高活性植物凝集素的分离纯化工艺制造技术

本发明专利技术公开了高活性植物凝集素的分离纯化工艺，包括将豆子使用纯水充分浸泡后，脱皮，脱皮后的豆子与缓冲液混合，破壁处理，得到浆液；将浆液充分搅拌，使PHA充分溶出；初步去除杂质得到PHA粗提液；之后依次使用SP离子交换色谱和DEAE离子交换色谱纯化，得到PHA

【技术实现步骤摘要】
高活性植物凝集素的分离纯化工艺


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种高活性植物凝集素的分离纯化工艺。

技术介绍

[0002]豆科植物凝集素(Phytohemagglutinin,PHA)是一种从豆科植物种子中提取的糖基化修饰蛋白，是由两种高同源性而生物活性不同的亚基构成的四聚体糖蛋白，其包括E亚基组成的红细胞凝集素(PHA
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E)，以及L亚基组成的白细胞凝集素(PHA
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L)。PHA
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E具有较高的凝血活性，可以促使红细胞凝集，PHA
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L具有较高的有丝裂原活性。其中，PHA多作为高效免疫增强剂在生物医学领域使用，其主要是因为PHA
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L可与哺乳动物血细胞(如淋巴细胞)上的蛋白糖基结合，产生非特异性刺激活性，促使淋巴细胞分裂增值，具有多种免疫效应，如可作为作为生物免疫反应因子用于评估机体的免疫机能。
[0003]盐析法纯化蛋白时，具有处理工艺简单，处理量大的、成本低廉、不会破坏蛋白结构的优势。因此在传统的PHA的提取工艺中，常采用盐本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利于得到高活性植物凝集素的分离纯化工艺，包括如下步骤：步骤1：前处理：将豆子使用纯水充分浸泡后，与缓冲液混合，破壁处理，得到浆液；将浆液充分搅拌，使PHA充分溶出；调节浆液的pH为4.5～5.5，固液分离，取上清，得到PHA粗提液；或固液分离，调节豆浆的pH为4.5～5.5后去除沉淀，取上清，得到PHA粗提液；步骤2：SP离子交换色谱纯化：将PHA粗提液上样在SP离子交换色谱柱，使用缓冲液梯度洗脱，收集得到PHA洗脱液；所述梯度洗脱用的缓冲液选自NaAC
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HAc缓冲液、柠檬酸
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氢氧化钠缓冲液、磷酸氢二钠
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柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸氢二钠
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磷酸二氢钾缓冲液中的至少一种；步骤3：换液：将PHA洗脱液的缓冲体系切换为Tris、HEPES、MOPS、TEA、磷酸氢二钾或硼酸钠缓冲液体系；步骤4：DEAE离子交换色谱纯化：使用DEAE离子交换色谱对换液后的PHA洗脱液进行洗脱纯化，得到PHA
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L蛋白溶液。2.根据权利要求1所述的分离纯化工艺，其特征在于：步骤1中，所述豆子脱皮后再与缓冲液混合。3.根据权利要求1所述的分离纯化工艺，其特征在于：步骤1中，经充分搅拌得到的所述浆液先经至少12h冷冻后，并经解冻复融，再调节浆液的pH为4.5～5.5。4.根据权利要求1所述的分离纯化工艺，其特征在于：步骤1中使用的所述缓冲液的pH=4.5～7.4；和/或步骤1中使用的所述缓冲液选自NaAC
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HAc缓冲液、柠檬酸
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【专利技术属性】
技术研发人员：杨翔，黄彬，谢桂华，
申请(专利权)人：广州市雷德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：