一种全自动免疫组化染色机适配的低pH抗原修复缓冲液及其制备方法技术

一种全自动免疫组化染色机适配的低pH抗原修复缓冲液及其制备方法，其特征在于：该低pH抗原修复缓冲液的原料主要包括：柠檬酸三钠，吐温

【技术实现步骤摘要】
一种全自动免疫组化染色机适配的低pH抗原修复缓冲液及其制备方法


[0001]本申请涉及全自动免疫组化染色机
，具体是指一种全自动免疫组化染色机适配的低pH(pH 5.8～6.2)抗原修复缓冲液及其制备方法。
技术背景
[0002]免疫组织化学技术是近年来病理诊断迅速发展的检测技术，作为一种重要的病理辅助诊断方法，在临床的应用中日益受到重视。起初，免疫组化染色技术以人工操作为主，抗原修复液使用量大，使用方法不统一，质量标准无法统一，染色结果稳定性差。
[0003]免疫组化技术近年来得到迅速发展，并随着全自动免疫组化染色仪的应用推广，对于染色质量的要求也日益提高。其中，抗原修复在整个免疫组化染色过程中有着极其重要的作用，修复条件的好坏直接决定着最终染色结果的质量。
[0004]目前市面上的抗原修复液不能有效地控制体外诊断试剂中微生物的生长，使抗原修复缓冲液在冷藏条件或者是室温条件下不能长期稳定地保存与使用；而且抗原修复缓冲液的成分对诊断试剂中的关键酶与底物的结合速率产生影响；此外，现有的抗原修复液在少量使用时，容易发生玻片上液体不均一现象，不能完全覆盖组织玻片，即浸润性差；此外，抗原修复液在少量使用时，高温(100℃左右)下容易发生干片，即易挥发。

技术实现思路

[0005]本申请针对现有技术的上述不足，提供一种有效地控制体外诊断试剂中微生物的生长，使抗原修复缓冲液无论在冷藏条件还是室温条件下，能长期稳定地保存与使用，具有更好的浸润性，其在较高温度下不容易挥发，避免导致组织切片发生干化情况，其pH具有较好的稳定性且具有较好的抗菌保存功能的全自动免疫组化染色机适配的低pH抗原修复缓冲液。
[0006]为了解决上述技术问题，本申请采用的技术方案为：一种低pH抗原修复缓冲液，该低pH抗原修复缓冲液的原料主要包括：柠檬酸三钠，吐温
‑
20，丙三醇，ProClin 950，且该抗原修复缓冲液的pH值范围为pH 5.8～6.2。
[0007]进一步的，上述的低pH抗原修复缓冲液，每1000mL的该低pH抗原修复缓冲液包括：柠檬酸三钠2.10～3.25g，吐温
‑
20 0.35～0.6mL，丙三醇150～550mL，ProClin 950 0.25～0.5mL和余量的纯化水，该抗原修复缓冲液的pH值范围为pH 5.8～6.2。
[0008]进一步的，上述的低pH抗原修复缓冲液，每1000mL的该低pH抗原修复缓冲液包括：柠檬酸三钠2.3～3.25g，吐温
‑
20 0.45～0.6mL，丙三醇300～550mL，ProClin 9500.3～0.5mL和余量的纯化水，该抗原修复缓冲液的pH值范围为pH 5.8～6.2。
[0009]进一步的，上述的低pH抗原修复缓冲液，每1000mL的该低pH抗原修复缓冲液包括：柠檬酸三钠2.5～3.25g，吐温
‑
20 0.5～0.6mL，丙三醇450～550mL，ProClin 9500.35～0.5mL和余量的纯化水，该抗原修复缓冲液的pH值范围为pH 5.8～6.2。
[0010]进一步的，上述的低pH抗原修复缓冲液，每1000mL的该低pH抗原修复缓冲液包括：柠檬酸三钠3.0～3.25g，吐温
‑
20 0.55～0.6mL，丙三醇500～550mL，ProClin 9500.40～0.5mL和余量的纯化水，该抗原修复缓冲液的pH值范围为pH 5.8～6.2。
[0011]本申请还提供一种上述低pH抗原修复缓冲液的制备方法，具体包括：
[0012](1)按配比称取柠檬酸三钠，用纯化水溶解柠檬酸三钠后，加入配方量的丙三醇，完全溶解后添加配方量的吐温
‑
20；
[0013](2)在步骤(1)溶解后的溶液中再添加配方量的ProClin 950，最后用纯化水定容至额定容量；
[0014](3)调节抗原修复缓冲液的pH值，使其pH值在pH5.8～6.2范围内即可。
[0015]优选的，上述低pH抗原修复缓冲液的制备方法，步骤(3)调节抗原修复缓冲液的pH值使用1M的NaOH溶液。
[0016]优选的，上述低pH抗原修复缓冲液的制备方法，步骤(3)调节抗原修复缓冲液的pH值使用1M的HCl溶液。
[0017]本申请的优点和有益效果：
[0018]1.在本申请的抗原修复缓冲液中，首次添加了柠檬酸三钠，添加了柠檬酸三钠之后可以形成柠檬酸三钠水溶液作为缓冲液；由于柠檬酸三钠具有极好的溶解性能，并且溶解性随水温升高而增加；此外，柠檬酸三钠还具有良好的pH调节及缓冲性能，柠檬酸三钠作为一种弱酸强碱盐，与柠檬酸配伍可组成较强的pH缓冲剂，因此在某些不适宜pH大范围变化的场合有其重要用处；而本申请仅仅添加柠檬酸三钠、其经过大量的水稀释后，会有部分变成柠檬酸，这样柠檬酸三钠和柠檬酸两者就会共存于同一体系中，形成较强的pH缓冲剂；另外，柠檬三酸钠还具有优良的缓凝性能及稳定性能，安全无毒；本申请的pH值稳定，主要以生物缓冲剂柠檬酸三钠的水溶液为基础构成的缓冲液，同时也能作为pH调节剂，使得缓冲液的pH更加稳定。
[0019]2.在本申请的抗原修复缓冲液中，首次引入了ProClin 950，ProClin 950是一种高效生物防腐剂，ProClin 950的加入，可以有效地控制体外诊断试剂中微生物的生长，使抗原修复缓冲液无论在冷藏条件还是室温条件下，能长期稳定地保存与使用；此外，ProClin 950不会对诊断试剂中的关键酶与底物的结合速率产生影响，比如：辣根过氧化酶(HRP)，碱性磷酸酶(AP)，且也不会对抗体的结合产生影响。
[0020]3.在本申请的抗原修复缓冲液中，吐温
‑
20作为温和的表面活性剂，具有复性抗原的作用，可提高特异性的识别能力，降低抗体的非特异性结合，同时也可作为乳化剂使其他物质均匀在溶液中分散。
[0021]4.在本申请的抗原修复缓冲液中，丙三醇的加入，可与水以任何比例溶解，作为一种混合溶剂，能够提高抗原修复缓冲液液的沸点，防止其在高温条件下过度挥发，对抗原修复缓冲液中的活性成分和pH值的影响较小，且与组织切片的亲和性较好(浸润性好)，毒性低，不会对组织切片的修复造成过多影响；同时也具有延长保质期的功效。
[0022]5.本申请的抗原修复缓冲液具有较好的浸润性，而且抗原修复缓冲液分布均一；主要是通过加入合适比例的丙三醇和吐温
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20相互作用，实现了与组织切片的亲和性较好(浸润性好)，且使缓冲液中的物质能均匀在溶液中分散。
[0023]6.本申请在少量使用和高温条件下，缓冲液能稳定存在及使用，是通过加入合适
比例的丙三醇与水混合形成一种混合溶剂，能够提高抗原修复缓冲液液的沸点，防止其在高温条件下过度挥发。
[0024]7.本申请的修复液，通过以柠檬酸三钠、吐温
‑
20、丙三醇和ProC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种全自动免疫组化染色机适配的低pH抗原修复缓冲液，其特征在于：该低pH抗原修复缓冲液的原料主要包括：柠檬酸三钠，吐温
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20，丙三醇，ProClin 950，且该抗原修复缓冲液的pH值范围为pH 5.8～6.2。2.根据权利要求1所述的全自动免疫组化染色机适配的低pH抗原修复缓冲液，其特征在于：每1000mL的该低pH抗原修复缓冲液包括：柠檬酸三钠2.10～3.25g，吐温
‑
20 0.35～0.6mL，丙三醇150～550mL，ProClin 950 0.25～0.5mL和余量的纯化水，该抗原修复缓冲液的pH值范围为pH 5.8～6.2。3.根据权利要求2所述的全自动免疫组化染色机适配的低pH抗原修复缓冲液，其特征在于：每1000mL的该低pH抗原修复缓冲液包括：柠檬酸三钠2.3～3.25g，吐温
‑
200.45～0.6mL，丙三醇300～550mL，ProClin 950 0.3～0.5mL和余量的纯化水，该抗原修复缓冲液的pH值范围为pH 5.8～6.2。4.根据权利要求4所述的全自动免疫组化染色机适配的低pH抗原修复缓冲液，其特征在于：每1000mL的该低pH抗原修复缓冲液包括：柠檬酸三钠2.5～3.25g，吐温
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200.5～0.6mL，丙三醇450～550mL，ProCl...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈雯，徐秀芬，
申请(专利权)人：浙江莱阅病理诊断科技有限公司，
类型：发明
国别省市：