具有抗肿瘤活性的苦参-黄连提取物及其质量检测方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种具有抗肿瘤活性的苦参

【技术实现步骤摘要】
具有抗肿瘤活性的苦参
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黄连提取物及其质量检测方法与应用


[0001]本专利技术涉及一种中药
，具体涉及具有抗肿瘤活性的苦参
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黄连提取物及其质量检测方法与应用。

技术介绍

[0002]液质联用技术以液相色谱作为分离系统，质谱作为检测系统，利用色谱分离技术将混合样品分离成单一物质，进入质谱系统后，这些物质被离子化，经质谱质量分析器将不同质量数的离子碎片分开，通过质谱检测器分析其物质结构，利用判断化学键的断裂方式，通过对照图库中的质荷比，判断离子碎片的结构，从而对未知样品进行定性量。液质联用技术将高效液相对复杂样品的高分离能力与质谱的高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量和结构信息的优点相结合。中药化学成分复杂多样，如何高效分离识别中药化学成分是中药药效物质基础研究中的一个关键性难题，液质联用技术的使用使得这个难题迎刃而解。通过简单的前处理后，将少量的药品上机检测，简单高效、易于操作地对中药成分进行快速准确的分析，因此，液质联用技术是中药药效物质基础研究中不可或缺的一种实验方法。
[0003]苦参为豆科植物苦参(SophoraflavescensAit.)的干燥根。其主要含有苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、甲基金雀花碱、槐果碱、粉防己碱等生物碱成分与苦参素等黄酮类成分，具有抗炎解热、抗菌止痒、抗肿瘤、抗心律失常和心肌缺血等作用。黄连为毛茛科植物黄连(Coptis chinensis Franch.)、三角叶黄连(Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao)或云连(Coptis teeta wall.)的干燥根茎，其主要有效成分为药根碱、巴马汀、小檗碱等生物碱，以及木脂素、黄酮、糖(苷)类等，具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤等功效。黄连、苦参两味药材分别具有清热燥湿、泻火解毒和清热燥湿、涤荡湿度的功效，且两味药材在古籍《普济方》中辅以阿胶，组成黄连苦参汤，主治：得病羸劣，服药不愈，因作肠滑，下痢脓血，日数十行，腹中绞痛，身热如火，头痛如破，其脉如涩。临床中被用于结直肠癌治疗，具有良好的疗效。

技术实现思路

[0004]专利技术目的：本专利技术的目的是解决现有技术的不足，经过大量实验筛选，提供一种具有抗肿瘤活性的苦参
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黄连提取物及其质量检测方法与应用。
[0005]技术方案：为了实现以上目的，本专利技术采取的技术方案为：
[0006]一种具有抗肿瘤活性的苦参
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黄连提取物，它是通过以下方法制备得到的：取一定重量比的苦参和黄连药材，先加适量水浸泡，然后加水提取，合并滤液，浓缩得到。
[0007]作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的苦参
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黄连提取物，它是通过以下方法制备得到的：取一定重量比的苦参和黄连药材，加适量水浸泡0.5小时，然后加10倍量水提取1～3次，每次1～2小时，合并滤液，浓缩、得到。
[0008]作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的苦参
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黄连提取物，它是通过以下方法制备得到的：取一定重量比的苦参和黄连药材，浸泡0.5小时，加10倍量水提取2次，每次1小时，合并滤液，浓缩至生药量浓度约为1g/ml。
[0009]作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的苦参
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黄连提取物，苦参和黄连药材1:1～1:4。
[0010]一种具有抗肿瘤活性的苦参
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黄连提取物的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0011]步骤(1)对照品溶液的制备
[0012]精密称取槐果碱，苦参碱，槐定碱，氧化槐果碱，氧化苦参碱，黄连碱，甲基黄连碱，小檗碱，药根碱，盐酸巴马汀，加甲醇制成混合标准储备溶液，4℃保存；
[0013]步骤(2)供试品溶液的制备
[0014]取一定重量比的苦参和黄连药材，加适量水浸泡0.5小时，然后加10倍量水提取1～3次，每次1～2小时，合并滤液，浓缩至生药量浓度约为1g/ml，进样之前过微孔滤膜；
[0015]步骤(3)线性回归方程的建立
[0016]取步骤(1)的混合标准储备溶液，依次稀释5倍，通过0.22μm纤维素膜过滤，得到系列浓度的混合对照品溶液，依次注入UPLC
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TQ
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MS，以系列对照品浓度作为横坐标X，对应的峰面积为纵坐标Y，对各化学成分进行线性回归分析并计算线性回归方程；
[0017]步骤(4)含量测定
[0018]取步骤(2)的苦参
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黄连药对供试品溶液，注入UPLC
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TQ
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MS进行分析，将峰面积代入步骤(3)的线性回归方程，计算供试品溶液中各成分的含量。
[0019]作为优选方案，以上所述的苦参
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黄连药对的质量检测方法，步骤(1)对照品溶液的制备方法为：
[0020]精密称取槐果碱，苦参碱，槐定碱，氧化槐果碱，氧化苦参碱，黄连碱，甲基黄连碱，小檗碱，药根碱，盐酸巴马汀，加甲醇制成浓度分别为300、600、600、600、600、600、600、600、300、200μg/mL的混合标准储备溶液，4℃保存，进样前，过0.22μm微孔滤膜。
[0021]作为优选方案，以上所述的苦参
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黄连药对的质量检测方法，步骤(3)和步骤(4)中的UPLC
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TQ
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MS的色谱条件为：
[0022]色谱条件：WatersAcquity HSS T3色谱柱；0.1％甲酸水溶液为A相，乙腈为B相，梯度洗脱：0～1min，15％B、1～5min，15％B
→
50％B、5～7min，50％B，7～10min，50％B
→
15％B、10～13min，15％B；流速：0.3mL/min；柱温：35℃；进样量：2μL。
[0023]质谱条件：电喷雾离子化，多反应监测离子扫描模测定，主要质谱参数为：毛细管电压5500V，脱溶剂温度550℃；采用正、负离子检测模式，选择的检测离子质荷比分别为：槐果碱m/z 247.2/996.1，苦参碱m/z 249.2/148.3，槐定碱m/z 249.3/152.1，氧化槐果碱m/z 263.3/245.1，氧化苦参碱m/z 265.3/205.2，黄连碱m/z 319.7/292.0，甲基黄连碱m/z 334.2/261.1，小檗碱m/z335.9/320.2，药根碱m/z 337.9/322.4，盐酸巴马汀m/z 352.0/336.1；
[0024][0025][0026]作为优选方案，以上所述的苦参
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黄连药对的质量检测方法，步骤(3)中10种对照品的线性回归方程如下表：
[0027]化合物标准曲线R2线性范围/ng/mL槐果碱Y＝26219*X+648151.000.5～300苦参碱Y＝34340*X
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有抗肿瘤活性的苦参
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黄连提取物，其特征在于，它是通过以下方法制备得到的：取一定重量比的苦参和黄连药材，先加适量水浸泡，然后加水提取，合并滤液，浓缩得到。2.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的苦参
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黄连提取物，其特征在于，它是通过以下方法制备得到的：取一定重量比的苦参和黄连药材，加适量水浸泡0.5小时，然后加10倍量水提取1～3次，每次1～2小时，合并滤液，浓缩、得到。3.根据权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的苦参
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黄连提取物，其特征在于，苦参和黄连药材1:1～1:4。4.一种具有抗肿瘤活性的苦参
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黄连提取物的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)对照品溶液的制备精密称取槐果碱，苦参碱，槐定碱，氧化槐果碱，氧化苦参碱，黄连碱，甲基黄连碱，小檗碱，药根碱，盐酸巴马汀，加甲醇制成混合标准储备溶液，4℃保存；步骤(2)供试品溶液的制备取一定重量比的苦参和黄连药材，加适量水浸泡0.5小时，然后加10倍量水提取1～3次，每次1～2小时，合并滤液，浓缩至生药量浓度约为1g/ml，进样之前过微孔滤膜；步骤(3)线性回归方程的建立取步骤(1)的混合标准储备溶液，依次稀释5倍，通过0.22μm纤维素膜过滤，得到系列浓度的混合对照品溶液，依次注入UPLC
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TQ
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MS，以系列对照品浓度作为横坐标X，对应的峰面积为纵坐标Y，对各化学成分进行线性回归分析并计算线性回归方程；步骤(4)含量测定取步骤(2)的苦参
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黄连药对供试品溶液，注入UPLC
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TQ
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MS进行分析，将峰面积代入步骤(3)的线性回归方程，计算供试品溶液中各成分的含量。5.根据权利要求1所述的苦参
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黄连药对的质量检测方法，其特征在于，步骤(1)对照品溶液的制备方法为：精密称取槐果碱，苦参碱，槐定碱，氧化槐果碱，氧化苦参碱，黄连碱，甲基黄连碱，小檗碱，药根碱，盐酸巴马汀，加甲醇制成浓度分别为300、600、600、600、600、600、600、600、300、200μg/mL的混合标准储备溶液，4℃保存，进样前，过0.22μm微孔滤膜。6.根据权利要求1所述的苦参
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黄连药对的质量检测方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(4)中的UPLC
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TQ
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MS的色谱条件为：色谱条件：Wa...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙东东，程海波，李志成，沈卫星，李柳，闫秋莹，谭佳妮，余成涛，赖岳阳，陈姿含，
申请(专利权)人：江苏亚邦中药饮片有限公司，
类型：发明
国别省市：