一种从刀豆中同时提取脲酶和刀豆凝集素的方法技术

本发明专利技术属于生物蛋白提取技术领域，具体涉及一种从刀豆中同时提取脲酶和刀豆凝集素的方法，方法包括如下步骤：刀豆研磨成粉，加入提取液，离心收集上清液；室温条件下向上清液中低速缓慢加入PEG溶液，冰箱静置，离心后收集沉淀；将所得沉淀进行重悬，抽滤后上清过凝胶层析，首先流出的部分为脲酶，之后洗脱的部分为刀豆凝集素；得到脲酶与刀豆凝集素的上清液，分别加入硫酸铵粉末充分溶解，冷藏，离心后收集沉淀；将沉淀用透析液溶解后进行透析，透析结束后低温离心，收取上清进行冷冻干燥。本发明专利技术方法具有工艺简单、易于操控、成本相对较低的特点；用该方法制备的碳化晶须具有数量多、长径比大、纯度高和应用前景大的优点。纯度高和应用前景大的优点。纯度高和应用前景大的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种从刀豆中同时提取脲酶和刀豆凝集素的方法


[0001]本专利技术属于生物蛋白提取
，具体涉及一种从刀豆中同时提取脲酶和刀豆凝集素的方法。

技术介绍

[0002]我国地域辽阔，豆类资源十分丰富。豆类脂肪含量低，富含纤维素、蛋白质等营养物质，是极佳的食用作物，在我国广泛种植，此外从豆类中提取出的许多化合物作为酶制剂在多种领域发挥重要作用，例如脲酶和刀豆凝集素。刀豆中同时富含大量脲酶和刀豆凝集素，同时提取两种蛋白的技术具有相当大的实际价值。
[0003]脲酶是一种寡聚酶，可以特异性的催化尿素分解生成氨和二氧化碳，其催化效率远高于无机催化剂且反应条件温和，反应进行迅速。最初脲酶于1962年被美国科学家从刀豆中提取分离得到并凭借这一成果成功夺得诺贝尔奖。现如今脲酶在多个领域都发挥着重要的作用；在环境治理方面，脲酶被用于处理富含尿素的污水，是污水处理的重要一步；在生物医药方面，脲酶被应用于多种检测传感器的开发和尿素检测试剂盒；在酿酒行业，重组酸性脲酶被用于对黄酒中尿素和隐性致癌物质氨基甲酸乙酯的降解；在工业生产上，固定化脲酶与其它酶联用在调本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从刀豆中同时提取脲酶和刀豆凝集素的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)提取：称取刀豆并研磨成粉，过筛后加入提取液，室温下将刀豆粉末和提取液充分搅拌均匀，使刀豆粉末中的脲酶和刀豆凝集素充分浸出，在室温下将混合物进行离心，收集上层清液；2)PEG沉淀：在室温条件下向得到的上清液中低速缓慢加入PEG溶液混合均匀，将溶液转移至冰箱中静置，之后进行离心，移除上层清液收集下层的沉淀；3)SephadexG～50凝胶层析：对SephadexG～50凝胶柱使用平衡Buffer进行平衡，向得到的沉淀中加入Wash Buffer重悬，进行抽滤后将重悬后的液体使用SephadexG～50凝胶进行层析并依次使用Wash Buffer冲洗、Elution Buffer进行洗脱，Wash Buffer冲洗流出的液体为刀豆脲酶溶液，之后通过Elution Buffer洗脱收集到的洗脱液为刀豆凝集素溶液；4)硫酸铵沉淀：向得到的刀豆脲酶溶液、刀豆凝集素溶液中分别低速缓慢加入硫酸铵固体粉末，待到硫酸铵粉末完全溶解后，将溶液转移至冰箱中静置进行沉淀，之后进行离心，移除上层清液收集下层的沉淀；5)透析冻干：将得到的沉淀按照一定比例分别使用透析液进行溶解，之后进行离心，收集上清液，将收集到的上清液加入到透析袋中，再放置到冰箱中使用磁力搅拌器进行透析，透析结束后进行低温离心，离心结束后收集上层清液，对上层清液进行冷冻干燥得到刀豆脲酶晶体和刀豆凝集素晶体。2.根据权利要求1所述的从刀豆中同时提取脲酶和刀豆凝集素的方法，其特征在于：步骤1)中，刀豆磨成粉后采用孔径80目的筛网进行筛分，筛除较大颗粒、保留粉末。3.根据权利要求1所述的从刀豆中同时提取脲酶和刀豆凝集素的方法，其特征在于：步骤1)中，提取液的成分含有终浓度3％的PEG4000～8000、溶剂为25mM的柠檬酸
‑
柠檬酸钠缓冲液。4.根据权利要求1所述的从刀豆中同时提取脲酶和刀豆凝集素的方法，其特征在于：步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：李婷婷，郑梦泽，周倩，
申请(专利权)人：伊势久江苏连云港生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：