具有抗肿瘤活性的苦参提取物及其质量检测方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种具有抗肿瘤活性的苦参提取物及其质量检测方法与应用。本发明专利技术根据苦参中不同生物碱和黄酮成分的结构及其性质特点，通过大量实验筛选出最佳的流动相组成，洗脱程序、流速，色谱柱、质谱条件等分析条件。经多次实验验证表明，本发明专利技术采用UPLC

【技术实现步骤摘要】
具有抗肿瘤活性的苦参提取物及其质量检测方法与应用


[0001]本专利技术涉及一种中药
，具体涉及具有抗肿瘤活性的苦参提取物及其质量检测方法与应用。

技术介绍

[0002]液质联用技术以液相色谱作为分离系统，质谱作为检测系统，利用色谱分离技术将混合样品分离成单一物质，进入质谱系统后，这些物质被离子化，经质谱质量分析器将不同质量数的离子碎片分开，通过质谱检测器分析其物质结构，利用判断化学键的断裂方式，通过对照图库中的质荷比，判断离子碎片的结构，从而对未知样品进行定性量。液质联用技术将高效液相对复杂样品的高分离能力与质谱的高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量和结构信息的优点相结合。中药化学成分复杂多样，如何高效分离识别中药化学成分是中药药效物质基础研究中的一个关键性难题，液质联用技术的使用使得这个难题迎刃而解。通过简单的前处理后，将少量的药品上机检测，简单高效、易于操作地对中药成分进行快速准确的分析，因此，液质联用技术是中药药效物质基础研究中不可或缺的一种实验方法。
[0003]苦参为豆科植物苦参(Sophora flavescens Ait.)的干燥根。其主要含有苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、甲基金雀花碱、槐果碱、粉防己碱等生物碱成分与苦参素等黄酮类成分，具有抗炎解热、抗菌止痒、抗肿瘤、抗心律失常和心肌缺血等作用。
[0004]本专利技术在苦参现有活性的基础上，开发具有抗结肠癌活性的苦参提取物和其质量检测方法。

技术实现思路

[0005]专利技术目的：本专利技术的目的是解决现有技术的不足，经过大量实验筛选，开发具有抗结肠癌活性的苦参提取物和其质量检测方法。
[0006]技术方案：为了实现以上目的，本专利技术采取的技术方案为：
[0007]一种具有抗肿瘤活性的苦参提取物，其特征在于，它是通过以下方法制备得到的：取苦参药材，先加适量水浸泡，再加水提取，合并提取液，浓缩，既得。
[0008]作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的苦参提取物，它是通过以下方法制备得到的：取苦参药材，加适量水浸泡0.5～1小时，再加5～20倍量水提取1～2次，每次0.5～1.5小时，合并提取液，浓缩，既得。
[0009]一种具有抗肿瘤活性的苦参提取物的质量检测方法，包括以下步骤：
[0010]步骤(1)生物碱对照品溶液的制备
[0011]精密称取槐果碱、苦参碱、槐定碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱，加甲醇制成生物碱混合标准储备溶液，4℃保存；
[0012]步骤(2)黄酮对照品溶液的制备
[0013]精密称取三叶豆紫檀苷、苦参酮、苦参醇I、高丽槐素，加甲醇制成黄酮混合标准储
备溶液，4℃保存；
[0014]步骤(3)供试品溶液的制备
[0015]取苦参药材，加适量水浸泡0.5～1小时，再加5～20倍量水提取1～2次，每次0.5～1.5小时，合并提取液，浓缩，进样之前过微孔滤膜；
[0016]步骤(4)线性回归方程的建立
[0017]取步骤(1)生物碱混合标准储备溶液和步骤(2)黄酮混合标准储备溶液，依次稀释5倍，通过0.22μm纤维素膜过滤，得到系列浓度的混合对照品溶液，依次注入UPLC
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TQ
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MS，以系列对照品浓度作为横坐标X，对应的峰面积为纵坐标Y，对各化学成分进行线性回归分析并计算线性回归方程；
[0018]步骤(5)含量测定
[0019]取步骤(2)的苦参供试品溶液，注入UPLC
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TQ
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MS进行生物碱的分析，将峰面积代入步骤(3)的线性回归方程，计算供试品溶液中各生物碱成分的含量；
[0020]取步骤(2)的苦参供试品溶液，注入HPLC进行黄酮成分的分析，将峰面积代入步骤(3)的线性回归方程，计算供试品溶液中各黄酮成分的含量。
[0021]作为优选方案，所述的具有抗肿瘤活性的苦参提取物的质量检测方法，步骤(1)生物碱对照品溶液的制备方法为：
[0022]精密称取称取槐果碱、苦参碱、槐定碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱，加甲醇制成浓度分别为300、600、600、600、600μg/mL的混合标准储备溶液，4℃保存，进样前，过0.22μm微孔滤膜。
[0023]作为优选方案，所述的具有抗肿瘤活性的苦参提取物的质量检测方法，步骤(2)黄酮对照品溶液的制备
[0024]精密称取三叶豆紫檀苷、苦参酮、苦参醇I、高丽槐素，加甲醇制成浓度分别为7.1、72.0、33.2、16.8μg/mL的黄酮混合标准储备溶液，4℃保存。
[0025]作为优选方案，所述的具有抗肿瘤活性的苦参提取物的质量检测方法，步骤(3)和步骤(4)中测定生物碱的UPLC
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TQ
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MS的色谱条件为：
[0026]色谱条件：Waters Acquity HSS T3色谱柱，规格1.8μm，2.1mm，100mm；0.1％甲酸水溶液为A相，乙腈为B相，梯度洗脱：0～1min，15％B、1～5min，15％B
→
50％B，5～7min，50％B、7～10min，50％B
→
15％B、10～13min，15％B；流速：0.3mL/min；柱温：35℃；进样量：2μL；
[0027]质谱条件：电喷雾离子化，多反应监测离子扫描模测定，主要质谱参数为：毛细管电压5500V，脱溶剂温度550℃；采用正、负离子检测模式，选择的检测离子质荷比分别为：槐果碱m/z 247.2/996.1：苦参碱m/z 249.2/148.3，槐定碱m/z 249.3/152.1，氧化槐果碱m/z 263.3/245.1，氧化苦参碱m/z 265.3/205.2；
[0028]待测物去簇电压/V碰撞电压/V槐果碱4040苦参碱5040槐定碱5040氧化槐果碱4020氧化苦参碱7640
[0029]；
[0030]步骤(3)和步骤(4)中测定黄酮的色谱条件为：Waters2695高效液相色谱仪、Waters2998DAD检测器、色谱柱：PurospherSTAR LP RP
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C18 endcapped，规格250mm
×
4.6mm,5μm；流动相乙腈为A相，0.1％甲酸水溶液为B相，梯度洗脱：0
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15min，5％
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10％A；15
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35min，10％
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20％A；35
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50min，20％
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40％A；50
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70min，40％
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60％A；70
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75min,60％
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5％A；流速1.0mL/min；检测波长280nm；进样量10μL；柱温30℃。
[0031]作为优选方案，所述的具有抗肿瘤活性的苦参提取物的质量检测方法，其特征在于，步骤(3)中生物碱对照品的线性回本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有抗肿瘤活性的苦参提取物，其特征在于，它是通过以下方法制备得到的：取苦参药材，先加适量水浸泡，再加水提取，合并提取液，浓缩，既得。2.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的苦参提取物，其特征在于，它是通过以下方法制备得到的：取苦参药材，加适量水浸泡0.5～1小时，再加5～20倍量水提取1～2次，每次0.5～1.5小时，合并提取液，浓缩，既得。3.一种具有抗肿瘤活性的苦参提取物的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)生物碱对照品溶液的制备精密称取槐果碱、苦参碱、槐定碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱，加甲醇制成生物碱混合标准储备溶液，4℃保存；步骤(2)黄酮对照品溶液的制备精密称取三叶豆紫檀苷、苦参酮、苦参醇I、高丽槐素，加甲醇制成黄酮混合标准储备溶液，4℃保存；步骤(3)供试品溶液的制备取苦参药材，加适量水浸泡0.5～1小时，再加5～20倍量水提取1～2次，每次0.5～1.5小时，合并提取液，浓缩，进样之前过微孔滤膜；步骤(4)线性回归方程的建立取步骤(1)生物碱混合标准储备溶液和步骤(2)黄酮混合标准储备溶液，依次稀释5倍，通过0.22μm纤维素膜过滤，得到系列浓度的混合对照品溶液，依次注入UPLC
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MS，以系列对照品浓度作为横坐标X，对应的峰面积为纵坐标Y，对各化学成分进行线性回归分析并计算线性回归方程；步骤(5)含量测定取步骤(2)的苦参供试品溶液，注入UPLC
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TQ
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MS进行生物碱的分析，将峰面积代入步骤(3)的线性回归方程，计算供试品溶液中各生物碱成分的含量；取步骤(2)的苦参供试品溶液，注入HPLC进行黄酮成分的分析，将峰面积代入步骤(3)的线性回归方程，计算供试品溶液中各黄酮成分的含量。4.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的苦参提取物的质量检测方法，其特征在于，步骤(1)生物碱对照品溶液的制备方法为：精密称取称取槐果碱、苦参碱、槐定碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱，加甲醇制成浓度分别为300、600、600、600、600μg/mL的混合标准储备溶液，4℃保存，进样前，过0.22μm微孔滤膜。5.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的苦参提取物的质量检测方法，其特征在于，步骤(2)黄酮对照品溶液的制备精密称取三叶豆紫檀苷、苦参酮、苦参醇I、高丽槐素，加甲醇制成浓度分别为7.1、72.0、33.2、16.8μg/mL的黄酮混合标准储备溶液，4℃保存。6.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的苦参提取物的质量检测方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(4)中测定生物碱的UPLC
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MS的色谱条件为：色谱条件：WatersAcquity HSS T3色谱柱，规格1.8μm，2.1mm，100mm；0...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙东东，程海波，翁泽斌，李志成，顾俊菲，李柳，闫秋莹，徐长亮，范旻旻，陈姿含，
申请(专利权)人：江苏亚邦中药饮片有限公司，
类型：发明
国别省市：