一种高效的植物广靶向腺嘌呤单碱基编辑器及其构建与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种高效的植物广靶向腺嘌呤单碱基编辑器及其构建与应用。所述腺嘌呤单碱基编辑器包含水稻密码子序列偏好性优化的核酸序列编码的SpCas9变体融合蛋白TadA8e

【技术实现步骤摘要】
一种高效的植物广靶向腺嘌呤单碱基编辑器及其构建与应用


[0001]本专利技术属于植物生物
更具体地，涉及一种高效、广靶向识别几乎所有NNN
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PAM、更宽的编辑窗口、无靶序列偏好性、可检测的自靶向sgRNA效应、以及脱靶效率低的植物腺嘌呤单碱基编辑器pYL
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hyABE8e
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SpRY及其构建与应用。

技术介绍

[0002]基因编辑技术，尤其是由CRISPR/Cas9介导的基因编辑系统，通过在目标位点诱导DNA双链断裂(DSB)来实现基因的敲除破坏。然而，作物的重要农艺性状通常由关键基因的点突变或单核苷酸多态性(SNP)决定。碱基编辑工具，包括腺嘌呤碱基编辑器(ABEs)和胞嘧啶碱基编辑器(CBEs)(Komor et al.,2016,Nature,533:420
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424；Rees and Liu.,2018,19:770
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788)，它们由人工改造的单链DNA脱氨酶和Cas缺刻酶变体(Cas9n，D10A)组成，在不需要供体模板及不造成DSB本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于植物基因编辑的SpCas9变体融合蛋白TadA8e
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DBD
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SpRY，其特征在于，从N端到C端，依次包含脱氨酶TadA8e、DNA单链结合域DBD、SpCas9缺刻酶变体SpRYn；所述脱氨酶TadA8e的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述DNA单链结合域DBD如SEQ ID NO.10所示，所述SpCas9缺刻酶变体SpRYn序列如SEQ ID NO.11所示。2.根据权利要求1所述SpCas9变体融合蛋白TadA8e
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SpRY，其特征在于，还包含两个分别融合在TadA8e
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SpRY的N端和C端的核定位信号；优选地，所述核定位信号为bpNLS，其位于融合蛋白N端和C端的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.12所示。3.根据权利要求1所述SpCas9变体融合蛋白TadA8e
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SpRY，其特征在于，还包含分别连接脱氨酶TadA8e与DNA单链结合域DBD，DNA单链结合域DBD与SpCas9缺刻酶变体SpRYn的融合蛋白接头序列；优选地，所述柔性连接序列的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14所示。4.根据权利要求1所述SpCas9变体融合蛋白TadA8e
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SpRY，其特征在于，从N端到C端，依次包含核定位信号bpNLS、脱氨酶TadA8e、柔性连接序列linker 1、DNA单链结合域DBD、柔性连接序列linker 2、SpCas9缺刻酶变体SpRYn及核定位信号bpNLS，其氨基酸全序列如SEQ ID NO.16所示。5.一种多核苷酸序列，其特征在于，为编码权利要求1～4任一项所述SpCas9变体融合蛋白TadA8e
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【专利技术属性】
技术研发人员：祝钦泷，刘耀光，谭健韬，曾栋昌，赵延昌，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：