一种基于平衡补偿的重组流感病毒构建方法技术

本发明专利技术公开了一种基于平衡补偿的重组流感病毒构建方法。所述方法基于平衡补偿的原则，在插入外源基因的目标节段引入补偿性突变，所述补偿性突变能够重新实现重组病毒基因组多节段的微平衡，减少或消除病毒衰减机制，产生具备遗传稳定性的重组流感病毒。产生具备遗传稳定性的重组流感病毒。产生具备遗传稳定性的重组流感病毒。

【技术实现步骤摘要】
一种基于平衡补偿的重组流感病毒构建方法


[0001]本专利技术涉及流感病毒反向遗传学技术，尤其涉及一种基于平衡补偿的重组流感病毒构建方法。

技术介绍

[0002]近年来，反向遗传学的快速发展促进了携带多种报告基因且具有复制能力的重组甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)的产生，这些流感报告病毒能够实现病毒复制的快速量化。此外，基于流感报告病毒还能够建立病毒感染小动物活体成像模型，该模型对于新型抗病毒药物的开发具有重要意义。这些IAV感染的活体成像动物模型对新型抗病毒药物的开发产生深远的影响。
[0003]然而，由于IAV基因组的分节段结构限制了其对外来基因插入的耐受性，这些流感报告病毒在细胞或动物体内复制过程中，容易呈现复制能力降低、毒力下降或基因组不稳定等现象。因此，当前流感报告病毒构建大多选择较小的报告基因。
[0004]一系列定向进化策略能够为报告IAV提供优化。例如，Katsura et al.和Cai et al.利用报告IAV在小鼠中进行连续传代和定向筛选，最终产生的小鼠适应性突变株其毒力与野生型本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组流感病毒的构建方法，其特征在于，所述方法基于平衡补偿的原则，在插入外源基因的目标节段引入补偿性突变，所述补偿性突变能够重新实现重组病毒基因组多节段的微平衡，产生具备遗传稳定性的重组流感病毒；其包括如下步骤：a.质粒材料制备，在插入外源基因的目标节段引入补偿性突变；b.病毒拯救，将病毒拯救质粒共同转染到宿主细胞中，经共同培养后，从上清液中收获重组流感病毒，反向遗传学拯救带有突变的重组流感病毒。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述插入外源基因的目标节段选自如下任一种或至少两种的组合：NS、PB1、PB2、PA、NA和NP中的任一种；优选地，所述外源基因选自报告基因和/或编码免疫原性蛋白的基因；优选地，所述外源基因的大小为0.2kb
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10kb，进一步优选为0.3kb
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5kb，最优选为0.5kb
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2kb；优选地，所述报告基因包括Gluc和/或Fluc；优选地，所述补偿性突变包括如下任一种或至少两种的组合：启动子增强突变、3'
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NCR中的C4到U4的突变、NA的可变NCR中的U13到C13的突变和聚合酶突变。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述插入外源基因的目标节段为NS；所述外源基因为Gluc；所述补偿性突变为启动子增强突变；所述启动子增强突变包括在NS
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Gluc片段的3'NCR上引入额外突变G3A/C8U。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述插入外源基因的目标节段为NS；所述外源基因为Fluc；所述补偿性突变为启动子增强突变；所述启动子增强突变包括在NS
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Fluc片段的3'NCR上引入额外突变G3A/U5C/C8U。5.根据权利要求1
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4任一项所述的方法制备得到的重组流感病毒。6.一种重组报告流感病毒，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜瑞坤，崔清华，荣立军，赵秀娟，
申请(专利权)人：山东中医药大学青岛中医药科学院，
类型：发明
国别省市：