一种水产品中风险物质的快速筛查方法技术

本发明专利技术属于水产品质量安全技术领域，具体涉及一种水产品中风险物质的快速筛查方法。将39种农兽药物残留试样用乙腈(含0.1％乙酸)和乙酸乙酯(含0.1％乙酸)分别提取，分散固相萃取方法净化、浓缩后，经液质联用

【技术实现步骤摘要】
一种水产品中风险物质的快速筛查方法


[0001]本专利技术属于水产品质量安全
，具体涉及一种水产品中风险物质的快速筛查方法。

技术介绍

[0002]水产品养殖的不规范用药容易导致水产品兽药残留超标，水产品投料农药残留易导致水产品可食用部分农药残留。有害物质的不规范排放易造成水质中存在农药物残留，从而导致水产品质量存在安全风险。水产品中农兽药残留的市场监测使用的检测方法为国家标准推荐使用方法中有关农兽药残留的检测方法，即GB/T方法。在执行国标方法过程中存在以下两个问题：第一为方法适用性问题，即现有国标方法基质适用于水产品基质检测的很少；第二为多种类风险物质同时检测方法缺失问题。现有的农兽药检测方法均为同类药物残留检测方法，无法满足实际筛查过程中多种类高效筛查的需要。水产品中风险物质前处理为待测物质在进行仪器分析之前的必须实验操作步骤，前处理方法一般包括提取、净化和浓缩等。通常对待测物质的前处理方法多采用商业集成的净化小柱。农兽药残留常用净化柱分两类：一类为直接过滤型，另一类为吸附洗脱型。直接过滤型净化柱利用分子大小不同、离子交换等作用将待测样本溶液环境中的杂质过滤，达到净化目的。吸附洗脱型净化柱使用高分子聚合材料利用待测物极性差异，吸附待测溶液中的待测物后，改变溶液环境使待测物解吸以实现净化目的。上述两种净化小柱，其检测成本都相对高，价格成本还受净化小柱的处理量影响，且多种类待测物净化效果不佳。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供一种方法简单、检测成本低，能能够显著提高操作时效和检验周期，提高检测效率的水产品中风险物质的快速筛查方法，使其更好地适用于企业和市场监管部门，为水产品安全监测服务。
[0004]本专利技术建立了水产品(鱼、贝类、虾)基质下多种农兽药残留高通量快速筛查方法，适用于水产品基质，实现了高通量筛查，能够显著提高检测效率。
[0005]为实现上述目的，本专利技术技术方案如下：
[0006]一种水产品中39种农兽药物残留的筛查方法，所述39种农兽药物为：泰乐菌素、交沙霉素、妥布特罗、氯丙那林、克林霉素、诺氟沙星、氟罗沙星、依诺沙星、司帕沙星、氧氟沙星、洛美沙星、替米考星、莱克多巴胺、喷布特罗、红霉素、环丙沙星、磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪、磺胺多辛、磺胺甲恶唑、磺胺二甲异噁唑、苯甲酰磺胺、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉、磺胺苯吡唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、噻虫啉、吡虫啉、乙霉威、抗蚜威、林可霉素、沙拉沙星、达氟沙星；
[0007]所述方法包括以下步骤：
[0008](1)提取
[0009]准确称取已均质的水产品肌肉样品2.0g，置于50mL离心管内，依次加入3mL EDTA
缓冲溶液、10mL乙酸
‑
乙腈混合溶液、4.0g无水乙酸钠、1.0g氯化钠，涡旋混合1min，超声提取10min，静置10min，随后在0℃～4℃条件下，以9900r/min转速离心10min，得到第一次提取液，将提取后的残渣中加7mL乙酸
‑
乙酸乙酯混合溶液，超声提取10min，以9900r/min转速离心10min，得到第二次提取液，合并两次提取液；
[0010](2)净化
[0011]向步骤(1)得到的提取液中加入0.4g C18、0.4g乙二胺
‑
N
‑
丙基硅烷(PSA)、1.2g无水硫酸镁，涡旋混合2min，随后在0℃～4℃条件下，以9900r/min转速离心10mi n，取全部上清液于50mL离心管中，加入5mL正己烷，涡旋混合2min，在0℃～4℃条件下，以9900r/min转速离心4min，用正己烷提取，得到净化后的提取液；
[0012](3)浓缩及复溶
[0013]准确量取净化后的提取液5mL于10mL无盖玻璃试管中，进行浓缩、复溶，提取液过滤膜后，用高效液相色谱
‑
串联质谱法进行测定。
[0014]上述技术方案中，进一步地，所述乙酸
‑
乙腈混合溶液中乙酸的体积分数为0.1％。
[0015]上述技术方案中，进一步地，所述乙酸
‑
乙酸乙酯混合溶液中乙酸的体积分数为0.1％。
[0016]上述技术方案中，进一步地，所述步骤(2)中，用正己烷提取至少3次。
[0017]上述技术方案中，进一步地，所述步骤(3)中，常温下用N2将溶剂吹至干进行浓缩；加入乙酸的体积分数为0.1％的乙酸
‑
乙腈混合溶液进行复溶。
[0018]上述技术方案中，进一步地，所述步骤(3)中高效液相色谱
‑
串联质谱法采用液质联用仪：AB SCIEX 5500Q
‑
trap，外标法进行定量；
[0019]液相色谱
‑
串联质谱法测定条件为：
[0020]a.色谱柱：XDB C18 2.1
×
100mm,1.8μm；
[0021]b.流动相：A为2mM甲酸铵50mM甲酸水溶液，B为2mM甲酸铵50mM甲酸乙腈/水(95/5)溶液；
[0022]c.离子源：电喷雾离子源；
[0023]d.扫描方式：正离子扫描；
[0024]e.检测方式：多反应监测；
[0025]f.离子化电压：5500v；
[0026]g.雾化气：50psi；
[0027]h.辅助气：60psi；
[0028]i.气帘气压力：30psi；
[0029]j.雾化温度：600℃；
[0030]k.进样量：10μL；
[0031]l.流速：0.3mL/min。
[0032]上述技术方案中，进一步地，流动相的配制方法为：
[0033](1)流动相A：准确量取0.126g甲酸铵溶解于1000mL水中，向此溶液中加入2.3mL甲酸，摇匀后超声5min；
[0034](2)流动相B：准确量取0.126g甲酸铵溶解于50mL水中，向此溶液中加入950mL乙腈和2.3mL甲酸，摇匀后超声5min。
[0035]本专利技术的有益效果为：
[0036]本专利技术方法与商业集成净化小柱相比，其净化原理中除吸附外还利用了萃取和盐析。避免了使用净化小柱时，因溶液中颗粒大小差异造成的通路压力过大无法过筛，净化柱填料固定处理量受限，以及检测周期过长，步骤繁琐的问题；
[0037]本专利技术方法，操作简便、节约成本、耗时短、在保证回收率、精密度同时提高了检测效率；
[0038]本专利技术使用乙腈(含0.1％乙酸)和乙酸乙酯(含0.1％乙酸)分别提取，提取效率100％；
[0039]本专利技术提取过程中加入了EDTA能够使沙星类物质的分离度更好，改善回收率；
[0040]本专利技术净化过程中多步除脂，用到了C18和正己烷，进行多次除脂降低对液质联用仪分辨率和灵敏度的影响。
附图说明...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种水产品中39种农兽药物残留的筛查方法，其特征在于：所述39种农兽药物为：泰乐菌素、交沙霉素、妥布特罗、氯丙那林、克林霉素、诺氟沙星、氟罗沙星、依诺沙星、司帕沙星、氧氟沙星、洛美沙星、替米考星、莱克多巴胺、喷布特罗、红霉素、环丙沙星、磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪、磺胺多辛、磺胺甲恶唑、磺胺二甲异噁唑、苯甲酰磺胺、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉、磺胺苯吡唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、噻虫啉、吡虫啉、乙霉威、抗蚜威、林可霉素、沙拉沙星、达氟沙星；所述方法包括以下步骤：(1)提取准确称取已均质的水产品肌肉样品2.0g，置于50mL离心管内，依次加入3mL EDTA缓冲溶液、10mL乙酸
‑
乙腈混合溶液、4.0g无水乙酸钠、1.0g氯化钠，涡旋混合1min，超声提取10min，静置10min，随后在0℃～4℃条件下，以9900r/min转速离心8min，得到第一次提取液，将提取后的残渣中加7mL乙酸
‑
乙酸乙酯混合溶液，超声提取10min，以9900r/min转速离心10min，得到第二次提取液，合并两次提取液；(2)净化向步骤(1)得到的提取液中加入0.4g C18、0.4g乙二胺
‑
N
‑
丙基硅烷、1.2g无水硫酸镁，涡旋混合2min，随后在0℃～4℃条件下，以9900r/min转速离心10min，取全部上清液上清液于50mL离心管中，加入5mL正己烷，涡旋混合2min，在0℃～4℃条件下，以9900r/min转速离心4min，用正己烷提取，得到净化后的提取液；(3)浓缩及复溶准确量取净化后的提取液5mL于10mL无盖玻璃试管中，进行浓缩、复溶，提取液过滤膜后，用高效液相色谱
...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘怡君，蒋丹，刘梦遥，丁健，刘杨，赵菲，赵前程，吕泉，曲宝成，胡侠，
申请(专利权)人：大连海洋大学，
类型：发明
国别省市：