一种银耳液体菌种的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种银耳液体菌种的制备方法，包括以下步骤：a、选取子实体生长至直径5~7 cm的银耳原种，作为液体菌种生产的出发菌种；b、取步骤a选取的银耳原种，在无菌条件下用接种刀将子实体和基质表面的老菌丝铲除，剩余菌种用银耳专用混种机将银耳与香灰菌菌丝混合均匀，在19~23℃下恒温恢复培养1~2天；c、在发酵罐中加入液体培养基，灭菌后，接种步骤b所得到的银耳菌种，在20~22℃下恒温培养5～6天，得到银耳液体菌种。本发明专利技术制备液体菌种不需要人工混种、成品率97%以上、生产产品产量高，是目前唯一达到商业化使用要求的液体菌种，适合瓶栽和袋栽。栽和袋栽。栽和袋栽。

【技术实现步骤摘要】
一种银耳液体菌种的制备方法


[0001]本专利技术属于银耳人工栽培
，具体涉及一种银耳液体菌种的制备方法，适用于银耳瓶栽和袋栽。

技术介绍

[0002]银耳 (Tremella fuciformis Berk.) 也称为白木耳，是一种非常珍贵的食药用菌，具有“菌中之冠”的美称。在营养方面，银耳属于低能、低脂肪，但是富含蛋白质、多糖和膳食纤维。它富含多种矿物质、微量元素和维生素。近年来的研究表明，银耳多酚具有较高的抗氧化活性。从其体内提取的天然多糖被认为包含人体营养和健康的主要活性成分，具有增强免疫力、降低血糖、降低血脂、抗衰老、抗溃疡、抗血栓形成等多种生物活性，是保健食品和药品的理想原料。人类从上世纪40年代开始有意识地人工栽培银耳，迄今已有近80年的栽培历史。
[0003]目前，银耳人工栽培均采用固体菌种，包含银耳和香灰菌 (Annulohypoxylon stygium)两种菌丝。香灰菌属于子囊菌，将基质中的木质纤维素降解成可溶性小分子物质，并源源不断地传输给银耳，为其菌丝和子实体的生长发育所用。银耳菌丝仅仅在其接种点周围1 cm 区域生长，而香灰菌菌丝生长在整个栽培基质。接种前，固体菌种需要进行人工混种，将银耳与香灰菌菌丝混合均匀，确保每个栽培瓶/袋所接菌种均包含银耳与香灰菌菌丝。银耳菌种的这一特性，导致其固体菌种接种过程只能人工进行，不仅耗时费力，混合菌种均一性差，无法进行大规模机械化操作，已成为银耳工厂化、规模化栽培的“卡脖子”问题。
[0004]采用发酵罐生产银耳液体菌种，实现菌种边搅拌边生产，银耳菌丝均匀分布在菌种的各个角落，确保每个栽培瓶/袋所接菌种均包含比例相当的银耳与香灰菌菌丝。菌种均一、可实现大规模机械化生产，是银耳工厂化、规模化栽培用种的理想选择。前人有对银耳的液体菌种进行探索，所制备的菌种均不稳定，生产银耳产量远低于固体菌种的水平、成品率均不超过50%，无法应用于生产。

技术实现思路

[0005]专利技术提供了一种适用于规模化栽培的银耳液体菌种的制备方法，解决现有固体菌种只能人工混种、耗时费力、均一性差、以及无法大规模机械化操作等问题。
[0006]为实现上述目的，采用以下技术方案：提供一种银耳液体菌种的制备方法，包括以下步骤：a、选取子实体生长至直径5 ~ 7 cm的银耳原种或培养8~9天的银耳生产种，作为液体菌种生产的出发菌种。
[0007]b、取步骤a所选取的银耳原种，在无菌条件下用接种刀将子实体和基质表面的老菌丝铲除，剩余菌种用银耳专用混种机将银耳与香灰菌菌丝混合均匀，在19 ~23℃下恒温恢复培养1~2 天；
c、在发酵罐中加入液体培养基，灭菌后，接种步骤b所得到的银耳菌种，在20~22℃下恒温培养5～6天，即得到银耳液体菌种。
[0008]步骤a所选取的银耳原种需满足如下条件：香灰菌菌丝吃料快、长势均匀，白毛团胶质化快、出耳早，子实体朵形圆整、耳片伸展好，没有污染。
[0009]步骤b的银耳与香灰菌混种中，采用专用接种机先将子实体基部硬块基质打撒，再混匀菌种瓶的其他位置，通过旋转接种机的机头混合菌种，必要时使用接种勺辅助混合上下界面的菌种。每瓶原种混合2~3分钟。
[0010]所述液体培养基的组成为：1000 ml培养基包含40 ~ 60 g 麸皮细粉、4 ~ 5 g 葡萄糖、6 ~ 9 g 蛋白胨、2 ~ 3 g 硫酸镁和4 ~ 6 g磷酸二氢钾，植物油 2
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3 g，其余为水。
[0011]所述液体培养基的制备步骤如下：按比例，将的麸皮细粉加配方量的水，煮沸30 ~40 min，两层纱布过滤，滤液中加入葡萄糖、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾和植物油，搅拌均匀后在压力0.11 MPa, 121 ℃下灭菌20~40 min。
[0012]进一步的，所述麸皮细粉为经过超微粉碎成粒径小于75 μm的颗粒。
[0013]进一步的，上述超微粉碎的具体操作步骤为：将新鲜麸皮烘干至含水量低于6%，经过剪切粉碎机重复粉碎10
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20次，用高速分散粉碎机粉碎，粉碎一次后用200目的标准筛网过筛；未通过筛的细粉再用高速分散粉碎机粉碎和200目标准筛网过筛，如此重复，最终麸皮细粒粒径小于75 μm。培养基中添加麸皮细粉的作用：1）麸皮细粉为银耳与香灰菌的生长提供营养；2）银耳菌丝只有与香灰菌紧密结合才能快速生长，液体发酵过程中压缩空气形成的剪切力容易引起游离态的银耳与香灰菌菌丝分开而导致银耳生长缓慢；当混合菌丝定植在麸皮上后，将银耳与香灰菌固定在麸皮中，不会受到空气剪切力的影响。
[0014]步骤c中，发酵罐为内腔容积50 L的食用菌专用气升式发酵罐，银耳液体菌种发酵罐培养的条件为：培养温度为20~22 ℃，通气量 L/min,溶氧量50~90%，利用空气喷嘴喷出高速的空气，以气泡式分散在液体中，通过气液密度差形成发酵罐内液体环流，促进银耳与香灰菌菌丝混合。
[0015]步骤c中，发酵罐加入液体培养基的量为发酵罐内腔容积的65~70 %。
[0016]步骤c的混合菌种接种量为，35 L 液体培养基中接种400~500 g 固体菌种。
[0017]进一步的，液体培养基的接种的具体步骤为：用75 %乙醇对银耳原种瓶四周表面进行消毒，酒精灯火焰对原种瓶瓶口进一步灭菌；在发酵罐接种口外圈凹槽倒入一些无水乙醇，点燃形成火焰圈；用接种铲将原种瓶中的固体菌种接种至液体培养基中。
[0018]本专利技术所取得的技术效果：（1）本专利技术提供了一种银耳液体菌种的制备方法，利用空气喷嘴喷出高速的空气，以气泡式分散在液体中，通过气液密度差形成发酵罐内液体环流，促进银耳与香灰菌菌丝混合，获得的菌种不需要人工搅拌，银耳与香灰菌菌丝分布均匀。
[0019]（2）与现有固体菌种相比，本专利技术所获得的液体菌种每接种一瓶栽培瓶所用的材料成本减少12%，人工成本减少约70%，接种速度增加至3倍。
[0020]（3）本专利技术所获得的液体菌种1
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2天内即可萌发和定植，速度与现有固体菌种相当；8~9天菌丝长满栽培瓶，满瓶时间比现有固体菌种快1
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2天；25~26天开始形成耳基，出耳时间比现有固体菌种快1
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2天；所接种栽培瓶子实体成熟时间为43~45天，银耳栽培周期与固体菌种相当。
[0021]（4）本专利技术所获得的液体菌种所生产的银耳子实体蒂头很小，平均干重为固体菌种生产银耳蒂头的 50 ~70 %；所生产银耳子实体平均干重（去蒂头）与固体菌种生产银耳平均干重相当，或略高。
附图说明
[0022]图1 为实施例3制备的液体菌种图片；图2 为实施例3制备的液体菌种的菌丝显微照片（600 倍），包含香灰菌菌丝和银耳菌丝；图3 为实施例3制备的液体菌种接种至栽培瓶时照片（B），固体菌种（A）为对照；图4 为实施例3制备的液体菌种接种，菌丝长满栽培瓶时的照片（B），固体菌种（A）为对照；图5 为实施例3制备的液体菌种接种，原基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种银耳液体菌种的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：选取子实体生长至直径5 ~ 7 cm的银耳原种或培养8~9天的银耳生产种，作为液体菌种生产的出发菌种；取步骤a)所选取的出发菌种，在无菌条件下用接种刀将子实体和基质表面的老菌丝铲除，剩余菌种用银耳专用混种机，与香灰菌菌丝混合均匀，在19 ~23℃下恒温恢复培养1~2 天，得到银耳菌种；在发酵罐中加入液体培养基，灭菌后，接种步骤b)所得到的银耳菌种，在20~22℃下恒温培养5～6天，即得到银耳液体菌种；所述液体培养基的组成为：1000 ml培养基包含40 ~ 60 g 麸皮细粉、4 ~ 5 g 葡萄糖、6 ~ 9 g 蛋白胨、2 ~ 3 g 硫酸镁和4 ~ 6 g磷酸二氢钾，其余为水。2.根据权利要求1所述的银耳液体菌种的制备方法，其特征在于：所述液体培养基的制备步骤如下：将麸皮细粉加配方量的水，煮沸30 ~40 min，两层纱布过滤，滤液中加入葡萄糖、蛋白胨、硫酸镁和磷酸二氢钾，搅拌均匀后在压力0.11 MPa, 121 ℃下灭菌20~40 min。3.根据权利要求1或2所述的银耳液体菌种的制备方法，其特征在于：所述麸皮细粉为经过超微粉碎成粒径小于7...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄勇云，陈祥珍，雷德赐，黄暖云，
申请(专利权)人：福建省祥云生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：