来。Treg通过多种机制发挥免疫抑制作用，如产生抑制性细胞因子、破坏靶向T细胞的代谢、细胞溶解和调节树突状细胞的分化和功能。转录因子叉头盒P3(Foxp3)参与Treg细胞的分化并特异性高表达，是目前最特异的Treg细胞标志物。转录激活子STAT5是参与Treg细胞分化与存活的另一重要因素。
[0006]Treg细胞在免疫平衡中扮演的角色。在最严重的Treg缺乏症中，IPEX(免疫调节，多内分泌病，肠病，X连锁)综合征最为突出，关键Treg谱系特异性转录因子FOXP3(叉头盒
P3)中的突变导致Treg缺陷，导致致命的多器官炎症和自身免疫。重要的是，Tregs的数量和/或功能的减少与许多常见自身免疫疾病的病理学有关。实际上，在一些疾病环境中，Treg功能缺陷或Treg生长和存活因子如白细胞介素
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2(IL
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2)的减少，再加部组织环境中高浓度炎性细胞因子如IL
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6，IL
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12，IL
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1的产生让Treg不稳定，从而导致不受控制的炎症和过度的组织损伤。
[0007]因此，许多正在进行的研究正在开始重新利用之前获批的药物，如Treg生长因子(例如，IL
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2)和Treg稳定因子(例如，雷帕霉素)，以增强Treg功能的药物，这些可以作为控制各种自身免疫疾病，GvHD和器官移植排斥反应的方法。上述这些结果强调了通过增强Treg活性直接改变病理性免疫应答的机会，这也是基于Treg的ACT目标。
[0008]用于治疗自身免疫疾病的第一个临床前概念验证研究是使用多克隆的调节性T细胞(Tregs)进行的，他们称为抑制性细胞，这些细胞基于包括CD4，CD25和CD62L在内的多种细胞表面标志物表达分离出来的。这些努力以及随后使用纯化的FOXP3+Tregs的研究获得成功，促进了在多种疾病环境中进行的若干临床试验，包括器官移植排斥，GvHD，T1D和自身免疫综合征。
[0009]研究发现，PDE9A抑制剂能够制备提升Treg(即调节性T细胞，Regulatory cell)含量，可应用于对自身免疫疾病的治疗。PDE9A抑制剂可以用于制备提升Treg含量的试剂。但是目前，Treg细胞分离获得的数量较少，因此研究如何高产量的获得Treg细胞是目前研究的方向。

技术实现思路

[0010]专利技术人发现，PDE9A抑制剂能够提高Treg细胞的含量，在此基础上，开发了针对PDE9A的单克隆抗体抑制剂以及相应的提高Treg细胞产量的方法。
[0011]进一步的，本专利技术提供一种PDE9A的单克隆抗体4D3，所述抗体的轻重链可变区分别如下所示：
[0012]轻链可变区(SEQ ID NO：1)
[0013]DIVITQRPALMAASPGEKVTITCCLGEWLHCVNRFWYQQKSGISPKPWIYKMWIYPLGVPARFSGSGSGTSYSLTITSMEAEDAATYYCRDVCYVKTIFGAGTKLELK
[0014]重链可变区(SEQ ID NO：2)
[0015]EVQLEESATELARPGASVKLSCKASGYIFSTPSMCWIKQRPGQGLEWIGIESDPSCTYSNSGIRNGKATLTADKSSSTAYMQLSSLASEDSAVYYCAGILGCLHIWGLGTTLAVSS
[0016]进一步的，本专利技术还提供一种如上述PDE9A的单克隆抗体的编码基因。
[0017]进一步的，PDE9A的单克隆抗体编码基因的表达载体。
[0018]另外，本专利技术的抗体的另一种方式是作为任何下述抗体及其抗原结合片段的“衍生物”。术语“衍生物”是指免疫特异性结合抗原的抗体或其抗原结合片段，但其包括相对于“亲本”(或野生型)分子的一个，两个，三个，四个，五个或更多个氨基酸取代，添加，缺失或修饰。这种氨基酸取代或添加可以引入天然存在的(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种PDE9A的单克隆抗体4D3，所述抗体的轻链可变区如SEQ ID NO：1所示：重链可变区序列如SEQ ID NO：2所示。2.一种编码权利要求1所述的PDE9A的单克隆抗体的表达载体。3.权利要求1所述的PDE9A的单克隆抗体4D3在制备用于促进CD4+CD25+Treg细胞的增殖药物中的用途。4.增殖后的CD4+CD25+Treg细胞在制备用于治疗关节炎的药物中的用途，其中所述增殖后的CD4+CD25+Treg细胞是将分离的CD4+CD25+Treg细胞用含有1000u/ml IL
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【专利技术属性】
技术研发人员：李少波，黄昱，亓爱杰，马润林，
申请(专利权)人：诺赛联合北京生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：