【技术实现步骤摘要】
检测人5型腺病毒中和抗体的试纸条、检测卡、试剂盒及其制备方法
[0001]本专利技术涉及生物医学工程
，尤其是涉及一种检测人5型腺病毒中和抗体的试纸条、试纸条的制备方法，及应用其的检测卡和试剂盒。
技术介绍
[0002]人类腺病毒 (HAdV) 是无包膜的双链 DNA 病毒，分为七个物种 (A
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G)。迄今为止，根据基因组序列已经识别了大约 100种类型。
[0003]腺病毒的衣壳为二十面体结构，由240个六邻体（hexon)、12个五邻体（penton)以及12根纤维蛋白（fiber)构成，除此之外还有其他一些小蛋白，如VI、VIII、IX、IIIa和IVa2等。六联体是形成病毒衣壳20个三角形面的主要蛋白，12个顶端是5个五联体亚单位和3个纤毛蛋白构成的复合物，12根纤毛以五联体蛋白为基底由衣壳表面伸出，纤毛顶端形成头节区（knob）。五联体和纤毛的头节区可与细胞表面的病毒受体结合，在病毒感染细胞过程中起着非常重要的作用。
[0004]HAdV 是具有多种组织趋向性的高度传染性病...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.检测人5型腺病毒中和抗体的试纸条，其特征在于：包括PVC底板，及设置于PVC底板上方依次排列的样品垫、荧光垫、层析膜及吸水垫；所述的层析膜是由一条检测线和一条质控线组成的固相硝酸纤维素膜，所述的检测线上包被有鼠抗人IgG抗体，所述的质控线上包被有羊抗兔IgG抗体，所述的荧光垫上包被有量子点标记的兔IgG和量子点标记的抗原；所述的量子点标记的抗原为量子点标记的人5型腺病毒Fiber knob蛋白、量子点标记的人5型腺病毒完整灭活病毒中的任意一种或两种。2.如权利要求1所述的检测人5型腺病毒中和抗体的试纸条，其特征在于：所述的人5型腺病毒Fiber knob蛋白包括SEQ ID NO.1氨基酸序列和SEQ ID NO.2核酸序列；将量子点标记的人5型腺病毒Fiber knob蛋白、量子点标记的人5型腺病毒完整灭活病毒和量子点标记的兔IgG均匀喷涂于荧光垫基材上后形成荧光垫，所述的荧光垫基材为玻璃纤维；喷量为4～6μL/cm，喷的条数为1
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5条；所述的层析膜粘结在PVC底板上，所述的吸水垫一侧粘贴在层析膜一侧，粘贴重叠部分为1～2mm，吸水垫的另一侧粘结在PVC底板上；所述的荧光垫粘贴在层析膜的另一侧，粘贴重叠部分为1～2mm，荧光垫的另一侧粘结在PVC底板上；所述的样品垫一侧粘贴荧光垫上，粘贴重叠部分为1～2mm，样品垫的另一侧粘贴在PVC底板上。3.一种检测人5型腺病毒中和抗体的试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下过程：a. 制备荧光垫分别制备量子点标记的兔IgG和量子点标记的抗原；然后再混合喷涂于荧光垫基材上得到荧光垫；所述的量子点标记的抗原为量子点标记的人5型腺病毒Fiber knob蛋白、量子点标记的人5型腺病毒完整灭活病毒中的任意一种或两种；b. 制备层析膜将鼠抗人IgG和羊抗兔IgG分别稀释后，利用划膜仪划线到硝酸纤维素膜上，形成具有检测线和质控线的层析膜；c. 制备试纸将样品垫、荧光垫、层析膜、吸水垫依次粘贴于PVC底板上得到所述试纸条。4.如权利要求3所述的检测人5型腺病毒中和抗体的试纸条的制备方法，其特征在于：量子点标记的方法包括以下步骤：S1.量子点活化和耦联取量子点悬液，分散于反应缓冲液中，混匀；加入偶联剂EDC，室温混匀孵育20～40分钟，10000～15000rpm离心，去上清后，将量子点分散在反应缓冲液中，超声分散均匀；S2.标记反应将人5型腺病毒Fiber knob蛋白、人5型腺病毒完整灭活病毒或兔IgG，各自分散在反应缓冲液中，将活化的量子点迅速加入反应，混匀，室温孵育20～40分钟；S3.后处理在8000～10000rpm离心5～10分钟，去除游离的蛋白；加入封闭液，超声分散，室温封闭1.5～2h，然后再在8000～10000rpm离心5～15分钟，去上清后，用量子点保存液重悬量子点。5.如权利要求4所述的检测人5型腺病毒中和抗体的试纸条的制备方法，其特征在于：
人5型腺病毒完整灭活病毒的制备方法为：采用TREx
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293细胞扩增Ad5病毒，通过CsCl密度梯度离心方法分离得到完整病毒，然后放置于56℃中灭活1小时；所述的人5型腺病毒Fiber knob蛋白采用体外表达，可形成三聚体，体外表达在大肠杆菌中表达，表达后，通过镍柱亲和纯化；设置量子点的激发波长为365
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450 nm，发射波长为620nm，量子点微球的粒径为80
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈凌，陈志龙，罗佳，池仁健，
申请(专利权)人：厦门联合呼吸健康研究院，
类型：发明
国别省市：
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