一株高效解磷的犁头霉及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株高效解磷的犁头霉及其应用。本发明专利技术自死亡天牛中筛选到具有高效解磷作用的犁头霉(Absidia sp.)2

【技术实现步骤摘要】
一株高效解磷的犁头霉及其应用


[0001]本专利技术涉及一株高效解磷的犁头霉及其应用，属于微生物


技术介绍

[0002]目前，全世界13.19亿hm2耕地中有43％缺磷；据报道，至少有70％的磷肥进入土壤后被土壤固定，成为难以被作物吸收利用的固定形态。耕地土壤中磷素含量普遍不高，再加上土壤中对磷素的固定作用，导致磷肥利用效率较低，严重制约着高效农业、绿色农业的发展。
[0003]解磷菌是一类具有溶磷能力的微生物的总称，可将土壤中难溶性的磷化物转变成可被植物直接吸收利用的可溶性磷化物，在土壤磷资源循环利用过程中起重要作用，因而被广泛应用于微生物肥料的加工与生产，成为目前的研究热点。但目前已经筛选出且被证明具有解磷作用的真菌种类比较少，实际应用于生产的种类更少；在生产上应用比较多的具有解磷作用的真菌仅仅是菌根菌类。对解磷真菌的报道多集中于曲霉属和青霉属，如CN202111352520.5 公开了具有解磷作用得黑曲霉(Aspergillus niger)H1，CN201711354460.4公开了具有高效解磷、解钾、高效降解纤维素的能力的黑曲霉(Aspergillus niger)CS
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1，CN201911377062.3公开了一种溶磷青霉(Penicillium citrinum)PSF，CN201710197028.2公开了解磷青霉菌(Penicilliumcitrinum)QM
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6和QM
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10等，经检索未见有犁头霉属菌株具有解磷特性的报道。

技术实现思路

[0004]针对上述问题，本专利技术提供了一株高效解磷的犁头霉及其应用，该菌株为犁头霉(Absidiasp.)2
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5，具有高效解磷、增强土壤酶活、改善土壤特点。该菌株的发现有效填补了犁头霉属具有解磷特性的空缺，丰富了解磷真菌菌株资源库；以该菌为功能菌株可开发为微生物菌肥，对提高磷肥利用率、改善土壤，促进农业可持续发展具有重大意义。
[0005]本专利技术自死亡天牛中筛选到具有高效解磷作用的犁头霉(Absidia sp.)2
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5，该菌株已于 2021年8月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为中国北京，保藏编号为 CGMCC NO.23216。该菌株整个生长周期菌落呈绒毛状，气生菌丝发达，菌丝呈白色长毛状；具有典型的霉菌菌落特征。该菌株还通过增强土壤中脲酶和酸性磷酸酶的活性，进而具有改善土壤品质的特性。
[0006]本专利技术还提供了犁头霉(Absidia sp.)2
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5的发酵方法，其特征是，犁头霉2
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5菌株在发酵培养基中26～28℃下发酵培养36
‑
40h，得到发酵液。发酵培养基为：马铃薯200g/L，葡萄糖或蔗糖10～20g/L，蛋白胨10g/L，水1000mL，pH自然。
[0007]本专利技术还提供了上述犁头霉(Absidia sp.)2
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5以及发酵液在高效解磷方面的应用。
[0008]本专利技术还提供了上述犁头霉(Absidia sp.)2
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5以及发酵液在增强土壤酶活(脲酶和酸性磷酸酶)，改善土壤品质中的应用。
[0009]本专利技术还提供了一种提高土壤可溶性磷含量的方法，其特征是，将犁头霉2
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5发酵液施于土壤中。
[0010]本专利技术的技术效果是：
[0011]1、高效解磷
[0012]经该菌株处理含磷酸三钙的培养液后，其溶磷量高达2162.7mg/L；盆栽实验发现，经该菌株发酵液处理以磷酸三钙为唯一磷源的绿豆幼苗，其株高和根长较对照分别提高1.66倍和 2倍，表现出高效的解磷特性。
[0013]2、增强土壤酶活，改善土壤品质
[0014]犁头霉2
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5可以有效提高土壤中脲酶的活性，进而促进土壤的氮素代谢；也可显著增强酸性磷酸酶活性，从而促进土壤磷素水平的改善。
[0015]3、犁头霉2
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5菌株的发现有效填补了犁头霉属具有解磷特性的空缺，丰富了解磷真菌菌株资源库，且易于发酵生产，可开发为微生物菌肥，对提高磷肥利用率、改善土壤，促进农业可持续发展具有重大意义。
附图说明：
[0016]图1为犁头霉2
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5的菌落形态；
[0017]图2为犁头霉2
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5水解磷酸三钙产生的水解圈；
[0018]图3为磷标准曲线；
[0019]图4为犁头霉2
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5处理7d后发酵液中可溶性磷含量；
[0020]图5为犁头霉2
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5发酵液处理含磷酸三钙缺磷营养土绿豆长势；
[0021]图6为犁头霉2
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5发酵液处理含磷酸三钙缺磷营养土绿豆根长势；
[0022]图7为犁头霉2
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5对土壤脲酶活性影响；
[0023]图8为犁头霉2
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5对土壤酸性磷酸酶活性影响。
具体实施方式
[0024]实施例1：菌株的分离与鉴定
[0025]1.菌株2
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5分离
[0026]本专利技术的犁头霉菌株2
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5是从山东省烟台长岛马尾松林场采集的死亡的天牛中利用稀释平板法分离获得的。具体方法如下：
[0027]1.1分离菌样制备
[0028]将采集的死亡天牛用蒸馏水清洗干净，并用含75％酒精棉球表面消毒3～5次；在无菌条件下用剪刀将其剪碎放入装有10mL无菌水和少许灭过菌的石英砂的无菌研钵内，利用研磨棒充分研磨成匀浆，用移液枪吸取5mL于无菌试管中，即为菌样。
[0029]1.2稀释涂布
[0030]利用10倍稀释法将菌样依次稀释成10
‑1～10
‑6稀释度的菌样；分别从10
‑4、10
‑5和10
‑6稀释度的菌样中吸取100μL涂布于含有孟加拉红琼脂培养基平板上，每个梯度涂布三个平行。
[0031]孟加拉红琼脂培养基：蛋白胨5g，葡萄糖10g，磷酸二氢钾1g，无水硫酸镁0.5g，孟加拉红0.033g，氯霉素0.1g，琼脂20g，水1000mL。上述各成分(孟加拉红和氯霉素除外) 加
入蒸馏水中溶解后，再将孟加拉红溶液加入培养基中，分装后，121℃灭菌25min。倾注平板前，另用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基。
[0032]1.3培养纯化
[0033]在27℃培养36～40h后挑取培养基上的不同形态的真菌菌落于PDA培养基平板上，定时观察菌落生长情况；利用菌丝尖端分离法不断纯化菌株，确认单菌落后编号保存。PDA培养基：马铃薯200g，葡萄糖(或蔗糖)10～20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH自然。分装， 121℃灭菌25min。
[0034]通过上述方法，共计分离到6株真菌，分别编号为2...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株高效解磷的犁头霉菌株，其特征是，该菌株为犁头霉(Absidia sp.)2
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5，其保藏编号为CGMCC NO.23216。2.一种微生物发酵液，其特征是，以权利要求1所述的犁头霉(Absidia sp.)2
‑
5为主要有效成分。3.权利要求2所述的微生物发酵液的制备方法，其特征是，犁头霉(Absidia sp.)2
‑
5菌株在发酵培养基中26～28℃下发酵培养36
‑
40h，得到犁头霉2
‑
5发酵液。4.权利要求3所述的微生物发酵液的制备方法，其特征是，其发酵培养基为：马铃薯200g/L，葡萄糖或蔗糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨庆山，张淑静，王静，臧真荣，李永涛，贾明，任飞，马安宝，舒秀阁，梁静，孙超，
申请(专利权)人：山东省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：