一种鹿茸干细胞冻存和复苏方法技术

本发明专利技术涉及鹿茸干细胞研究技术领域，尤其涉及一种鹿茸干细胞冻存和复苏方法。本发明专利技术中的一种鹿茸干细胞冻存和复苏方法，以DMSO、人血白蛋白、海藻糖、右旋糖軒和生理氯化钠溶液制备冷冻保存液。其中DMSO能减少基因漂移，减缓细胞系的衰老，减少微生物污染。人血白蛋白具有结合、运输内源性及外源性质，利于保持干细胞性能。海藻糖和右旋糖軒在细胞冷冻、干燥、冻干过程中对细胞活性有着良好的保护作用。鹿茸干细胞经过与冷冻保存液混合、液氮冷冻、水浴复苏，有效保证了鹿茸干细胞的活性，延长其存储时间，方便对鹿茸干细胞的研究。方便对鹿茸干细胞的研究。方便对鹿茸干细胞的研究。

【技术实现步骤摘要】
一种鹿茸干细胞冻存和复苏方法


[0001]本专利技术涉及鹿茸干细胞研究
，尤其涉及一种鹿茸干细胞冻存和复苏方法。

技术介绍

[0002]鹿茸是哺乳动物中罕见的能够周期性完全再生的器官，是研究哺乳动物器官再生的绝好模型。而鹿茸的周期性再生是一个基于干细胞的过程，鹿茸干细胞(ASC)存在于生茸区骨膜(AP)与角柄骨膜(PP)中。鹿茸干细胞不像胚胎干细胞那样嵌合到整个宿主的组织中，也不像间充质干细胞那样完全消失，而是有限地嵌合到一些组织中，特别是嵌合到了生殖系统中。对再生医学有着重要意义。然而现有的冻存液组成相对单一，缺少必要的维持因子等，复苏后细胞活率较低。因此需要一种有效保持鹿茸干细胞鹿茸干细胞的冻存和复苏方法是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

技术实现思路

[0003]针对
技术介绍
中存在的问题，提出一种鹿茸干细胞冻存和复苏方法。本专利技术中的一种鹿茸干细胞冻存和复苏方法，以DMSO、人血白蛋白、海藻糖、右旋糖軒和生理氯化钠溶液制备冷冻保存液。其中DMSO能减少基因漂移，减缓细胞系的衰老，减少微生物污染。人血白蛋白具有结合、运输内源性及外源性质，利于保持干细胞性能。海藻糖和右旋糖軒在细胞冷冻、干燥、冻干过程中对细胞活性有着良好的保护作用。鹿茸干细胞经过与冷冻保存液混合、液氮冷冻、水浴复苏，有效保证了鹿茸干细胞的活性，延长其存储时间，方便对鹿茸干细胞的研究。
[0004]本专利技术提出一种鹿茸干细胞冻存和复苏方法，方法步骤包括：
[0005]S1、制备冷冻保护液；冷冻保护液的配置比例为20％
‑
30％的DMSO、2％
‑
7％的人血白蛋白、0.5％
‑
1％的海藻糖、10％
‑
12％的右旋糖軒和50％
‑
70％的生理氯化钠溶液；
[0006]S2、将鹿茸干细胞与S1中的冷冻保护液混合，得到细胞悬浊液，至于无菌冷冻管中；
[0007]S3、按照4℃1h、
‑
20℃1h、
‑
80℃1h、
‑
196℃1h的顺序进行液氮冻存；
[0008]S4、将冷冻管投入37℃水浴中，振荡直至细胞悬浊液完全融化；
[0009]S5、离心，缓冲液洗涤除去冷冻保护液。
[0010]优选的，冷冻保护液的配置比例为20％的DMSO、2％的人血白蛋白、0.5％的海藻糖、10％的右旋糖軒和7.5％的生理氯化钠溶液。
[0011]优选的，冷冻保护液的配置比例为30％的DMSO、7％的人血白蛋白、1％的海藻糖、10％的右旋糖軒和52％的生理氯化钠溶液。
[0012]优选的，冷冻保护液的配置比例为25％的DMSO、5％的人血白蛋白、0.5％的海藻糖、11％的右旋糖軒和58.5％的生理氯化钠溶液。
[0013]优选的，DMSO的浓度为10v/v％。
[0014]优选的，鹿茸干细胞来自生茸区骨膜与角柄骨膜中，干细胞的密度为1
‑
20
×
106细胞/m，为P1
‑
P9代干细胞。
[0015]优选的，人血白蛋白的浓度为20％。
[0016]优选的，细胞生长因子为替代血清。
[0017]优选的，缓冲液为PBS。
[0018]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益的技术效果：
[0019]本专利技术中的一种鹿茸干细胞冻存和复苏方法，以DMSO、人血白蛋白、海藻糖、右旋糖軒和生理氯化钠溶液制备冷冻保存液。其中DMSO能减少基因漂移，减缓细胞系的衰老，减少微生物污染。人血白蛋白具有结合、运输内源性及外源性质，利于保持干细胞性能。海藻糖和右旋糖軒在细胞冷冻、干燥、冻干过程中对细胞活性有着良好的保护作用。鹿茸干细胞经过与冷冻保存液混合、液氮冷冻、水浴复苏，有效保证了鹿茸干细胞的活性，延长其存储时间，方便对鹿茸干细胞的研究。
附图说明
[0020]图1为本专利技术一种实施例结构示意图。
具体实施方式
[0021]实施例一
[0022]如图1所示，本专利技术提出的一种鹿茸干细胞冻存和复苏方法，方法步骤包括：
[0023]S1、制备冷冻保护液；冷冻保护液的配置比例为20％
‑
30％的DMSO、2％
‑
7％的人血白蛋白、0.5％
‑
1％的海藻糖、10％
‑
12％的右旋糖軒和50％
‑
70％的生理氯化钠溶液；
[0024]S2、将鹿茸干细胞与S1中的冷冻保护液混合，得到细胞悬浊液，至于无菌冷冻管中；
[0025]S3、按照4℃1h、
‑
20℃1h、
‑
80℃1h、
‑
196℃1h的顺序进行液氮冻存；
[0026]S4、将冷冻管投入37℃水浴中，振荡直至细胞悬浊液完全融化；
[0027]S5、离心，缓冲液洗涤除去冷冻保护液。
[0028]实施例二
[0029]如图1所示，本专利技术提出的一种鹿茸干细胞冻存和复苏方法，方法步骤包括：
[0030]S1、制备冷冻保护液；冷冻保护液的配置比例为20％
‑
30％的DMSO、2％
‑
7％的人血白蛋白、0.5％
‑
1％的海藻糖、10％
‑
12％的右旋糖軒和50％
‑
70％的生理氯化钠溶液；
[0031]S2、将鹿茸干细胞与S1中的冷冻保护液混合，得到细胞悬浊液，至于无菌冷冻管中；
[0032]S3、按照4℃1h、
‑
20℃1h、
‑
80℃1h、
‑
196℃1h的顺序进行液氮冻存；
[0033]S4、将冷冻管投入37℃水浴中，振荡直至细胞悬浊液完全融化；
[0034]S5、离心，缓冲液洗涤除去冷冻保护液。
[0035]进一步的，冷冻保护液的配置比例为20％的DMSO、2％的人血白蛋白、0.5％的海藻糖、10％的右旋糖軒和7.5％的生理氯化钠溶液。
[0036]进一步的，鹿茸干细胞来自生茸区骨膜与角柄骨膜中，干细胞的密度为1
‑
20
×
106细胞/m，为P1
‑
P9代干细胞。人血白蛋白的浓度为20％。DMSO的浓度为10v/v％。细胞生长因
子为替代血清。缓冲液为PBS。
[0037]鹿茸的处理方法如下：取生长期10
‑
70天的鹿茸，无菌纱布去除鹿茸表面的灰尘及血污，备皮后用75％酒精进行消毒处理；在超净工作台中，用一次性无菌组织切片刀片切下3
‑
5cm厚的鹿茸尖端组织，置于无菌培养皿中，然后沿纵向将其分割为0.5
‑
lcm厚的薄片，舍弃最外侧的两片其余保留；薄片平放于无菌培养皿中，用刀片刮去表面血污后，沿着皮肤下结缔组织将皮层本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鹿茸干细胞冻存和复苏方法，其特征在于，方法步骤包括：S1、制备冷冻保护液；冷冻保护液的配置比例为20％
‑
30％的DMSO、2％
‑
7％的人血白蛋白、0.5％
‑
1％的海藻糖、10％
‑
12％的右旋糖軒和50％
‑
70％的生理氯化钠溶液；S2、将鹿茸干细胞与S1中的冷冻保护液混合，得到细胞悬浊液，至于无菌冷冻管中；S3、按照4℃1h、
‑
20℃1h、
‑
80℃1h、
‑
196℃1h的顺序进行液氮冻存；S4、将冷冻管投入37℃水浴中，振荡直至细胞悬浊液完全融化；S5、离心，缓冲液洗涤除去冷冻保护液。2.根据权利要求1所述的一种鹿茸干细胞冻存和复苏方法，其特征在于，冷冻保护液的配置比例为20％的DMSO、2％的人血白蛋白、0.5％的海藻糖、10％的右旋糖軒和7.5％的生理氯化钠溶液。3.根据权利要求1所述的一种鹿茸干细胞冻存和...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈丽晶，
申请(专利权)人：玺瑞生命科学深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：