一种基于RPA的光电化学传感器的制备方法及其应用技术

本发明专利技术提出了一种基于RPA的光电化学传感器的制备方法及其应用，基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术，构建了一种超灵敏检测大肠杆菌O157：H7的光电化学传感器。该光电化学传感器的制备方法为先通过简单的水热法合成小尺寸、低禁带宽度、高近红外PEC活性的半导体材料Bi2S3，将氨基功能化的Bi2S3与羧基功能化的大肠杆菌O157：H7反向引物偶联，作为光电信号物，正向引物固定在电极表面，大肠杆菌O157：H7的DNA作为目标检测物，执行RPA等温扩增反应，从而构建一个信号放大型光电化学传感器检测大肠杆菌O157：H7。该方法具有操作简单快速、灵敏度高、检出限低、稳定性好的特点。稳定性好的特点。稳定性好的特点。

【技术实现步骤摘要】
一种基于RPA的光电化学传感器的制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于食源性致病菌检测领域，具体涉及一种基于重组酶聚合酶扩增(RPA)的光电化学传感器的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]食源性疾病已成为食品安全的头号问题。据世界卫生组织估计，全世界每年约发生6亿例食源性疾病，其中婴幼儿作为易感群体，有2.2亿儿童发生感染性腹泻，9.6万死亡病例。食源性致病菌作为引发食源性疾病的重要因素，受到了广泛的关注。然而，在食品的生产加工过程中，任何环节都有可能引入致病菌，从而导致大规模的传染病的爆发，对人们身体健康造成极大的危害。常见七种致病菌被认为是造成食品污染的主要食源性致病菌，而这其中肠出血性大肠埃希氏菌(O157:H7)作为典型的食源性致病菌，能引发胃肠道疾病，甚至引发严重的局部化脓感染。因此，对食品中致病菌的快速灵敏检测，为食品安全保驾护航十分有必要。截至目前，食源性致病菌的检测方法有很多，如传统检测法(显微镜检查、培养和血清学检查)、免疫学检测法(如酶联免疫吸附试验)和分子生物学检测法(如聚合酶链式反应)等，虽然能实现致病菌检出本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于RPA的光电化学传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1：将氨基功能化Bi2S3(NH2‑
Bi2S3)溶于无酶水，得到悬浮液A；将羧基功能化大肠杆菌O157：H7反向引物(COOH
‑
AR)溶于磷酸盐缓冲溶液，得到溶液B；将1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N
‑
羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶于磷酸盐缓冲溶液中，得到溶液C；步骤S2：将所述悬浮液A、所述溶液B和所述溶液C混合反应得到悬浮液D；步骤S3：所述悬浮液D用所述磷酸盐缓冲液洗涤离心后去除未连接引物，然后分散于含牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲溶液中，得到目标产物Bi2S3‑
AR；步骤S4：在纸基丝网印刷电极(SPPE)表面生长金纳米粒子(AuNPs)，得到目标工作电极AuNPs/SPPE；步骤S5：将巯基功能化大肠杆菌O157：H7正向引物(SH
‑
AF)溶于所述磷酸盐缓冲溶液，得到溶液E，将所述溶液E滴在所述工作电极AuNPs/SPPE表面进行孵育，孵育结束后，用巯基乙醇(MCH)溶液冲洗，得到目标产物AF/AuNPs/SPPE；步骤S6：用细菌DNA提取试剂盒对大肠杆菌O157：H7的基因组DNA(gDNA)进行提取，得到大肠杆菌O157：H7 gDNA，产物作为模板参与后续RPA扩增；步骤S7：将所述Bi2S3‑
AR、所述大肠杆菌O157：H7 gDNA、无核酸酶水、Rehy
‑
dration Buffer和大肠杆菌O157：H7溶液正向引物(AF)加入到冻干粉试剂管内混合均匀得到混合溶液，将所述混合溶液转移至所述AF/AuNPs/SPPE表面，然后滴入醋酸镁溶液，反复抽吸开启不对称RPA反应，反应结束后，用所述巯基乙醇(MCH)溶液冲洗电极，得到目标产物Bi2S3‑
DNA
‑
AuNPs/SPPE。2.根据权利要求1所述的基于RPA的光电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲溶液的物质的量浓度为10mmol/L，pH值为7.4。3.根据权利要求1所述的基于RPA的光电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓梅，戈瑞，魏洁，陈全胜，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：