RAC1蛋白单克隆抗体及其制备方法与应用技术

本申请涉及生物免疫学技术领域，尤其涉及一种RAC1蛋白单克隆抗体及其制备方法与应用，提供了一种RAC1蛋白单克隆抗体，所述RAC1蛋白单克隆抗体的序列包括：RAC1蛋白单克隆抗体序列的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.1，RAC1蛋白单克隆抗体序列的轻链可变区的氨基酸序列为SEQID NO.2；提供的RAC1蛋白单克隆抗体特异性强，能够准确、快速对RAC1蛋白进行检测，特异性与RAC1蛋白结合，且保证与RHO蛋白家族其他蛋白等无交叉反应，有利于广泛应用于免疫学检测。疫学检测。

【技术实现步骤摘要】
RAC1蛋白单克隆抗体及其制备方法与应用


[0001]本申请属于生物免疫学
，尤其涉及一种RAC1蛋白单克隆抗体及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]Rac 1是Rho家族成员之一。Rho家族在细胞的一些基本功能中起着"分子开关"的作用，参与了细胞的运动、肌动蛋白重组、肿瘤的恶性转型、侵袭转移、转录因子的调节、细胞的凋亡以及肿瘤的血管生成等过程。Rac1基因编码的蛋白为GTPase，属于小GTP结合蛋白的RAS超家族；在细胞运动与黏附、细胞的增殖分化与凋亡、肿瘤的侵袭与转移以及免疫调节等方面部发挥了重要的作用。
[0003]目前，对RAC1蛋白的检测均采用免疫学检测方法，其中，免疫学检测的方法包括ELISA、荧光免疫吸附、化学发光和免疫层析。免疫学检测的难点在于寻找准确度高、稳定性好的抗体。现阶段对于 RAC1蛋白采用的抗体均为多克隆抗体，多克隆抗体是指同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，导致了对RAC1蛋白的检测的特异性差，易出现假阳性，不利于准确判断。

技术实现思路

[0004]本申请的目的在于提供一种RAC1蛋白单克隆抗体及其制备方法与应用，旨在解决现有技术中RAC1蛋白多克隆抗体特异性差，不利于准确、快速对RAC1蛋白进行检测的问题。
[0005]为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：
[0006]第一方面，本申请提供一种RAC1蛋白单克隆抗体，RAC1蛋白单克隆抗体的序列包括：RAC1蛋白单克隆抗体序列的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.1，RAC1蛋白单克隆抗体序列的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。
[0007]第二方面，本申请提供一种RAC1蛋白单克隆抗体的制备方法， RAC1蛋白单克隆抗体的制备方法包括如下步骤：
[0008]将RAC1蛋白溶于缓冲液得到RAC1蛋白溶液，将RAC1蛋白溶液用于免疫小鼠，获得免疫小鼠以及免疫血清；
[0009]分别培养免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞，并进行细胞融合处理，采用间接ELISA和间接竞争ELISA进行筛选，得到杂交瘤细胞株；
[0010]将杂交瘤细胞株进行细胞克隆，得到强阳性单克隆细胞；
[0011]将强阳性单克隆细胞接种至小鼠体内，采用体内诱生腹水法制备得到RAC1蛋白单克隆抗体。
[0012]第三方面，本申请提供一种RAC1蛋白单克隆抗体或由RAC1 蛋白单克隆抗体的制备方法制备得到的RAC1蛋白单克隆抗体在制备RAC1蛋白的检测试剂中的应用。
[0013]第四方面，本申请提供一种用于检测RAC1蛋白的试剂盒，试剂盒包括RAC1蛋白单克隆抗体或由RAC1蛋白单克隆抗体的制备方法制备得到的RAC1蛋白单克隆抗体。
[0014]本申请第一方面提供的RAC1蛋白单克隆抗体，该单克隆抗体的序列包括：RAC1蛋白单克隆抗体序列的重链可变区的氨基酸序列 SEQ ID NO.1以及RAC1蛋白单克隆抗体序列的轻链可变区的氨基酸序列SEQ ID NO.2；提供的RAC1蛋白单克隆抗体特异性强，能够准确、快速对RAC1蛋白进行检测，特异性与RAC1蛋白结合，且保证与RHO蛋白家族其他蛋白等无交叉反应，有利于广泛应用于免疫学检测。
[0015]本申请第二方面提供的RAC1蛋白单克隆抗体的制备方法，该制备方法以RAC1蛋白为原料制备RAC1蛋白单克隆抗体，制备过程中，采用细胞融合技术将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，利用间接 ELISA和间接竞争ELISA对进行筛选，得到强阳性单克隆细胞；再利用体内诱生腹水法制备得到RAC1蛋白单克隆抗体，该制备方法流程清楚，方便操作，合成方法简单，合成效率高，制备得到的RAC1 蛋白单克隆抗体能特异性与RAC1蛋白结合，且抗体效价且保证与 RHO蛋白家族其他蛋白等无交叉反应，有利于广泛应用于免疫学检测。
[0016]本申请第三方面提供的一种RAC1蛋白单克隆抗体或由RAC1 蛋白单克隆抗体的制备方法制备得到的RAC1蛋白单克隆抗体在制备RAC1蛋白的检测试剂中的应用，由于RAC1蛋白单克隆抗体特异性高，在应用过程中能够准确与RAC1蛋白结合，且保证与RHO蛋白家族其他蛋白等无交叉反应，有利于广泛使用。
[0017]本申请第四方面提供的一种用于检测RAC1蛋白的试剂盒，试剂盒包括RAC1蛋白单克隆抗体或由RAC1蛋白单克隆抗体的制备方法制备得到的RAC1蛋白单克隆抗体，由于RAC1蛋白单克隆抗体特异性高，在应用过程中能够准确与RAC1蛋白结合，且保证与RHO蛋白家族其他蛋白等无交叉反应，有利于广泛使用。
具体实施方式
[0018]为了使本申请要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本申请进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请，并不用于限定本申请。
[0019]本申请中，术语“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在 A和B，单独存在B的情况。其中A，B可以是单数或者复数。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
[0020]本申请中，“至少一个”是指一个或者多个，“多个”是指两个或两个以上。“以下至少一项(个)”或其类似表达，是指的这些项中的任意组合，包括单项(个)或复数项(个)的任意组合。例如，“a,b,或c 中的至少一项(个)”，或，“a,b,和c中的至少一项(个)”，均可以表示：a,b,c,a
‑
b(即a和b),a
‑
c,b
‑
c,或a
‑
b
‑
c，其中a,b,c分别可以是单个，也可以是多个。
[0021]应理解，在本申请的各种实施例中，上述各过程的序号的大小并不意味着执行顺序的先后，部分或全部步骤可以并行执行或先后执行，各过程的执行顺序应以其功能和内在逻辑确定，而不应对本申请实施例的实施过程构成任何限定。
[0022]在本申请实施例中使用的术语是仅仅出于描述特定实施例的目的，而非旨在限制本申请。在本申请实施例和所附权利要求书中所使用的单数形式的“一种”和“该”也旨在包括多数形式，除非上下文清楚地表示其他含义。
[0023]本申请实施例说明书中所提到的相关成分的重量不仅仅可以指代各组分的具体含量，也可以表示各组分间重量的比例关系，因此，只要是按照本申请实施例说明书相关组
分的含量按比例放大或缩小均在本申请实施例说明书公开的范围之内。具体地，本申请实施例说明书中的质量可以是μg、mg、g、kg等化工领域公知的质量单位。
[0024]术语“第一“、“第二”仅用于描述目的，用来将目的如物质彼此区分开，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。例如，在不脱离本申请实施例范围的情况下，第一 XX也可以被称为第二XX，类似地，第二XX也可以被称为第一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种RAC1蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述RAC1蛋白单克隆抗体的序列包括：所述RAC1蛋白单克隆抗体序列的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.1，所述RAC1蛋白单克隆抗体序列的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。2.根据权利要求1所述的RAC1蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述RAC1蛋白单克隆抗体的相对分子质量为150～160kDa。3.根据权利要求1所述的RAC1蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述RAC1蛋白单克隆抗体的抗体效价为10E4～10E5。4.一种如权利要求1～3任一项所述的RAC1蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述RAC1蛋白单克隆抗体的制备方法包括如下步骤：将RAC1蛋白溶于缓冲液得到RAC1蛋白溶液，将RAC1蛋白溶液用于免疫小鼠，获得免疫小鼠以及免疫血清；分别培养所述免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞，并进行细胞融合处理，采用间接ELISA和间接竞争ELISA进行筛选，得到杂交瘤细胞株；将所述杂交瘤细胞株进行细胞克隆，得到强阳性单克隆细胞；将所述强阳性单克隆细胞接种至小鼠体内，采用体内诱生腹水法制备得到RAC1蛋白单克隆抗体。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述RAC1蛋白溶液的蛋白浓度为50～55mg/mL。...

【专利技术属性】
技术研发人员：张浩洋，石坚，徐爱华，朱国方，
申请(专利权)人：绍兴守仁医疗健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：