一种基于生物膜干涉的多糖与蛋白相互作用亲和力的方法技术

本发明专利技术涉及一种基于生物膜干涉技术的非共价固定多糖检测多糖与蛋白相互作用亲和力的方法。利用非共价结合的方式将多糖吸附固定在氨基丙基硅烷(APS)传感器表面，再通过生物膜干涉技术检测蛋白与多糖的亲和力。该方法适用于高分子量、带有负电荷的多糖，解决了生物膜干涉技术中多糖不易固定、多糖分子量不均一造成的亲和力难于表征等问题。该方法操作简便，蛋白样品用量小，多糖样品可重复多次利用、可行性高。可行性高。可行性高。

【技术实现步骤摘要】
一种基于生物膜干涉的多糖与蛋白相互作用亲和力的方法


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及一种基于生物膜干涉技术的非共价固定多糖检测多糖与蛋白相互作用亲和力的方法。
技术背景
[0002]生物膜干涉技术(Biolayer Interferometry，BLI)是继表面等离子体共振技术后另一种研究分子间相互作用的有效方法。BLI是一种光学分析技术，其原理是将一种分子固定在光纤生物传感器的末端使之形成一层分子薄层，当一束光照射到分子薄层的内表面和外表面时，反射的两束光线互相干扰产生干涉现象，从而形成信号。当传感器上固定的分子和溶液中的待测分子相结合时，分子薄层厚度会继续增加，这种变化可以被实时检测出来。而未结合的分子由于未能影响分子层的改变则不会生成信号。BLI技术的应用十分广泛，可以检测生物分子之间是否存在相互作用，得出平衡解离常数K
D
值，结合、解离速率K
on
和K
off
值；测定蛋白的浓度，对蛋白定量；还可以进行药物筛选，对抗体亚型分型等。
[0003]传感器上的分子固定本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于生物膜干涉的多糖与蛋白相互作用亲和力的方法，其特征在于：利用氨基丙基硅烷(APS)传感器非共价键吸附固定多糖，检测蛋白与多糖的亲和力。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：具体操作为：1)传感器的预湿：将4个以上APS传感器光纤末端分别浸入水中，用水浸润预湿；2)多糖的离线固定：将4个以上APS传感器光纤末端分别浸入多糖溶液中；3)传感器的封闭：将4个以上APS传感器光纤末端分别浸入1
‑
5％(g/mL)BSA(牛血清白蛋白)的缓冲液的溶液中；4)亲和力检测：于生物膜干涉仪进行；a、将4个以上APS传感器光纤末端分别浸入1
‑
5％BSA(g/mL)的缓冲液的溶液，进行基线信号获取；b、将4个以上APS传感器光纤末端分别浸入不同浓度蛋白样品实验组溶液，进行结合信号获取；实验组溶液的制备：将1
‑
5％BSA(g/mL)的缓冲液的溶液梯度稀释的3个以上不同浓度蛋白样品，蛋白样品终浓度在大于0至20μg/mL之间，以蛋白样品终浓度为0的1
‑
5％BSA(g/mL)缓冲溶液为对照；c、将4个...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁鑫淼，郑义，闫竞宇，李佳齐，郭志谋，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：