多潜能关节祖细胞、其组合物及制备方法技术

提供了一种使用多潜能关节祖细胞(joint progenitor cell，JPC)的治疗方法。还提供了JPC群、其在制备药物中的用途及其制备方法。其在制备药物中的用途及其制备方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多潜能关节祖细胞、其组合物及制备方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年8月27日提交的题为Multipotent Joint Progenitor Cells,Compositions and Methods Thereof的临时专利申请号62/892,067的优先权，其内容通过引用以其全文并入本文。


[0003]本公开提供了一种使用多潜能(multipotent)关节祖细胞(joint progenitor cell，JPC)的治疗方法。还提供了JPC、组合物以及使用和制备JPC的方法。

技术介绍

[0004]膝关节由三个主要结构组成，关节软骨(articular cartilage)、半月板(menisci)和前十字韧带(anterior cruciate ligament，ACL)。关节软骨由深带软骨细胞和浅层细胞组成，其表达润滑素(lubricin)以减少摩擦，使运动更顺畅。半月板是一种纤维软骨组织，作用在于分散我们的体重并减少摩擦。ACL提供针对膝关节处角度形成(angulation)和旋转的稳定性。这些组织的创伤、运动损伤和老化是骨关节炎(osteoarthritis，OA)的最常见原因，骨关节炎是导致残疾和慢性疼痛的主要原因之一，影响着全世界数百万人。这些组织的自我修复能力非常有限，可能是由于成人的祖细胞耗竭所致。已经开发了基于细胞的治疗方法，例如关节注射外源性干细胞(例如，骨髓MSC)，但结果可能并不理想，因为关于细胞进行正确分化和修复的环境线索还不够充分。因此，鉴定出一种更优化的启动有效修复过程的祖细胞类型尤为重要。

技术实现思路

[0005]本文提供了一种治疗关节疾病的方法，包括在有此需要的受试者的关节处施用多潜能关节祖细胞(joint progenitor cells，JPC)，其中从间区(interzone)获得的所述JPC是Lgr5
+
和/或Col22a1
+
。
[0006]本文提供了多潜能关节祖细胞(JPC)在制备用于治疗有此需要的受试者中的关节疾病的医疗产品中的用途，其中从间区获得的所述JPC是Lgr5+和/或Col22a1+。
[0007]本文提供了多潜能关节祖细胞(JPC)用于治疗关节疾病，包括在有此需要的受试者的关节处施用多潜能关节祖细胞(JPC)，其中从间区获得的所述JPC是Lgr5+和/或Col22a1+。
[0008]在一个实施方案中，关节疾病是韧带和关节软骨创伤或相关的退行性疾病。在一个实施方案中，关节疾病与骨关节炎有关或与关节组织相关的损伤有关。
[0009]在一个实施方案中，JPC分化为肌腱细胞、十字韧带、滑膜、半月板和/或关节软骨细胞(articular chondrocyte)。
[0010]本文提供了一种治疗韧带缺损(ligament defect)或肌腱缺损(tendon defect)的方法，包括在有此需要的受试者的关节处施用多潜能关节祖细胞(JPC)，其中从间区获得
的所述JPC表达Mkx和Scx。
[0011]本文提供了多潜能关节祖细胞(JPC)在制备用于治疗有此需要的受试者中的韧带缺损或肌腱缺损的医疗产品中的用途，其中从间区获得的所述JPC表达Mkx和Scx。
[0012]本文提供了多潜能关节祖细胞(JPC)用于治疗韧带缺损或肌腱缺损，包括在有此需要的受试者的关节处施用多潜能关节祖细胞(JPC)，其中从间区获得的所述JPC表达Mkx和Scx。
[0013]本文提供了一种治疗关节软骨细胞或半月板缺损的方法，包括在有此需要的受试者的关节处施用多潜能关节祖细胞(JPC)，其中从间区获得的所述JPC表达Pax9、Cdh13、Lrrc17和Col26a1。
[0014]本文提供了多潜能关节祖细胞(JPC)在制备用于治疗有此需要的受试者中的关节软骨细胞或半月板缺损的医疗产品中的用途，其中从间区获得的JPC表达Pax9、Cdh13、Lrrc17和Col26a1。
[0015]本文提供了多潜能关节祖细胞(JPC)用于治疗关节软骨细胞或半月板缺损，包括在有此需要的受试者的关节处施用多潜能关节祖细胞(JPC)，其中从间区获得的所述JPC表达Pax9、Cdh13、Lrrc17和Col26a1。
[0016]本文提供了一种产生关节祖细胞(JPC)的细胞系的方法，包括以下步骤
[0017](i)提供诱导的多能干细胞(induced pluripotent stem cell，iPSC)或扩增潜能干细胞(expanded potential stem cell，ePSC)；
[0018](ii)在糖原合成酶激酶
‑
3β抑制剂的存在下培养iPSC或ePSC；
[0019](iii)激活来自步骤(ii)的iPSC或ePSC的TGF
‑
β信号传导；
[0020](iv)在Fgf2和Mmp2的存在下培养来自步骤(iii)的iPSC或ePSC，其中从(ii)到(iv)步骤的培养为约5天以形成中内胚层；
[0021](v)从iPSC或ePSC培养物中去除步骤(ii)的糖原合成酶激酶
‑
3β抑制剂；
[0022](vi)抑制TGF
‑
β信号传导，将iPSC或ePSC培养约4天以形成中胚层；
[0023](vii)在iPSC或ePSC培养物中将中胚层分化为JPC；
[0024](viii)激活Wnt信号传导约5天；和
[0025](ix)调节iPSC或ePSC培养物中的Hedgehog(HH)浓度。
[0026]在一个实施方案中，糖原合成酶激酶
‑
3β抑制剂是CHIR99021。
[0027]在一个实施方案中，TGF
‑
β信号传导被激活素A(activin A)激活。
[0028]在一个实施方案中，TGF
‑
β信号传导被Fgf2、Bmp2和Sb431542抑制。
[0029]在一个实施方案中，在Fgf2和Gdf5的存在下，所述中胚层分化为JPC。
[0030]在一个实施方案中，通过添加R
‑
spondin来调节Wnt信号传导。
[0031]在一个实施方案中，iPSC或ePSC包含能够在iPSC或ePSC中表达GFP的LGR5
‑
GFP报告基因构建体。
[0032]在一个实施方案中，所述方法进一步包括监测所述iPSC或ePSC中的GFP表达的步骤。
[0033]本文提供了通过本公开的方法产生的JPC群体。
[0034]本文提供了一种治疗关节疾病的方法，包括施用所述JPC。
附图说明
[0035]通过以下附图的描述和示例，本公开的具体实施方案的前述和其他目的、特征和优点将是显而易见的。
[0036]图1：Lgr5在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种治疗关节疾病的方法，包括在有此需要的受试者的关节处施用多潜能关节祖细胞(JPC)，其中从间区获得的所述JPC是Lgr5
+
和/或Col22a1
+
。2.如权利要求1所述的方法，其中所述关节疾病是韧带和关节软骨创伤或相关的退行性疾病。3.如权利要求1所述的方法，其中所述关节疾病与骨关节炎或与关节组织相关的损伤有关。4.如权利要求1所述的方法，其中所述JPC分化为肌腱细胞、十字韧带、滑膜、半月板和/或关节软骨细胞。5.一种治疗韧带缺损或肌腱缺损的方法，包括在有此需要的受试者的关节处施用多潜能关节祖细胞(JPC)，其中从间区获得的所述JPC表达Mkx和Scx。6.一种治疗关节软骨细胞或半月板缺损的方法，包括在有此需要的受试者的关节处施用多潜能关节祖细胞(JPC)，其中从间区获得的所述JPC表达Pax9、Cdh13、Lrrc17和Col26a1。7.一种产生关节祖细胞(JPC)的细胞系的方法，包括以下步骤(i)提供诱导的多能干细胞(iPSC)或扩增潜能干细胞(ePSC)；(ii)在糖原合成酶激酶
‑
3β抑制剂的存在下培养iPSC或ePSC；(iii)激活来自步骤(ii)的iPSC或ePSC的TGF
‑
β信号传导；(iv)在Fgf2和Mmp2的存在下培养来自步骤(iii)的iPSC或ePSC，其中从(ii)到(iv)步骤的培养为约5天以形成中内胚层；(v)从所述iPSC或ePSC培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯琛，陈振胜，陈卓荣，林欣，
申请(专利权)人：张英泽，
类型：发明
国别省市：